全 文 ：上述色谱条件重复进样 5次 ,测定峰面积 ,结果
RSD= 0. 15% ,表明精密度良好。
3. 8　重现性试验:取本品 2. 5 g共 5份 ,精密称定 ,
同法测定。梓醇含量为 0. 495 mg /g , RSD= 2. 07%。
3. 9　回收率试验: 精密称取已知含量的样品 ,精密
加入梓醇对照品 ,按供试品溶液制备方法提取测定 ,
测得梓醇峰面积并计算含量 ,平均回收率为
97. 7% , RSD= 1. 54% (n= 5)。
3. 10　样品测定:分别精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各 10μL,按上述色谱条件测定 ,以外标一点
法计算样品中梓醇的含量 ,结果见表 1。
表 1　阿胶远志膏中梓醇含量 ( n= 3)
Table 1　 Content of catalpol in E jiao Yuanzh i
Extractum (n= 3)
批号 梓醇 /( mg· g- 1 ) RSD/%
000506 0. 359 2. 01
000508 0. 156 1. 68
000528 0. 200 0. 63
4　讨论
4. 1　当归中主要含有挥发油、有机酸、糖类、维生素
等多种成分 ,文献报道的定性方法以检测挥发油和
有机酸类的阿魏酸为主。 本品中难以检出挥发油成
分 ,同时阿魏酸鉴别阴性有干扰 ,经过反复摸索 ,建
立了当归其他特征成分的检测方法 ,也为当归中挥
发油、有机酸成分以外的其他当归的水溶性成分建
立了很好的薄层鉴别方法。
4. 2　在供试品溶液的制备中 ,经过多方筛选 ,确定
了用大孔吸附树脂柱进行分离纯化。经检验 ,水洗脱
时洗脱液中无梓醇 ,经过 200 mL 20%甲醇溶液的
洗脱 ,再用甲醇洗脱 ,经检测甲醇洗脱液中不含梓醇
成分 ,故确定收集 20%甲醇洗脱液部分。 在流动相
的选择上 ,根据文献报道 [1 ]进行了反复试验 ,当减少
水的含量而增加乙腈的含量时 ,虽然洗脱能力增强 ,
但是梓醇的色谱峰与其他色谱峰相互叠加分离不
开 ,干扰严重 ;当增加水的含量达到水 -乙腈 ( 99∶ 1)
时 ,虽然互不干扰 ,但是对梓醇的洗脱能力明显减
弱 ,几乎检测不出梓醇的色谱峰 ,故最终确定流动相
为水 -乙腈 ( 98. 5∶ 1. 5)。
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HPLC法测定兔血浆中蛇床子素的含量
安　芳 ,王书华 ,张丹参 ,张　力
(河北北方学院 化学药理学教研室 ,河北 张家口　 075029)
　　蛇床子素又名甲基欧芹酚 ( ostho l, Ost ) ,是从
伞形科植物蛇床成熟果实中提取的香豆素。国产蛇
床子主要含香豆素类 ,其中蛇床子素的含量最
高 [1～ 2 ]。蛇床子素具有抑制心脏、扩张血管、镇静、镇
痛作用、对记忆的保持作用、抗诱变、抗癌作用
等 [3～ 9 ]。蛇床子素的测定方法报道较多 ,但在组织中
和血液中采用 HPLC法测定蛇床子素的浓度方法
未见报道。 本实验以丹皮酚为内标 ,建立了 HPLC
法测定兔血浆样品中蛇床子素含量的分析方法 ,适
用于该药品的临床监控、药动学和生物利用度研究。
1　仪器与试药
　　 Agi lent 1100高效液相色谱仪 (美国 ) ; D— 37520
冷冻离心机 (德国 Heraeus) ; GR— 202AN D分析天
平 (日本 ) ; 756MC紫外可见分光光度计 (上海 )。
　　蛇床子素 (购自南京药物研究所植化室 ,纯度为
99% ) ,乙腈、甲醇为色谱纯 ;丹皮酚 (中国药品生物
制品检定所 ,批号 0708-9704) ;肝素钠 (北京市海淀
区微生物培养基制品厂 ) ;实验用水为三重蒸馏水。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱为 YWG C18 ( 10μm, 4. 6
mm× 250 mm) ,流动相为甲醇 -水 ( 80∶ 20) ,流速为
1 mL /min,检测波长为 322 nm,柱温为 25℃ ,进样
量为 10μL。
2. 2　检测波长选择: 精确称取蛇床子素 ,加入 N ,
N -二甲基甲酰胺溶解 ,聚山梨酯 80助溶 ,用生理盐
水稀释为 30μg /mL(N ,N -二甲基甲酰胺最终浓度
·43·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 1期 2004年 1月
收稿日期: 2003-04-18基金项目:河北省科技攻关项目 (d 00276147)作者简介:安　芳 ,男 ,河北省张家口市人 ,硕士 ,副教授 ,主要从事中药分析与提纯及体内检测的药理研究 ,发表论文数十篇 ,其中被
