全 文 ：J S ichuan Univ ) N at Sci (四川大学学报#自然科学版 ) ,
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炮制对虎杖中白藜芦醇苷和大黄素的影响
江海燕, 朱 华,黄慧学,黄 拓,蒋利林X
(广西中医学院药学院,广西 南宁 530001)
摘 要:目的 探讨炮制对虎杖及其炮制品中有效成分的影响。方法 采用薄层色谱法对炮制品中白藜芦醇苷和
大黄素进行定性分析,并采用薄层扫谱法和 HPLC 法对大黄素进行定量分析。结果 酒炙品、醋炙品、盐炙品中大
黄素含量与生品相比有不同程度的增加。结论 不同炮制方法、辅料对虎杖中大黄素含量有一定的影响。
关键词:虎杖; 白藜芦醇苷;大黄素; 炮制;薄层扫描; 高效液相色谱
中图分类号: R2831 1; R2861 02 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2003) 05 0412-04
Effects of processing on piceid and emodin in Polygonum cuspidatum
JIANG Ha-i yan, ZHU Hua, HUANG Hu-i xue, HUANG T uo, JIANG L-i lin
( School of Pharmacy, Guangxi College of TCM , Nanning 530001, China)
Abstract: Object To investigate the ef fects on the act ive components in Polygonum cusp idatum Sieb. et
Zucc. and its different processed products. Methods T he qualitative analysis of piceid and emodin are taken by
T LC, and content of emodin w as determined by TLCS and HPLC. Results The contents of emodin signif-i
cant ly increased in samples fried with rice w ine, vinegar and salt compared w ith the crude. Conclusion Differ-
ent methods and ajuvants made a certain inf luence on the contents of emot ion in P . cusp idatum .
Key words: Polygonum cusp idatum Sieb. et Zucc. ; piceid; emodin; processing ; T LCS; HPLC
虎杖,又名大叶蛇总管( 5广东中草药6)、斑根紫
金龙(5植物名实图考6)、苦杖(5本草拾遗6)、阴阳莲
(5南宁市药物志6) , 为蓼科植物虎杖 Polygonum
cusp idatum Sieb. et Zucc. 的干燥块茎和根, 其性微
寒,味微苦。具有清热利湿、散瘀定痛、通便解毒、止
咳化痰等功效。用于关节痹痛,湿热黄疸, 经闭,
瘕,水火烫伤, 跌扑损伤, 痈肿疮毒, 咳嗽痰多[ 1]。
传统炮制方法首载于5千金翼方6: /去头脑,洗去土,
燥切0。5雷公炮制论6记载有/ 虎杖, 采得后, 细研,
却用虎杖叶裹一夜, 出煞干用0。5重修政和经史类
备用本草6记载: /虎杖取根,以汤入器中,渍五七日,
冷乃易, 日换三、四遍, 洗去涎, 暴干用之或再炮0。
现代炮制以/洗净, 闷润至透, 切厚片0的润品为主。
虎杖含蒽醌类和 类化合物, 其中蒽醌类成分大黄
素具有抗菌、抗肿瘤、解痉、杀灭钩端螺旋体的作用;
类成分白藜芦醇苷为其调血脂有效成分, 具有对
心血管、微循环系统的影响, 并且对血小板聚集、呼
吸系统有作用[ 2]。近年来虎杖的研究多限于化学
成分及药理研究,其炮制工艺研究则较少。本实验
对虎杖的生品、酒炙品、醋炙品和盐炙品进行了分
析,以期为探讨虎杖不同炮制品有效成分变化的规
律,完善虎杖饮片质量标准提供实验参考依据。
1 材料和仪器
虎杖药材饮片购于广西南宁药材站,经本院朱华
博士鉴定为蓼科植物虎杖 Polygonum cuspidatum
Sieb. et Zucc. 的干燥块茎和根; 白藜芦醇苷(批号
1535-200001)和大黄素(批号 0756-200009)对照品均
由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯,其
余均为分析纯。
LC-8A 高效液相色谱仪(日本岛津) , CS-9000
薄层扫描仪(日本岛津) , LG16-W 高速离心机(北京
医用离心机厂) , SB3200-T 超声器(上海 Branson) ,
#412# 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
