全 文 ：护生宝口服液对 H22肝癌小鼠抑癌作用的实验研究
陈建业 ,张　 ,陈俊杰 ,李瑞祥 ,曾益新
(四川大学 华西医学中心 ,四川 成都　 610041)
摘　要: 目的　研究护生宝 ( HSB)口服液对荷 H22肝癌小鼠实体瘤的抑瘤作用以及对荷瘤小鼠机体免疫功能的
影响 ,为 HSB的临床应用提供实验依据。方法　 3种剂量的 HSB和生理盐水 ig H22肝癌小鼠动物模型 ,观察各处
理组小鼠实体瘤重、脾重、胸腺重以及淋巴细胞增殖的变化情况。结果　 HSB实验组小鼠实体瘤重显著低于生理盐
水对照组 ,平均抑瘤率达 53. 28%。 同时 , HSB药物组小鼠的胸腺指数和淋巴细胞转化率明显高于对照组 (P <
0. 01)。结论　 HSB口服液对荷 H22肝癌小鼠的实体瘤具有较强的抑瘤作用 ,并能显著提高机体的免疫功能 ,促进
淋巴细胞增殖和免疫应答。
关键词: 护生宝 ;肿瘤抑制 ;免疫调节
中图分类号: R286. 91　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 10 0929 03
Inhibitory effect of HUSHENGBAO ORAL LIQUOR* on H 22 hepatic cancer mice
CHEN Jian-ye, ZHANG Xian, CHEN Jun-jie, LI Rui-xiang , ZENG Yi-xin
( West China Medica l Science Cente r, Sichuan Univ ersity, Chengdu 610041, China)
Key words: HU SHENGBAO ORAL LIQUOR; tumor inhibition; immuno regulation
*
HU SHENGBAO ORAL LIQUOR is a Chinese herbal prescription wi th the function of anti-Tumor.
　　中草药中存在着广泛的生物活性物质 ,如多糖
类、多酚类、黄酮类、皂苷类。它们所具有的抗氧化、
抗辐射、抑肿瘤、增强免疫功能的生物学活性 [1 ]近年
来引起了医学界的普遍关注。 中药复方护生宝
( HSB) 口服液是由黄芪、灵芝、绿茶等多味中药根
据传统中医理论配伍 ,经科学方法提炼精制而成的
中药制剂。研究证明 HSB具有明显的抗辐射作用 ,
是一种有效的辐射防护剂 [2 ]。为了进一步弄清 HSB
的其他药理功能 ,我们研究了护生宝的抑瘤作用及
其对机体免疫功能的影响 ,为临床应用提供可靠的
依据。
1　材料
1. 1　药物: HSB由黄芪、灵芝、绿茶等多味中药配
伍而成 ,各组成药均由中山医科大学肿瘤防治中心
中药房提供。
1. 2　动物与瘤株: 昆明种小鼠 ,由广东省卫生厅实
验动物中心提供 ,体重 18～ 22 g ,鼠龄 6～ 8周 ,雌
雄兼用。 H22小鼠肝癌 ,由中山医科大学肿瘤研究
所惠赠。
1. 3　试剂: RPM I 1640 (美国 Gibco公司 ) 按说明
配制 ,新生牛血清 ( NBS) (杭州四季青生物工程材
料研究所 ) ,淋巴细胞分离液 (上海试剂二厂 ) , 3 H-
TdR (上海原子能研究所 ) , ConA ( Sigma公司 )。
2　实验方法
2. 1　 HSB口服液的制备: 按处方将各组分混合 ,水
浴提取 ,浓缩 ,无菌双蒸水稀释 ,制成生药含量分别
为 2. 5, 1. 75和 1. 26 g /mL, 4℃保存备用。动物毒
理实验证明本品对动物安全无毒副作用。
2. 2　肿瘤接种:无菌条件下取生长 7～ 9 d传代接