SC I收录 2篇。 Tel: ( 0313) 8045184　 E-mail: anfang 1965@ yahoo. com. cn
为 10% ,聚山梨酯 80的最终浓度为 2% )。精确称取
丹皮酚 ,加入乙腈配成 30μg /mL的溶液 ,在 200～
350 nm扫描 ,结果蛇床子素在 203, 257, 322 nm处
有 3个吸收峰 ,丹皮酚在 214, 277, 313 nm处有 3个
吸收峰。为减少干扰峰 ,经预试选择 322 nm作为检
测波长。
2. 3　给药方式与血浆样品处理: 实验前用 20%氨
基甲酸乙酯麻醉 ( 5 mL /kg )新西兰白兔 ,耳 iv蛇床
子素溶液 10 mg /kg ,于注射后不同时间分别由颈动
脉插管取血 0. 3 mL,置肝素管中 (内含 1%肝素 0. 5
μL, 80℃烘干 ) , 4℃、 10 000 r /min离心 5 min。取
上清液 0. 1 m L,加入 0. 2 mL乙腈 (内含 2μg /mL
丹皮酚 ) , 10 000 r /min离心 5 min,上清液过膜 ,取
10μL进样分析。
2. 4　方法专属性考察: 在本实验采用的色谱条件
下 ,蛇床子素的峰形良好 ,无杂峰干扰 ,见图 1。可见
本方法具有较高的专属性 ,灵敏度高 ,分离度较好 ,
能准确测定蛇床子素的浓度。
1-丹皮酚　 2-蛇床子素
1-paeonol　 2-os th ol
图 1　空白血浆 (A)、内标物丹皮酚 ( B)
和供试品 (C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of plasma ( A) , internal
substance paeonol (B) , and sample (C)
2. 5　标准曲线的制备:精确称取蛇床子素 ,按上法
配制 20μg /mL的蛇床子素溶液。 分别取兔新鲜血
浆 1 mL加入蛇床子素溶液 ,使其浓度分别为 0. 25,
0. 5, 1. 0, 2. 0, 4. 0, 8. 0, 12. 0μg /mL,按血样处理方
法进行处理分析。 以蛇床子素与内标物丹皮酚峰面
积比为纵坐标 ,蛇床子素浓度为横坐标 ,绘制标准曲
线。以 CASIOfx-570S上储存的直线回归方程进行
回归 ,得标准曲线方程 Y= 0. 241 0X+ 0. 010 1, r=
0. 999 98,线性范围为 0. 25～ 12μg /mL。
2. 6　回收率与精密度试验:用空白血浆分别配制含
蛇床子 3, 6, 12μg /mL的样品 ,按血样处理法处理 ,
在日内和日间对每种浓度重复进样 6次 ,记录峰面
积比 ,计算日内和日间 RSD。将峰面积比代入标准
曲线计算血浆浓度 ,计算回收率。结果见表 1。表明
蛇床子素的回收率在 97. 2%～ 99. 7% ,日内和日间
RSD均小于 4% ,符合目前生物分析方法指导原则
的要求。
表 1　血浆中蛇床子素的回收率与精密度试验 (n= 3)
Table 1　 Recovery and precious test
of osthol in plasma ( n= 3)
蛇床子
浓度 /
(μg·
mL- 1)
日内精密度与回收率
均值 /
(μg· mL- 1 )
RSD
/%
回收
率 /%
日间精密度与回收率
均值 /
(μg· mL- 1 )
RSD
/%
回收
率 /%
3. 0 2. 94± 0. 098 3. 30 98. 02 2. 95± 0. 100 3. 39 98. 33
6. 0 5. 83± 0. 120 2. 02 97. 21 5. 98± 0. 090 1. 53 98. 17
12. 0 11. 96± 0. 330 2. 76 99. 69 11. 89± 0. 300 2. 52 99. 08
3　讨论
　　本实验考察了乙腈-水 -三乙胺、甲醇 -水不同流
动相以及不同比例组成的流动相对分离效果的影
响 ,结果显示用甲醇-水 ( 80∶ 20)作为流动相 ,操作
省时、简便 ,精密度及重现性均较好 ,分离效果较好。
以丹皮酚为内标 ,利用 HPLC-UV法测定兔血浆中
蛇床子素的浓度 ,血浆中的内源性物质不干扰蛇床子
素及内标的测定 ,适于快速、大量的血浆样品分析。
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热烈庆祝《中草药》杂志荣获第二届国家期刊奖
·44· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 1期 2004年 1月