全 文 ：品生物制品检定所提供。
样品:牙敏宁喷雾剂(杭州西泠医药保健品厂) ,
方法学研究使用的批号为 2000722。
2　实验方法与结果
2. 1　紫外吸收波长的研究: 黄芩苷对照品溶液在
277 nm处有最大吸收,故本含量测定项选择277 nm
作为检测波长。
2. 2　色谱条件: 色谱柱: Suntek Kromasil C18
( 250 mm×4. 6 mm, 5
m) ; 流动相: 甲醇-0. 5%磷
酸水溶液 ( 53∶47 ) ; 检测波长: 277 nm ; 流速:
1. 0 mL/ m in。样品中黄芩苷含量测定的流动相选择
甲醇-0. 5%磷酸水溶液( 53∶47)为流动相。黄芩苷
峰的 t R 约为13 min。
2. 3　线性关系考察: 精密吸取黄芩苷对照溶液
0. 051 5, 0. 103 0, 0. 206 0, 0. 412, 0. 618
g, 注入高
效液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定, 以黄芩苷
吸收峰面积的积分值为纵坐标 Y ,进样量 X (
g )为
横坐标, 绘制标准曲线, 线性回归方程: Y =
52 138. 9+ 1 727 153X , r = 0. 999 9, 在0. 051 5～
0. 618
g范围内呈线性关系。
2. 4　对照品溶液与供试品溶液的制备:对照品溶液
的制备: 精密称取黄芩苷对照品适量, 加 50%甲醇
水溶液,制成每1 mL含黄芩苷20. 6
g的溶液。
供试品溶液的制备: 取牙敏宁喷雾剂1. 0 mL,
置10 mL容量瓶中,加入 50%甲醇水溶液至刻度,摇
匀,经0. 45
m的微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
2. 5　精密度试验:精密吸取对照品溶液10
L,注入
高效液相色谱仪,测定 6次,得样品中黄芩苷的平均
含量为0. 184 mg / mL, RSD= 1. 90%。
2. 6　稳定性试验:精密吸取供试品溶液10
L,每间
隔60 min进样 1 次, 测定 5 次后, 再过24 h测定 1
次,结果表明供试品溶液在24 h内基本稳定, RSD =
2. 39%( n= 6)。
2. 7　重现性试验:取同批号牙敏宁喷雾剂 6份, 依
法测定, 结果平均含量为0. 178 mg / mL, RSD 为
2. 09%。
2. 8　回收率试验:精密吸取供试品0. 5 mL加入到
10 mL的容量瓶, 精密加入黄芩苷对照品适量, 加
50%甲醇水溶液稀释至刻度, 按供试品溶液制备法
制备, 依法测定, 平均回收率为 101. 87% , RSD 为
1. 49%( n= 6)。
2. 9　样品测定:精密吸取供试品溶液10
L,注入高
效液相色谱仪,测定黄芩苷含量, 结果 10批平均含
量为0. 17 mg / mL, RSD= 0. 98%。
2. 10　限量的制定: 根据 10 批样品测定结果: 每
1 mL牙敏宁喷雾剂含黄芩以黄芩苷( C21H 18O 11计)
不得少于0. 12 mg。
测定大黄蒽醌类成分样品制备方法的研究
魏俊峰1 ,王乃婕2,伍孝先1,王洪志1

( 1. 天津市中西医结合急腹症研究所, 天津　300100; 　2. 天津乐仁堂制药厂, 天津　300122)
中图分类号: T Q461, R927. 2　　　文献标识码 : B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 11 0993 03
　　大黄中含有多种化学成分, 其中以蒽醌衍生物
最能代表大黄的泻下、抑菌、止血等作用。此类成分
测定方法,本文参考文献 [ 1, 2] , 对用氯仿回流提取游
离型蒽醌和用硫酸水解蒽苷氯仿抽提的方法进行了
研究。
1　仪器和材料
　　仪器: Shimadzu LC-10A 高效液相色谱仪。
对照品: 芦荟大黄素 ( aloe-emodin ) , 大黄酸
( rhein) , 大黄素( emodin) , 大黄酚( chr ysophano l) ,
