全 文 ：制备方法处理并进行测定, 结果平均回收率为
96. 82% , RSD= 1. 38% ( n= 5)。
2. 9 样品分析: 按确定方法对 3批叶下珠样品进行
测定,结果见表 1。
表 1 叶下珠槲皮素测定结果( n= 5)
Table 1 Determination of quercetin in P. urinaria ( n= 5)
样品批号 槲皮素含量/ ( mg·g- 1) RSD/ %
1 0. 419
2 0. 420 3. 65
3 0. 417
3 讨论
3. 1 提取条件的选择:曾采用 70%乙醇提取[ 11] ,酸
水解后用醋酸乙酯萃取,甲醇定容的方法, 结果槲皮
素提取率低, 难分离;后改用甲醇提取,酸水解后直
接定容的方法,结果槲皮素提取率高且易于分离。
3. 2 检测波长的选择:曾有人采用 254[ 12] , 360[ 13] ,
370 nm
[ 14] 3 个波长测定槲皮素含量,作者对 3 个波
长进行了筛选。槲皮素在 254 nm 处有最大吸收,但
槲皮素出峰前的杂质吸收峰较大; 波长在 360 nm
处杂质吸收峰降到最低,而槲皮素仍有较大吸收,因
而在确保分离度的情况下,选择了吸收较大的波长
360 nm 进行测定。
3. 3 流动相的选择: 实验选用甲醇- 0. 4%磷酸溶
液作流动相。甲醇量增大,可使出峰较好,减少拖尾;
但量太大,分离效果下降。流动相中加入一定量的磷
酸,可改善峰形和分离度,在保证分离度的情况下应
尽量减少磷酸的用量, 这样可以增加柱的稳定性和
使用寿命。
3. 4 柱温的选择:柱温对样品的出峰时间及分离效
果有明显影响,曾采用室温, 30 ℃, 40 ℃的柱温,结
果柱温为 40 ℃时出峰时间适宜且分离效果较好。
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分光光度法测定白花蛇舌草中的钛含量
陈悦娇X
(仲恺农业技术学院 食品科学系,广东 广州 510225)
白花蛇舌草 H edyot is dif f usa Willd. 系茜草科
耳草属植物[ 1] ,广泛分布于亚热带地区。民间常用此
草药内服治疗小儿疳疾、毒蛇咬伤、癌肿及肠道疾
病。近年来临床上用于治疗多种恶性肿瘤[ 2]。白花蛇
舌草对淋巴细胞具有明显地刺激作用, 而且能刺激
巨噬细胞产生白细胞介素-6和肿瘤坏死因子, 说明
其有明显的免疫增强作用 [ 3] , 还能促进辐射损害的
白细胞恢复[ 4]。在微量元素定性和半定量分析结果
·1142· 中草药 Chinese T radit ional and Herbal Drugs 第 34 卷第 12 期 2003年 12 月
X 收稿日期: 2003-01-26作者简介:陈悦娇( 1970- ) ,女,广东潮阳人,实验师,在职硕士研究生,主要从事食品化学与分析及保健食品研究开发工作。
T el: 89003180 E-mail : cyuej iao@ 263. net
中发现 Fe, M n, M g, Al, Si, Ca, T i等 7种元素。T i
能刺激吞噬细胞, 使免疫能力增强,与中医采用该药
治疗癌症相一致[ 5]。因此,测出白花蛇舌草中钛的含
量对其应用有着一定的指导意义。本试验用二安替
比林甲烷分光光度法对白花蛇舌草中钛的测定作了
研究, 精密度、稳定性、回收率试验均得到较满意的
结果。
1 仪器、试剂与材料
1. 1 仪器与试剂: Bankmann 640型紫外-可见分光
光度计, 722光栅分光光度计。试剂均为分析纯。
1. 2 样品与标准品:白花蛇舌草分别购自广州市药
材公司、广东省中医院、清平药材市场和一般药店,
经鉴定为白花蛇舌草干燥全草。
钛标准液( GSB G62014-90) ,浓度为 1 000 Lg/
mL,介质为 10%硫酸。用时配成 10 Lg / mL 标准使
用液。
2%二安替比林甲烷溶液:准确称取 2. 0 g 二安
替比林甲烷粉末,用 1 mol/ L 的盐酸溶液溶解并定
容至 100 mL。
2 方法与结果
2. 1 标准曲线制作:准确移取 10 Lg/ mL 的钛标准
使用液 0, 2, 4, 6, 8, 10 mL (相当于含钛 0, 20, 40,
