全 文 ：度计于 200～400 nm 波长扫描,结果肉桂酸最大吸
收波长为 267 nm ,故选定检测波长为 267 nm。
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复脉汤提取工艺的研究
李文宏,余日跃,陈　奇* ,汪　亮X
(江西中医学院,江西 南昌　330006)
摘　要:目的　优选复脉汤的提取工艺。方法　采用均匀设计试验法, 通过 HPLC 法测定提取液中甘草酸和人参皂
苷 Rb1的含量。结果　加醇量、提取温度影响具有显著性。复脉汤的最佳提取工艺为:用 10倍药材量的 50%乙醇于
60 ℃温浸 4 h。结论　按此工艺提取,复脉汤中有效成分甘草酸、人参皂苷 Rb1 含量高。
关键词: 复脉汤;提取工艺; 均匀试验;甘草酸; 人参皂苷 Rb1; 高效液相色谱
中图分类号: R284. 02; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0898 03
Study on extracting process of Fumai Decoction
*
LI Wen-hong , YU Ri-yue, CHEN Qi, WANG Liang
( Jiangx i Co lleg e of TCM , Nanchang 330006, China)
Abstract: Object　T o opt imize the ext ract ion condit ions of Fumai Decoct ion. Methods　U niform de-
sign test w as used, and the contents of glycyrr hizinic acid and g insenoside Rb1 in ex tr acted solvent w ere de-
term ined by HPLC. Results　T he ethano l v olume and the ext racting temperatur e in the uniform test im-
pacted the test remakably . The best ex t ract ion pro cess of Fumai Decoct ion as follow s: the r aw drugs were
ext racted by 10 t imes of 50% ethanol at 60℃ for 4 hours. Conclusion 　Glycyr rhet inic acid and g inseno-
side Rb1 contents in Fumai Decoction ar e higher according to the above ext raction pro cess.
Key words : Fumai Decoct ion; ext racting pro cess; uniform test ; g lycyrrhizinic acid; ginsenoside Rb1 ;
HPLC
* Fumai Decoct ion is a Chinese prescript ion made of Rad ix Glycy rrhiz ae Pr eparata, Radix P anacis
Quinquef ol ii, and Radix Ophiopogonis, etc . w ith the funct ion of supplementing qi and nour ishing y in.
　　复脉汤由炙甘草、西洋参、麦冬等药物组成,有
益气养阴复脉之功效, 主治气阴两虚型心动悸脉结
代,用于抗心律失常[ 1]。在以前的工作中,曾比较了
水煎煮法、水温浸法、饮片乙醇温浸法、粗粉乙醇温
浸法、渗漉法提取对复脉汤抗心律失常有效成分甘
草酸及人参皂苷 Rb1含量的影响。结果在尽可能相
似的条件下, 饮片乙醇温浸法提取所得目标成分含
量及总量最高,且总固体量相对较小。因此,本实验
选择饮片乙醇温浸法作为复脉汤的提取方法,采用
均匀设计试验法,以确定提取复脉汤中有效成分的
最佳工艺。
1　仪器及试药
Ag ilent 1100 series HPLC 仪, VWD紫外检测
器, HP chemstat ion。甲醇、乙腈为色谱纯,其他试剂
均为分析纯。甘草酸单铵盐对照品(中国药品生物制
品检定所, 批号: 731-9903)、人参皂苷 Rb1 对照品
(中国药品生物制品检定所,批号: 0704-200012)。甘
草 Gly cy rr hiz a ur alensi s Fisch. 由内蒙古医学院中
药系提供; 西洋参 Panax quinquef olium L.、麦冬
Ophiop ogon j aponicus ( Thunb. ) Ker -Gaw l. 药材购
·898· 中草药　Chinese T radit ional and Herbal Drugs　第 34 卷第 10 期 2003年 10 月
X 收稿日期: 2002-11-18基金项目:江西省自然基金课题( 0140010) ;江西省教育厅课题作者简介:李文宏( 1974—) ,男,江西南昌市人,讲师,硕士,现为北京中医药大学 2001级博士生,主要从事新药开发和中药药理研究。