大黄素甲醚( physcion)购自中国药品生物制品检
定所。　　
试剂:甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均
为分析纯。
样品:本实验所用大黄药材样品由作者购自不
同产地, 经北京大学医学部药学院郑俊华教授鉴定
为蓼科植物掌叶大黄 Rheum palmatum L. 的干燥
根及根茎。
2　方法和结果
·993·中草药　Chinese T raditiona l and Herbal D rugs　2001 年第 32 卷第 11期

收稿日期: 2000-12-21
　　选择大黄药材中所含的游离型蒽醌和总蒽醌作
为测定的指标,分别对其样品制备方法进行了考查。
2. 1　色谱条件 [ 3] : 流动相: 甲醇-1%高氯酸水溶液
( 85∶15) ;检测波长: 254 nm ;柱温: 25 ℃; 流速: 1. 0
mL/ m in。
2. 2　游离型蒽醌样品制备方法筛选:采用氯仿回流
提取的方法, 分别对回流时间、溶剂的用量等条件进
行筛选。
2. 2. 1　回流时间的筛选:设计了 3个水平的回流时
间,水平 1: 30, 20, 20, 20 min; 水平 2: 60, 30, 30, 30
min;水平 3: 90, 30, 30, 30 min。结果见表 1。选用水
平 1的回流时间。
2. 2. 2　溶剂用量筛选:设计了 3个水平溶剂用量,
水平 1: 30, 20, 20, 20 mL;水平 2: 40, 20, 20, 20 mL;
水平 3: 50, 25, 25, 25 mL。结果见表 1。
根据表 1结果,选用水平 3溶剂用量。
试验基本确定游离型蒽醌样品制备方法,即取
大黄药材粉末(通过 4号筛) 0. 1 g ,精密称定,于 100
mL 圆底烧瓶中,第一次加入氯仿 50 mL,水浴回流
30 min,分取上清液,第二次加入氯仿 25 mL, 水浴
回流 20 m in, 分取上清液,反复提取至上清液无色,
合并,滤过,回收溶剂至干,用甲醇溶解残渣, 定容于
5 mL 量瓶中,过膜,取续滤液即得。
表 1　回流时间及溶媒用量筛选结果
(相当于大黄药材 mg/ g)
回流时间 溶媒用量
水平 1 2 3 1 2 3
aloe-em od in 0. 131 0. 124 0. 125 0. 131 0. 134 0. 134
rh ein 0. 172 0. 157 0. 163 0. 172 0. 175 0. 171
emodin 0. 403 0. 395 0. 403 0. 403 0. 398 0. 404
chrys ophan ol 1. 196 1. 196 1. 211 1. 196 1. 263 1. 286
physcion 0. 356 0. 355 0. 362 0. 356 0. 309 1. 279
total s 2. 258 2. 227 2. 264 2. 258 2. 279 2. 299
2. 3　总蒽醌样品制备方法筛选:采用将结合型蒽苷
用硫酸水解成游离型蒽醌的方法进行测定,分别对
水解用硫酸的浓度、用量、水解温度、水解时间等条
件进行了筛选试验。
2. 3. 1　水解用硫酸浓度筛选:设计了 3个水平的硫
酸浓度,水平 1: 10%; 水平 2: 20%; 水平 3: 30%。结
果见表 2。选用水平 2硫酸浓度。
表 2　水解用硫酸浓度及用量实验结果(相当于大黄药材 mg/ g)
酸浓度 酸用量
水平 1 2 3 1 2 3 4
aloe-em odin 3. 391 3. 611 3. 615 3. 441 3. 756 3. 654 3. 749
rhein 4. 002 4. 869 4. 759 4. 040 4. 531 4. 534 4. 932
emodin 5. 182 5. 233 5. 023 4. 417 4. 700 4. 637 4. 919
chrys oph an ol 8. 781 9. 147 8. 725 7. 320 7. 584 7. 385 7. 494