60, 80, 100 Lg)分别置于50 mL 容量瓶中, 分别标记
为 1, 2, 3, 4, 5, 6号, 各加 1∶1盐酸 20 mL、10%抗
坏血酸 1 mL, 摇匀, 各加 2%二安替比林甲烷 10
mL,用水稀释至刻度,摇匀静置 30 m in。取4号溶液
在紫外-可见分光光度计上扫描, 结果在波长 383
nm处有最大吸收峰,故确定最佳波长为 383 nm。然
后以1号溶液为空白,在波长 383 nm 下分别测定各
号溶液的吸光度。以钛为横坐标,吸光度为纵坐标,
绘制标准曲线,得标准曲线方程为Y= 0. 005 64X+
0. 000 1, C= 0. 998 7,线性范围为 0～100 Lg。
2. 2 样品处理: 取白花蛇舌草干草剪成 3～5 mm
长,准确称取 1～4 g ,置银坩埚碳化后,于高温电炉
中 550℃灼烧至完全灰化。取出冷却,加几滴乙醇润
湿,加 2 g 氢氧化钠后于马弗炉中从低温升至 700
℃左右, 保持 10 min。取出冷却, 将坩埚置于烧杯
中,用约 30 mL 沸水浸取溶块, 用 5%盐酸洗净坩
埚,加浓盐酸 10 mL 于浸取液中,低温蒸发至盐类
析出。移至沸水浴上蒸干并保持 30 min,使硅酸大
部分脱水,加浓盐酸15 mL,加盖表皿煮沸 5 min。冷
却后移入 50 mL 容量瓶中,用蒸馏水洗净烧杯并稀
释至刻度,摇匀,静置澄清。
准确移取澄清液 25 mL 于另一个容量瓶中,加
10%抗坏血酸至完全褪色。加 2%二安替比林甲烷 5
mL, 用水稀至刻度, 摇匀, 静置 30 min, 于 383 nm
波长下测吸光度。
2. 3 精密度试验:准确移取钛标准使用液 6 mL 共
5 份, 按 2. 1 项下方法处理, 分别测其吸光度, 得
RSD= 2. 76%。
2. 4 稳定性试验:标准液每一时间段分别测其吸光
度, 3天内 RSD= 0. 93%。
2. 5 重现性试验:准确称取同一批次的样品 5份,
按 2. 2项下方法进行操作, 测得样品中钛的平均含
量为 85. 7 Lg / g, RSD= 1. 49%( n= 5)。
2. 6 回收率试验: 准确称取药材公司样品约 3 g 共
3份,分别精密加入钛标准使用液 1. 0, 2. 0, 4. 0 mL
(相当于加入钛 10, 20, 40 Lg ) , 按样品处理方法进
行处理和测定, 用差减法求出钛的平均回收率为
97. 3%, RSD 为 1. 54%。
2. 7 样品测定: 按 2. 2项下方法进行测定,白花蛇
舌草中钛含量的测定结果见表 1。
表 1 白花蛇舌草中钛的含量( n= 3)
Table 1 Content of Ti in H. dif f usa ( n= 3)
样品 钛含量/ ( Lg·g- 1) RSD/ %
广州市药材公司 31. 1 7. 01
广东省中医院 86. 2 1. 26
清平药材市场 82. 6 1. 08
一般药店 30. 9 2. 46
3 讨论
3. 1 方法的选用:矿质元素的测定方法很多, 常用
的有化学分析法、比色法及原子吸收分光光度法。此
外,极谱法、离子选择电极法、荧光法等,但钛的测定
方法常见于测定矿物、岩石中的钛含量。植物中钛含
量的测定少见报道。本试验利用四价钛离子能与二
安替匹林甲烷生成黄色络合物的性质, 采用分光光
度法比色测定。通过实验结果分析,该法稳定性、精
密度和回收率都符合要求。
3. 2 排除样品中铁的影响:白花蛇舌草经灰化后,
灰分呈红褐色, 表明样品铁含量较高。为了排除铁离
子的影响, 在加入二安替比林甲烷之前要加入抗坏
血酸还原三价铁离子,直至溶液为无色透明。产地不
同的白花蛇舌草,铁含量也不同。在 4个样品中, 购
于省中医院与清平市场的样品中的铁含量较多, 灰
化后样品出现较多的红褐色, 配成溶液颜色也较深,
需加抗坏血酸 2～3 mL 才能使溶液无色透明; 另 2
个样品(购于药材公司与一般药店)的铁含量较少,
溶液为很浅的黄绿色, 1 mL 抗坏血酸足以使溶液变
·1143·中草药 Chinese T radit ional and Herbal Drugs 第 34 卷第 12 期 2003年 12 月
无色透明。