E-mail: lw hong @jxtcmi. com
* 通讯作者　T el: ( 0791) 6825769　E-mail: chenqi666@ 263. net
自北京同仁堂药店, 其余药材均购自江西黄庆仁药
店。各药材均经我院中药鉴定教研室诸小兰教授鉴
定,符合《中华人民共和国药典》标准。药材均按《中
药炮制学》方法切片、制备。
2　方法与结果
2. 1　均匀试验设计:对影响较大的 4个因素:醇浓
度、加醇量、提取时间、提取温度进行考察, 每个因素
取 3个水平, 因素水平见表 1。采用 U 9 ( 94)均匀表安
排试验。每次试验各取两剂( 51 g 生药)药材做平
行,提取液浓缩、真空干燥,以干浸膏中甘草酸和人
参皂苷Rb1含量的总和为评价指标,数据采用 SPSS
fo r Windows 10. 0 软件处理。
表 1　试验因素水平表
Table 1　Factors and levels
水平
因　　素
A 乙醇浓
度/ %
B提取温
度/℃ C乙醇倍量 D 提取时间/ h
1 50 50 3. 0, 1. 5, 1. 5 2. 0, 1. 0, 1. 0
2 60 60 4. 0, 2. 0, 2. 0 3. 0, 1. 5, 1. 5
3 70 70 5. 0, 2. 5, 2. 5 4. 0, 2. 0, 2. 0
2. 2　色谱条件
2. 2. 1　甘草酸单铵盐 [ 2] :色谱柱: Hypersil ODS C18
柱( 250 mm×4. 6 mm , 5 Lm) ;柱温:室温;流动相:
甲醇-0. 2 mol / L 醋酸铵溶液-冰醋酸( 67∶33∶1) ;
流速: 1 mL/ m in;检测波长: 250 nm。
2. 2. 2　人参皂苷 Rb1 [ 2] : 色谱柱: Hyper sil ODS C18
柱( 250 mm×4. 6 mm, 5 Lm) ;柱温: 25 ℃; 流动相:
乙腈-水 ( 30∶70) ; 流速: 1 mL/ min; 检测波长:
203 nm。
2. 3　对照品溶液的制备:精密称取甘草酸单铵盐对
照品4. 75 mg ,置 10 mL 容量瓶中,加流动相溶解并
稀释至刻度。精密称取人参皂苷 Rb1对照品 2. 50
mg ,置 10 mL 容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度。
2. 4　供试品溶液的制备:精密称取各次试验的干浸
膏 0. 30 g ,置 10 mL 容量瓶中, 加流动相溶解并稀
释至刻度,摇匀, 0. 45 Lm 微孔滤膜滤过。取续滤液
作为甘草酸单铵盐供试品溶液[ 3, 4]。精密称取各次试
验的干浸膏 1. 50 g ,加入 45 mL 水饱和正丁醇溶液
于分液漏斗中振摇,加氨试液振摇提取 3 次,每次 5
mL,合并水液。用水饱和的正丁醇振摇提取 3次,每
次 10 mL, 合并正丁醇提取液, 用正丁醇饱和的水洗
涤 2次,每次 10 mL,合并水液, 再以水饱和的正丁
醇 10 mL 振摇提取。合并正丁醇提取液,蒸干, 残渣
加甲醇转移至 10 mL 量瓶中,并加甲醇至刻度, 摇
匀。微孔滤膜( 0. 45 Lm)滤过,取续滤液作为人参皂
苷 Rb1供试品溶液[ 2]。
2. 5　线性关系考察
2. 5. 1　甘草酸单铵盐:精密吸取甘草酸单铵盐对照
品溶液 5, 10, 15, 20, 25 LL, 在拟定色谱条件下进行
HPLC分析。以峰面积对进样量进行回归,得回归方
程: Y= 416. 63X + 21. 06, r= 0. 999 8,线性范围为
2. 375～11. 875 Lg ( 1 mg 甘草酸单铵盐对照品折合
成甘草酸为 0. 979 5 mg )。色谱图见图 1。
* -甘草酸单铵盐
* -ammonium glycyrrhizi
图 1　甘草酸单铵盐(A)和复脉汤(B)的 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC chromatograms of ammonium　　　
glycyrrhizi ( A) and Fumai Decoction (B)
2. 5. 2　人参皂苷 Rb1: 精密吸取人参皂苷 Rb1对照
品溶液 3, 5, 10, 15, 20 LL,在拟定色谱条件下进行
HPLC分析。以峰面积对进样量进行回归,得回归方
程: Y = 267. 25X - 30. 99, r= 0. 999 8,线性范围为
0. 75～5. 20 Lg。色谱图见图 2。
* -人参皂苷 Rb 1
* -g insenoside Rb1
图 2　人参皂苷 Rb1(A)和复脉汤(B)的 HPLC图谱
Fig. 2　HPLC chromatograms of ginsenoside Rb1 (A)
and Fumai Decoction ( B)
2. 6　精密度试验:精密吸取甘草酸单铵盐对照品溶
液 10 LL,连续进样 5次,峰面积 RSD为 1. 25%。精
密吸取人参皂苷Rb1 对照品溶液10 LL, 连续进样 5
次,峰面积 RSD 为 0. 98%。