physcion 2. 619 2. 754 2. 570 2. 759 2. 758 2. 804 2. 851
total s 23. 975 25. 614 24. 692 21. 977 23. 329 23. 014 23. 944
2. 3. 2　水解硫酸用量筛选:设计了 4个水平的硫酸
用量,水平 1: 1. 5 mL;水平 2: 2. 5 mL;水平 3: 3. 5
mL; 水平 4: 5. 0 mL。结果见表 2。根据以上结果,决
定选用水平 4硫酸用量。
2. 3. 3　水解温度筛选: 设计了 3 个水平的水解温
度,水平 1: 70 ℃;水平 2: 80 ℃;水平 3: 90℃。结果
见表 3。选用水平 2水解温度。
表 3　水解温度及时间实验结果(相当于大黄药材 mg/ g)
水解温度 水解时间
水平 1 2 3 1 2 3
aloe-emodin 3. 795 4. 013 3. 790 3. 813 3. 794 3. 706
rhein 4. 543 5. 181 4. 730 4. 953 4. 701 5. 018
emodin 4. 997 5. 207 4. 860 5. 102 5. 207 5. 049
ch rysophanol 7. 772 8. 038 8. 002 8. 285 8. 478 8. 398
physcion 2. 902 3. 003 2. 881 2. 835 2. 907 2. 803
totals 24. 009 25. 442 24. 263 24. 988 25. 087 24. 974
2. 3. 4　水解时间筛选: 设计了 3 个水平的水解时
间,水平 1: 1 h;水平2: 2 h;水平 3: 3 h。结果见表3。
选用水平 2水解时间。
实验基本确定总蒽醌样品制备方法,即取大黄
药材粉末(通过 4号筛) 0. 06 g ,称定, 于 100 mL 圆
底烧瓶中,加入 20%硫酸 5. 0 mL,室温振摇 5 min,
加入氯仿 50 mL, 水浴加热( 80 ℃)回流水解 2 h, 放
至室温, 分取氯仿层, 第二次加入氯仿 20 mL 振摇,
分取氯仿层,反复抽得至氯仿层无色,合并,加入适
量无水硫酸钠脱水, 滤过, 用少量氯仿洗涤残渣, 回
收溶剂至干,用甲醇溶解残渣, 定容于 25 mL 量瓶
中,过膜, 取续滤液即得。
2. 4　重复性试验:按照 2. 2和 2. 3项下确定的样品
制备方法分别制备 6份样品, 结果见表 4。
2. 5　回收率试验:采用加样回收法, 取已知含量的
大黄药材粉末, 分别加入一定量的对照品混合溶液
依法测定回收率,结果见表 4。
以上重复性试验数据说明除大黄酸 RSD 值偏
高外,其余 4种成分均符合要求,表明本法重复性良
好。加样回收率试验数据说明除大黄酸偏高外,其余
·994· 中草药　Chinese T raditiona l and Herbal D rugs　2001 年第 32 卷第 11期
4种成分均小于 2%,表明本方法可行。
2. 6　样品测定:通过上述试验决定大黄药材中游离
型蒽醌和总蒽醌的含量均以芦荟大黄素、大黄素、大
黄酚、大黄素甲醚含量之和计,我们收集了 9批大黄
药材,根据上述实验方法,分别测定其游离型蒽醌和
总蒽醌的含量,以此确定大黄药材的含量限度。含量
测定结果见表 5。
根据上述 9批大黄药材的测定结果, 个子货
( 1～5)中游离型蒽醌含量在 0. 528～5. 365 mg / g 之
间, 总蒽醌含量在 15. 850～26. 822 mg/ g 之间, 饮
片( 6～9)中游离型蒽醌含量在 4. 804～7. 723 mg/ g
之间,总蒽醌含量在 15. 923～18. 403 mg / g 之间。
表 4　重复性试验和加样回收率试验结果
试验项目 RSD ( % )
aloe-emodin rhein emodin chrysoph a nol phys cion totals