X 收稿日期: 2002-06- 24基金项目:广西自然科学基金资助项目( 0135028)作者简介:江海燕( 1958 ) ) ,女,副教授,主持或承担省厅级课题 9项,已发表专业论文 20余篇,出版教材与专著 5部,主要研究方向为药品质量控制与中药炮制质量研究。Tel: ( 0771) 3137585 Fax: ( 0771) 3140360 E-mail: jhyw e@ sina. com
紫外分析仪(上海第三分析仪器厂) ,电子分析天平
(上海分析仪器厂) , 定量毛细管( U SA)。
2 样品的制备
生虎杖:取虎杖饮片约 100 g, 除去杂质, 粉碎,
过 65目筛,为淡黄色[ 1]。
酒炙品:取净虎杖饮片 100 g,加米酒 10 mL(加
水稀释 1倍) ,拌匀, 闷润至酒被吸尽后,置热锅中用
文火炒干, 有轻微的酒气时取出放凉, 置于烘箱中
60 e 烘 30 min, 取出趁热粉碎过 65 目筛, 称重, 为
黄褐色,得率为 91161% [ 3]。
醋炙品:取净虎杖饮片 100 g,加 20 mL米醋拌匀,
闷润至醋被吸尽后,置热锅中用文火炒干,具醋香味,
取出放凉。置于烘箱中60 e 烘 30 min,取出趁热粉碎
过65目筛,称重,为黄褐色,得率 93158% [ 3]。
盐炙品:取净虎杖饮片 100 g,加盐水 18 mL(盐 2
g,稀释9倍) ,拌匀,闷润至盐水被吸尽后,置热锅中用
中火炒干,取出放凉。置于烘箱中60 e 烘30min,取出
趁热粉碎过 65目筛,称重,为黄褐色,得率97105% [ 3]。
3 薄层鉴别
311 薄层板的制备: 硅胶 G 20 g , 加 017% CMC-
Na 溶液 60 mL, 用HJQ-A 型混浆器搅拌均匀,在 10
cm @ 20 cm的玻璃板上用薄层制板仪铺成一定厚度
的薄层板,晾干,在 105 e 活化 1 h。
312 白藜芦醇苷鉴别[ 4]
31211 供试液的制备:称取虎杖细粉约 015 g,置索
氏提取器中,加入甲醇 100 mL,加热回流提取 6 h,
提取液回收甲醇至小体积, 然后定量转移至 10 mL
量瓶中,加甲醇至稀释刻度即为样品溶液。
31212 白藜芦醇苷对照品溶液制备: 精密称定 419
mg 白藜芦醇苷对照品, 置 50 mL 容量瓶中,用甲醇
定容至刻度,摇匀,即得。
31213 薄层鉴别:精密吸取供试品溶液及对照品溶
液分别点于同一薄层板上, 以氯仿-丙酮-甲酸-水
( 4B4B015B012)为展开剂, 上行展开 12 cm, 在 254
nm 紫外灯下检视, 可见供试品色谱中白藜芦醇苷
的蓝紫色荧光斑点(图 1)。
313 大黄素鉴别[ 1]
31311 供试液制备: 取本品粉末约 015 g, 精密称
定,置 100 mL 量瓶中, 加甲醇约 90 mL,超声处理
(功率 120 W,频率 50 kHz) 30 min, 放冷,加甲醇至
刻度,摇匀,滤过。精密量取滤液 10 mL,置 150 mL
圆底烧瓶中, 挥去甲醇, 加 215 mol/ L 硫酸溶液 20
mL, 加热回流 1 h, 稍冷, 加氯仿60 mL,回流2 h, 冷
却,移置分液漏斗中, 用少量氯仿洗涤容器, 洗液并
入分液漏斗。分取氯仿层置 50 mL 量瓶中, 酸液用
少量氯仿提取, 氯仿液并入 50 mL 量瓶中, 加氯仿
至刻度,摇匀即得。
31312 大黄素对照品液制备: 取大黄素对照品
1015 mg,精密称定,置 100 mL 量瓶中, 加甲醇至刻
度,摇匀,即得。
31313 薄层鉴别: 吸取供试品及对照品液分别点于
同一薄层板上,选用石油醚( 30 e ~ 60 e )-甲酸乙酯
-甲酸( 15B5B1)的上层液为展开剂,上行展开 9 cm,紫
外光灯( 254 nm)下检视可见大黄素的荧光斑点,置氨
蒸气中熏后,日光下检视,斑点变为红色(图 1)。
1-酒炙品 2-醋炙品 3-盐炙品 4-生品 5-对照品
1-sam ple f ried w ith rice w ine 2-sample fried w ith vinegar
3-sample fried w ith salt 4-crude drug 5-reference substance
图 1 不同虎杖炮制品中白藜芦醇( A)
和大黄素( B)的 TLC图谱
Fig. 1 TLC chromatograms of piceid ( A) and emodin
( B) in different processed products of P. cuspi-
datum
4 TLCS法测定大黄素含量[ 5]
411 薄层条件选择:同 31313项。
412 对照品溶液的制备:同 31312项。
413 线性关系考察:分别精密吸取大黄素对照品溶
液 2, 4, 6, 8, 10 LL, 点于同一薄层板上,展开,晾干。
单波长扫描测定( KS= 440 nm ) , 以点样量为横坐标
( X ) ,吸收峰面积积分值为纵坐标( Y )作图, 经回归
处理, 回归方程为 Y = 89 005X + 11 66714, r =
01996 3。结果表明: 大黄素点样量在 0121~ 1105
Lg与峰面积呈良好的线性关系。
414 精密度考察:取同一对照品液 4 LL 在同一块
板上点样 5 次, 测定。大黄素斑点峰面积 RSD =
0184% ( n= 5)。另取同一对照品液 4 LL 分别点样
于不同薄层板上, 测定大黄素斑点的峰面积, RSD