种的 H22肝癌小鼠腹水 ,用生理盐水按 1∶ 1稀释
成细胞悬液 (细胞量约为 6× 106 /mL) ,每只小鼠右
腋皮下接种 0. 2 mL。
2. 3　动物分组:动物接种后 ,随机分成生理盐水对
照组和药物组。对照组 ig生理盐水 30 mL /kg· d;
HSB高、中、低剂量组分别 ig HSB 75, 52. 5, 37. 8
g /kg· d。动物接种 24 h后 ig给药 ,每天 1次 ,连续
给药 10 d。
2. 4　抑瘤率、胸腺指数和脾指数: 动物停药 48 h后
眼球放血 (肝素抗凝供免疫学检测 ) 处死动物 ,称
体重、瘤重、胸腺和脾重 ,计算抑瘤率 ( IR)、胸腺指
数 ( T I)和脾指数 ( SI)。
2. 5　淋巴细胞转化率:将肝素抗凝的眼球血约 0. 5
·929·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 10期
收稿日期: 2001-10-17作者简介:陈建业 ( 1961-) ,男 ,四川武胜县人 ,川北医学院生化副教授 ,四川大学华西医学中心分子生物学研究所在读博士 ,主要从事神经分子生物学及中草药治病机制的研究。 四川大学华西医学中心分子生物学研究所重组 DN A室　 Tel: ( 028) 85501265
* 中山医科大学肿瘤防治中心 (广州　 510060)
m L用淋巴细胞分离液分离外周淋巴细胞 ,洗涤 2
次 ,用 10% NBS RPM I 1640培养液调整细胞浓度
为 3× 106 /mL,在 96孔细胞培养板上加入细胞、
ConA及培养液 ,每个样本做 2个重复孔 , 37℃、
5% CO2条件下培养 48 h后每孔加入 3 H-TdR 18. 5
k Bq,再培养 18 h,用多头细胞收集器收集细胞 ,液
闪仪测定 cpm值 ,以对照组与药物组的 cpm值进
行显著性比较。
2. 6　统计分析: 所有数据均以 x± s表示 ,组间差异
显著性判断用 t检验。
3　实验结果
3. 1　 HSB对荷瘤小鼠体重增长的影响:结果如表 1
所示。 生理盐水对照组和各药物组小鼠体重与实验
前比较均有显著增加 ,但生理盐水对照组与药物组
之间以及不同剂量药物组之间小鼠体重的差异无显
著性 (P < 0. 05)。表明 HSB对荷瘤鼠体重无明显的
增强或抑制作用。
表 1　 HSB对荷瘤小鼠体重的影响 ( x± s )
组别 剂量
( g /kg)
动物 (只 ) 体　重 ( g )
始 末 始 末
体重变化
( g)
对照 - 13 13 20. 65± 2. 13 28. 55± 3. 65 + 7. 9
HSB 37. 8 13 13 21. 04± 3. 13 27. 74± 3. 13 + 6. 7
52. 5 13 13 20. 47± 1. 98 28. 07± 2. 99 + 7. 6
75. 0 13 13 21. 39± 2. 75 29. 69± 3. 71 + 8. 3
3. 2　 HSB对荷瘤鼠肿瘤生长的影响: 结果如图 1
和表 2所示。不同剂量的 HSB连续 ig给药 10 d,能
显著抑制小鼠肿瘤的生长 ( P < 0. 01) ,平均抑瘤率
高达 53. 28%。 随着 HSB给药剂量的增加 ,对肿瘤
的抑制作用有所增强 ,但在本实验剂量范围内未见
明显量效关系 (P> 0. 05)。说明 HSB在上述给药剂
量下对肿瘤均有显著抑制作用。
A-对照组　 B～ D-HSB低、中、高剂量组
图 1　 HSB对小鼠肝癌细胞瘤的影响
3. 3　 HSB对荷瘤小鼠胸腺和脾脏的影响:结果如
表 3所示。 与生理盐水对照组比较 , HSB能显著增
加荷瘤小鼠胸腺重量 ,提高胸腺指数 ( P < 0. 001) ,