重复性试验 游离型蒽醌 1. 38 2. 68 0. 93 0. 68 0. 65 0. 56
总蒽醌 1. 58 3. 14 0. 23 0. 27 0. 85 0. 76
加样回收率试验 游离型蒽醌 1. 83 12. 01 1. 32 0. 98 0. 76 0. 76
总蒽醌 1. 92 4. 41 0. 60 1. 04 1. 96 1. 00
表 5　9批药材含量测定结果 (mg/ g)
游离蒽醌 总蒽醌
批次 aloe-
em odin
emodin
chryso-
phanol
phys-
cion
totals
aloe-
emodin
em odin
ch ryso-
ph anol
p hys-
cion
totals
1 0. 132 0. 492 1. 123 0. 355 2. 102 4. 003 4. 730 8. 383 3. 169 20. 285
2 0. 132 0. 499 1. 139 0. 360 2. 130 2. 762 4. 942 7. 349 2. 773 17. 826
3 0. 343 0. 929 3. 194 0. 898 5. 364 3. 756 5. 980 12. 492 4. 594 26. 822
4 0. 049 0. 172 0. 277 0. 076 0. 574 3. 560 8. 461 8. 664 2. 224 22. 909
5 0. 038 0. 099 0. 279 0. 112 0. 528 2. 684 3. 480 7. 006 2. 680 15. 850
6 0. 420 1. 031 3. 035 0. 887 5. 373 2. 398 3. 606 7. 700 2. 219 15. 923
7 0. 324 0. 976 2. 676 0. 828 4. 804 2. 453 4. 424 7. 862 2. 434 17. 173
8 0. 565 1. 303 4. 540 1. 315 7. 723 2. 694 3. 883 9. 213 2. 613 18. 403
9 0. 462 1. 178 3. 819 1. 127 6. 586 2. 540 3. 829 9. 056 2. 488 17. 913
3　结论
3. 1　在总蒽醌样品制备方法的试验中, 用水浴加
热,受热均匀且温度容易控制,效果较好。
3. 2　在文献[ 3～5]中大多采用同一份样品分别测定
游离型和结合型蒽醌的方法, 但通过试验发现在制
备游离型蒽醌样品的过程中,需离心、滤过等操作,
影响结合型蒽醌测定的准确性, 本研究采用分别取
样测定游离型和总蒽醌含量的方法,避免了上述缺
点,使操作更简单、易行。
3. 3　通过回收率实验发现, 大黄酸的回收率不合
格,游离型蒽醌样品较低( 68. 54%) , 总蒽醌样品较
高( 106. 66% ) ,有待进一步研究。
3. 4　在《中国药典》2000年版一部大黄项下含量测
定项仅测定其总蒽醌的含量, 而且仅以大黄素和大
黄酚的含量之和计算, 并不能全面评价大黄的品质,
本研究分别测定其游离型和总蒽醌的含量, 并以 4
种主要成分的含量作为标准, 对评价大黄药材的质
量起到一定的作用。
3. 5　通过对 9批药材样品的测定发现大黄个子货
和饮片之间游离型蒽醌的含量差别较大,说明在大
黄炮制过程中有结合型蒽苷水解成为游离型蒽醌,
使具有泻下作用的结合型蒽苷的含量降低,建议在
大黄饮片切制应减少浸泡时间,以保证药效。
参考文献:
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醌各自含量的测定[ J ] . 北京医科大学学报, 1998, 30( 6)增刊:
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层析[ J ] . 药学学报, 1963, 10( 12) : 725-730.
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