3. 3 钛含量的差异:本试验所用的样品来自几个不
同的地方,外观有差异,钛含量也相差较大 。4个样
品中除了广东省中医院的无结籽外,其他 3 个样品
都有结籽,但广东省中医院的白花蛇舌草并没有因
为无结籽而钛含量偏低,可见,钛的含量与有无结籽
无关。含量差异可能与物种差异、产地气候、地理环
境有关。
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HPLC测定几种杏仁中苦杏仁苷的含量
甄 攀X
(张家口医学院, 河北 张家口 075029)
杏仁为蔷薇科植物杏 P runus armeniaca L. 或
山杏P . armeniaca L. v ar . ansu Max im . 的干燥种
子,具有祛痰止咳、平喘、润肠等功效。主治外感咳
嗽、喘满、喉痹、肠燥便秘等疾病。苦杏仁苷为其主要
活性成分。苦杏仁苷遇水在苦杏仁苷酶作用下易酶
解或在酸性条件下会分解成氢氰酸和苯甲醛。氢氰
酸具有抑制中枢神经系统的作用, 过量时会出现中
毒现象。因此,了解不同品种、不同产地的杏仁中苦
杏仁苷的含量具有一定意义。
1 仪器与试药
Agilent 1100 Series 高效液 相色谱仪, HP
HPLC ( 3D)化学工作站。苦杏仁苷对照品由中国药
品生物制品检定所提供。苦杏仁购于张家口医学院
中医门诊部, 其他样品作者收集。甲醇为色谱纯试
剂,其他试剂均为分析纯试剂,水为二次蒸馏水。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件: YWG-C18 ( 10 Lm, 250 mm×4. 6
mm) ,流动相为水-甲醇-乙腈( 70∶25∶5) ;流速为
0. 6 mL/ m in, 柱温为 30 ℃,检测波长为 225 nm。
2. 2 色谱系统适用性:在以上色谱条件下检测,苦
杏仁苷色谱峰的保留时间为 9. 155 min。以苦杏仁
苷峰计算理论塔板数为 8 916 片/ m , 拖尾因子为
1. 04,与其前一组份的分离度为 1. 30。
2. 3 工作曲线的制备: 精密称取苦杏仁苷对照品
1. 64 mg , 用甲醇溶解并稀释至 2. 0 mL, 得 0. 82
mg/ mL 的对照品溶液。准确进样 0. 5, 1, 2, 3, 4, 5,
10, 15 LL。以峰面积 Y 对进样量 X 作图,得工作曲
线,回归方程为 Y= 299. 9X- 50. 01, r= 0. 998 9, 在
0. 41～12. 30 Lg 成良好的线性关系。
2. 4 精密度试验:用苦杏仁苷对照品溶液于一日内
重复进样 10次, 每次进样 10 LL,记录峰面积,计算
日内精密度。用同一份溶液,在相同的条件下连续 6
d 进样,每日进样 5 次, 每次进样 10 LL, 记录峰面
积, 计算日间精密度。日内和日间 RSD 分别为
1. 48%和 1. 80%。
2. 5 重现性试验:称取蔚县产离核杏仁 5份, 按上
述方法提取和测定。每份进样 5 次, 每次进样 10
LL。苦杏仁苷的峰面积的 RSD为 1. 22%。
2. 6 稳定性试验:利用同一份蔚县产离核杏仁提取
液于 0. 5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 48 h 测定, 每次进样 10
LL, 苦杏仁苷峰面积的RSD为0. 92%。说明杏仁提
取液在 48 h 内稳定。
2. 7 检测限和回收率: 检测限:用苦杏仁苷对照品
溶液逐渐稀释后进样。用峰高相当于 3倍噪音标准
差时对照品的浓度表示。经测定, 最低检测限为
1. 25 Lg/ mL。
回收率:向已知苦杏仁苷含量的样品中加入苦
杏仁苷对照品, 按上述方法提取和测定,计算得平均
·1144· 中草药 Chinese T radit ional and Herbal Drugs 第 34 卷第 12 期 2003年 12 月
X 收稿日期: 2003-03-18作者简介:甄 攀( 1965- ) ,女,河北曲阳人,副教授,硕士, 1988年毕业于河北大学化学系, 2000年取得硕士学位,主要从事天然药物活性成分研究。 Tel: ( 0313) 8041654