但不同 HSB给药剂量间无显著差异 ( P> 0. 05)。
HSB能增加脾脏重量 ,升高脾指数 ,但无显著性
( P> 0. 05)。 提示 HSB可能具有增强胸腺活动 ,提
高免疫功能的作用。
表 2　 HSB对小鼠肝癌细胞的抑制作用 (x± s )
组别 剂量
( g /kg )
动物 (只 )
始 末
平均瘤重
( g)
抑瘤率
(% )
对照 - 13 13 1. 73± 0. 49
HSB 37. 8 13 13 0. 65± 0. 23 51. 09*
52. 5 13 13 0. 65± 0. 23 52. 55*
75. 0 13 13 0. 60± 0. 20 56. 20*
　　与对照组比较: * P < 0. 01
表 3　 HSB对荷瘤小鼠免疫器官的影响
组别 剂量
( g /kg )
脾脏重
( mg )
胸腺重
( mg )
脾
指数
胸腺
指数
对照 - 141. 5± 45. 3 56. 9± 14. 8 4. 9 1. 9
HSB 37. 8 147. 2± 23. 4 80. 8± 12. 1* 4. 9 1. 7*
52. 5 170. 1± 51. 1 82. 1± 21. 1* 5. 6 2. 7*
75. 0 183. 0± 72. 1 87. 0± 15. 0* 6. 0 2. 8*
　　与对照组比较: * P < 0. 001
3. 4　 HSB对荷瘤小鼠淋巴细胞增殖的影响: HSB
连续给药 10 d后能促进荷瘤小鼠淋巴细胞的增殖
反应 ,与生理盐水对照组比较差异极其显著 ( P <
0. 001) ,结果见表 4。 说明 HSB能显著促进荷瘤小
鼠淋巴细胞增殖。结合 3. 3结果 ,提示 HSB可能以
提高胸腺 T淋巴细胞的增殖活动为主 ,进而增强 T
淋巴细胞对肿瘤细胞的免疫作用。
表 4　 HSB对荷瘤小鼠淋巴细胞增殖的影响
组　别 剂　量
( g /kg)
动　物
(只 ) cpm值
对照 - 13 1 231± 131
HSB 37. 8 13 2 395± 176*
52. 5 13 2 441± 199*
75. 0 13 2 581± 187*
　　与对照组比较: * P < 0. 01
4　讨论
结果表明 HSB能显著抑制小鼠 H22肝癌实体
瘤的生长 ,增加免疫器官重量 ,提高胸腺指数和淋巴
细胞转化率 ,增强机体的免疫调节功能。 提示 HSB
不仅是有效的肿瘤抑制剂 ,而且具有明显的免疫增
强作用。
HSB选用益气固表消肿排脓的黄芪 ,补肝益
肾、扶正固本的灵芝以及生津止渴并治虚痨的绿茶
等多味中药组成复方 ,提取黄芪总黄酮 ( TFA)、黄
芪多糖 ( APS)、灵芝多糖 ( GLP)、绿茶多酚 ( GT P)
等作为主要的有效成分。研究表明 APS能促进胸腺
和脾脏生长 ,促进 ConA刺激的淋巴细胞转化 ,改
善淋巴细胞的超微结构 ,加速胸腺和脾脏损伤的修
复 ,增强机体免疫功能 [3, 4 ]。 GLP能增强小鼠巨噬细
胞的吞噬功能 ,诱导 DNA多聚酶的生成和白细胞
·930· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 10期
介素 2的分泌 ,促进免疫细胞中 DNA的合成及细
胞增殖 ,加速免疫应答过程 [5 ]。 G TP能有效抑制肿
瘤细胞生长 ,阻滞细胞周期的各个进程 ,提高胸腺指
数和脾指数 ,增强 T 淋巴细胞的粘瘤和钻瘤活
性 [6, 7 ]
肿瘤是由多种因素引起的恶性疾病 ,而机体的
免疫监视功能低下或抑制是导致肿瘤的重要诱因。
实验显示:荷瘤能引起小鼠胸腺严重萎缩 ,脾指数异
常 [8 ] , T细胞数量减少 ,功能抑制 ,抗瘤作用明显降