= 0196%( n = 5)。
415 稳定性考察:精密吸取同一对照品溶液 4 LL,
在同一块薄层板上点样 9次,展开, 晾干。间隔 15,
#413#中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
15, 30, 60, 60, 60 min测定斑点吸收峰面积, 结果表
明样品斑点在 4 h内稳定, 其 RSD= 1135%。
416 加样回收测定:精密称取已测得含量的醋炙品
0125 g,添加大黄素对照品适量, 测定,计算回收率,
结果回收率为 10315% , RSD= 1176%( n= 5)。
417 样品测定: 取对照品溶液 2 LL 和 4 LL, 样品
溶液 6 LL,以外标两点法测定其大黄素的含量, 结
果见表 1。
表 1 4 种不同样品分析结果( n= 5)
Table 1 Analysis results in four different samples ( n= 5)
样 品 大黄素含量/ % RSD / %
酒炙品 1. 209 2. 32
醋炙品 1. 070 1. 69
盐炙品 0. 959 3. 51
生 品 0. 929 0. 997
5 HPLC法测定大黄素含量[ 6]
511 色谱条件: Alltima C18柱( 416 mm @ 150 mm, 5
Lm) ; 流动相: 甲醇-012%磷酸 ( 80B20) ; 流速: 110
mL/ min;检测波长: 254 nm; 柱温: 室温; 进样量: 20
LL。
512 线性关系: 精密称取大黄素对照品 10 mg, 置
100 mL 量瓶中,加乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀, 密
塞。精密吸取此溶液 015, 110, 210, 310, 410, 510
mL 于 10 mL 容量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,
密塞, 作为对照品稀释液。分别精密吸取对照品稀
释液 20 LL 测定,以峰面积为横坐标,溶液浓度为纵
坐标, 绘制标准曲线, 线性回归方程为 Y = 11283 6
@ 10- 5X - 01949 5, r = 01999 1,结果表明: 大黄素
在5~ 50 Lg/ mL 具有良好的线性关系。
513 稳定性试验:分别吸取虎杖生品样品液 20 LL
于 0, 4, 8, 12, 24 h测定, 结果表明大黄素含量 24 h
内基本稳定, RSD= 1161%。
514 精密度试验:精密吸取大黄素对照品溶液 20
LL, 重复进样 5次, 测定峰面积,其 RSD = 0144%。
515 重现性试验:取生品依法处理, 得 5 份供试品
液,进样测定,结果大黄素含量的 RSD = 1170%。
516 回收率试验:精密称取虎杖生品细粉约011 g,
分别定量加入 011 mg/ mL 的大黄素对照品乙醇溶
液, 按样品测定方法操作, 测定平均回收率为
97172% , RSD= 2199%( n= 5)。
517 样品测定: 取虎杖生品及各炮制品细粉,精密
称定约 011 g。分置于 10 mL 具塞离心管中, 加入
215 mol/ L 硫酸 5 mL,于超声器上混匀, 置沸水浴
中放置 30 min, 取出,加水 410 mL, 振荡使均匀,离
心 10 min( 2 500 r/ m in) , 上清液经滤纸滤过, 滤液
弃去,滤膜连离心沉淀反复加乙醇用超声波振荡提
取,共 8次,每次加乙醇 5 mL,超声波振荡 5 min,离
心 3 min( 2 000 r/ m in) , 收集上清液置于 50 mL 容
量瓶中, 定容至刻度, 摇匀, 取适量离心 10 m in
( 12 000 r/ min)后, 取上清液 20 LL 进样, 用外标二
点法计算,结果表明:酒炙品> 醋炙品> 盐炙品> 生
品,炮制后大黄素的含量与生品相比均有不同程度
的增加,酒炙品达 2413% ,见图 2及表 2。
A-大黄素 B-虎杖原药 C-盐炙品 D-醋炙品 E-酒炙品
A- emodin B- P . cusp idatum C-sample fried w ith salt D- sample fried with vinegar E-sample f ried w ith rice w ine
图 2 大黄素( A)和虎杖及其不同炮制品( B~ E)的 HPLC图谱
Fig. 2 HPLC chromatograms of emodin ( A) , P . cuspidatum ( B) and its processed products (C) E)
表 2 4 种不同样品 HPLC分析结果( n= 3)
Table 2 Results in four samples by HPLC ( n= 3)
样 品 大黄素/ % RSD / %
生 品 1. 406 0. 60
酒炙品 1. 735 1. 50
醋炙品 1. 670 1. 66
盐炙品 1. 549 1. 64
6 讨论
611 虎杖中的大黄素, 除游离部分外, 尚有部分以
大黄素-6-甲醚-8-D-葡萄糖苷、大黄素-8- D-葡萄糖
苷等苷类结构形式存在, 并且还有部分以大黄素为