2. 7　重现性试验:取均匀试验设计中的 3号试验提
取液(后简称 3号提取液) , 按甘草酸单铵盐供试品
溶液制备法制备成 5份供试品溶液, 分别进样 10
LL, 结果甘草酸单铵盐峰面积的RSD为2. 33%。取
3号提取液, 按人参皂苷Rb1供试品制备法制备成 5
份供试品溶液,分别进样 10 LL,以人参皂苷 Rb1 的
·899·中草药　Chinese T radit ional and Herbal Drugs　第 34 卷第 10 期 2003年 10 月
峰面积为指标,结果其峰面积的 RSD为 2. 51%。
2. 8　稳定性试验: 取 3号提取液, 制备成供试品溶
液,在 0. 5, 1, 2, 4, 8, 12 h分别进样10 LL, 测定甘草
酸单铵盐的峰面积,结果其 RSD为 2. 06%。取 3号
提取液,按人参皂苷 Rb1 供试品制备法制备成供试
品溶液,在0. 5, 1, 2, 4, 8, 12 h分别进样10 LL, 测定
人参皂苷Rb1的峰面积,结果其 RSD为 1. 83%。
2. 9　回收率试验: 以甘草酸单铵盐为测定指标,在
已知含量 3号试验供试品溶液中分别加入甘草酸单
铵盐对照品溶液(约为已知供试品中甘草酸单铵盐
量的80%, 100% , 120%) ,制成供试品溶液。测定甘
草酸单铵盐的含量,计算得平均回收率为 98. 43%,
RSD为 2. 40% ( n= 5)。以人参皂苷 Rb1为测定指
标,在已知含量 3号试验供试品溶液中分别加入人
参皂苷 Rb1对照品溶液(约为已知供试品中人参皂
苷 Rb1 量的 80%, 100% , 120%) ,制成供试品溶液。
测定人参皂苷 Rb1 含量, 计算得平均回收率为
100. 25%, RSD 为 2. 78% ( n= 5)。
2. 10　均匀试验结果: 取各供试品溶液 10 LL 注入
液相色谱仪, 分别测定甘草酸单铵盐及人参皂苷
Rb1 ,结果见表 2, 方差分析见表 3(由于因素 D 组间
极值很小,作误差处理)。方差分析表明, 因素 B, C
差异有显著性; 因素 A 对试验结果有一定影响但差
异并不具有显著性, 从节约成本角度考虑,选择 A 1;
因素 D 在考察范围内影响极小, 可任意选择, 选择
D1。因此, 各因素的最佳水平组合为 A 1B2C3D 1, 即用
10倍药材量( 5, 2. 5, 2. 5倍)的 50%乙醇于 60 ℃下
温浸 4 h ( 2, 1, 1 h)。
2. 11　验证试验:按上述所选定的工艺条件进行提
取,制备,供试品溶液用曲线法进行测定。结果甘草
酸单铵盐为 30. 25 mg / g , 人参皂苷 Rb1 为 2. 13
mg / g。
3　讨论
3. 1　提取次数也是一个影响因素,但一般药材提取
3次时其有效成分基本上已提取完全, 故本实验提
取工艺为温浸 3次。
3. 2　复脉汤由甘草、西洋参、麦冬等 5味药组成,药
理研究表明: 甘草酸、人参总皂苷、麦冬总皂苷是抗
心律失常的有效成分[ 5, 6]。纵观已有的研究报道,复
脉汤药材中有抗心律失常作用的有效成分基本上是
皂苷类。
　　　表 2　U9( 94)均匀试验方案和结果( n= 2)
Table 2　Project and results of U9( 94)
uniform test ( n= 2)
试验号 A B C D 含量/ ( mg·g
- 1)
甘草酸 人参皂苷 总和
1 1 3 1 2 24. 24 1. 47 25. 71
2 1 2 3 3 28. 24 2. 06 30. 30
3 3 2 1 1 29. 10 1. 73 30. 83
4 2 2 2 2 25. 55 2. 07 27. 62
5 2 1 1 3 22. 47 1. 72 24. 19
6 2 3 3 1 26. 41 1. 41 27. 82
7 1 1 2 1 20. 14 1. 36 21. 50
8 3 1 3 2 28. 36 1. 07 29. 43
9 3 3 2 3 25. 45 0. 94 26. 39
K 1 77. 51 75. 12 80. 73 80. 15
K 2 79. 63 88. 75 75. 51 82. 76
K 3 86. 65 79. 92 87. 55 80. 88
R 9. 14 13. 63 12. 04 2. 61
表 3　方差分析表
Table 3　Variance analysis
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 F 值 P 值
A 15. 42 2 7. 71 12. 39
B 32. 79 2 16. 39 26. 33 < 0. 05
C 24. 13 2 12. 07 19. 38 < 0. 05
D 1. 25 2 0. 63
　　F 0. 05( 2, 2) = 19. 00
3. 3　甘草药材中的甘草酸、西洋参总皂苷中人参皂
苷 Rb1 含量最高, 因此, 以甘草酸和人参皂苷 Rb1
作为复脉汤提取研究考察的目标成分, 可有效地控
制复脉汤工艺与制剂的质量。
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