低 [9 ]。临床上肿瘤患者常伴有免疫系统机能低下 ,尤
其是胸腺在免疫机能低下时严重萎缩。本研究选用
既具有抑瘤作用又具有免疫增强功能的中药成分 ,
来抑制肿瘤的生长与繁殖 ,提升机体的免疫调节功
能 ,使 HSB具有高效的抑瘤作用和免疫增强效果 ,
为 HSB的临床应用提供了有意义的实验资料。
参考文献:
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百草降糖片对 α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究
茅彩萍 ,顾振纶 ,徐乃玉
(苏州大学医学院 药理研究室、苏州中药研究所 ,江苏 苏州　 215007)
　　α-葡萄糖苷酶 ( EC3. 2. 1. 20;α-glucosidase)通
过水解 α-1. 4糖苷键从淀粉和有关多糖的非还原端
切下葡萄糖 [1 ] ,人体对淀粉、糊精、蔗糖等碳水化合
物的利用吸收依赖于小肠刷状缘上该酶的活性 [2 ]。
目前已知 ,该酶抑制剂不仅可防治糖尿病、肥胖症 ,
还具有抗肿瘤和抗艾滋病 ( AIDS)病毒的作用 [ 3, 4]。
因此对 α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究 ,具有重要的
临床意义。
运用中医药治疗糖尿病 ,祖国医学已有两千多
年的临床经验 ,但其作用机制的研究尚在起步阶段。
百草降糖片是我所自行研制的降血糖药物 ,由黄芪、
黄连、魔芋、丹参等组成 ,具有益气养阴、补肾活血、
温经通脉之功效。本文通过建立酶-抑制剂模型 ,从
酶学的角度研究百草降糖片对 α-葡萄糖苷酶的抑
制活性 ,为探讨百草降糖片降血糖机制提供实验
依据。
1　材料
α-葡萄糖苷酶 , Sigma公司 ; PN PG ( 4-硝基酚 -
α-D-吡喃葡萄糖苷 ) , E. merck公司 ;还原型谷胱甘
肽 ,中国科学院上海生物化学研究所 ;中药购自药材
公司 ;其余试剂均为国产分析纯试剂。
2　方法
2. 1　中药水提物的制备:按配伍取组成百草降糖片
的中药材 200 g ,另取五味子、鬼箭羽、地黄、黄芪各
200 g ,分别浸于 800 mL蒸馏水中 ,捣碎 , 60℃ 水
提 10 h, 5 000 r /min离心 5 min,上清液活性炭脱
色 ,分别浓缩至 400 m L即得 0. 5 g /mL水提物百
草降糖片 (Ⅰ )、五味子 (Ⅱ )、鬼箭羽 (Ⅲ )、地黄
(Ⅳ )、黄芪 (Ⅴ )。
2. 2　α-葡萄糖苷酶活力测定 [1 ]:以 PN PG为底物 ,
反应系统为: 67 mmol /L磷酸钾缓冲液 ( pH6. 8)
1. 7 mL, 1 mg /mL谷胱甘肽 50μL, 20 mg /mLα-
葡萄糖苷酶 5μL, 37℃ 保温 10 min后 ,加入
0. 116 mol /L PN PG 50μL,于 37℃ 反应 10 min
后 ,加入 0. 1 mo l /L Na2 CO3终止液 10 m L,在 400
nm处测定在酶的作用下释放出硝基酚的量。
·931·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 10期
收稿日期: 2002-04-09基金项目:江苏省中医药管理局资助项目 ( No. 9948)作者简介:茅彩萍 ( 1968-) ,女 ,江苏苏州人 ,现苏州大学攻读心血管内科学博士学位 ,副教授 ,研究方向为中药药理学 ,主持省级课题 2项 ,发表科研论文 12篇。 Tel: 0512-5125270　 E-mail: s zzys@ publicl. sz. js. cn