母核的非苷类结构存在,因此在 HPLC 测定中采用
酸水解,并对水解液直接离心,离心沉淀反复加乙醇
用超声波振荡提取,以保证总大黄素提取完全。
612 HPLC 测定中曾采用文献[ 7] 报道的甲醇-
011%磷酸溶液( 85B15)为流动相, 对精密度和重现
性有一定的影响; 甲醇-1%磷酸溶液( 75B25)为流动
#414# 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
相出峰时间较长, 浪费试剂。采用甲醇-012% 磷酸
溶液( 80B20)为流动相, 节约时间,精密度和重现性
较好。
613 中医传统理论认为,酒性大热,有活血通络、行
药效之功。虎杖以酒炙, 酒力有助于增大其有效成
分在血脉中运行的速度和力量, 以增强虎杖散瘀定
痛的功效。实验中酒炙品中大黄素含量增加较多,
可能是虎杖吸入酒有助于大黄素的溶出。醋有活血
化瘀,引药归经等功效,可协同药物发挥药效。实验
中醋炙品中大黄素含量有增加, 可能是由于醋的主
要成分为醋酸, 结合态的大黄素在稀酸的作用下易
水解成为游离大黄素, 利于大黄素的提取。但实验
结果与传统的炮制可改变药效达/增效0理论是否相
吻合还有待进一步研究。
614 本实验结果表明,虎杖经酒炙、醋炙、盐炙后并
不影响白藜芦醇及大黄素含量, 且有利于有效成分
的溶出。初步建立了薄层扫描法和高效液相色谱法
测定虎杖不同炮制品中大黄素含量测定方法,操作
较为简单,重现性好,为制定虎杖现代炮制标准提供
了实验参考依据。
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HPLC法测定火麻仁油中大麻二酚的含量
张 岗,郭江宁,毕开顺 X
(沈阳药科大学药学院,辽宁 沈阳 110016)
摘 要:目的 建立 HPLC 法测定火麻仁油中大麻二酚含量的方法。方法 固定相为 I rregular-H-C18柱( 250 mm @
416 mm, 10 Lm) ,流动相为甲醇-乙腈-水-冰醋酸( 25B50B25B01 4) ,流速为 018 mL / min, 检测波长为 220 nm, 柱温为
室温。结果 大麻二酚在 11 2~ 916 Lg / mL 呈良好的线性关系( r = 01 999 4) ,平均回收率为 941 6% , RSD= 119%
( n= 9)。结论 本方法简便、准确、重现性好。
关键词:火麻仁油; 大麻二酚;高效液相色谱
中图分类号: R2861 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2003) 05 0415-03
Determination of cannabidiol in hemp seed oil by HPLC
ZHANG Gang, GU O Jiang-ning, BI Ka-i shun
( School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)
Abstract: Object To develop the analysis method to determine the content of cannabidiol in the hemp seed
oil by HPLC. Methods T he chromatographic condition w as Irregular-H-C18 column ( 250 mm @ 416 mm, 10
Lm) . A mixture of methano-l acetonitrile-w ater-acet ic acid ( 25B50B25B014) was used as the mobile phase with a
flow rate of 018 mL/ min and the detect ion w avelength w as 220 nm at room temperature. Results The calibra-
t ion curve for cannabidiol show ed good linear correlat ion within the concentrat ion range of 112 ) 916 Lg/ mL ( r
= 01999 4) . The average recovery and RSD was 9416% and 119% ( n = 9) respect ively. Conclusion T he
method is convenient, reliable and w ith good reappearance.
Key words: hemp seed oil; cannabidiol; HPLC
火麻仁为桑科植物大麻 Cannabis sat iva L. 的 干燥成熟果实, 有润燥滑肠通便之功效[ 1]。其中油
#415#中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
X 收稿日期: 2002-08- 09作者简介:张 岗( 1965 ) ) ,男,辽宁沈阳人,硕士研究生,研究方向为中药质量控制。 E- mail: gangzhang99@ sohu. com