全 文 ：做 P C R产物 的限制性片断长度多态性
分析 (P C R一 RP F L ), 应注意以下 2 点 : 1) 选适
宜的引物 : 为 了便于酶切位点的分析 ,最好选
择扩增条带少 、 信号强 、 分子量大 、 稳定性好
的引物 。 2) 选合适的限制性 内切酶 : 首先 , 应
从内切酶 的不 同类 型缓 冲 液 ( p H 值 和 K 、
N a
、
M g
、
C l 离子强 度不 同 ) 中 , 挑选 与 P C R
反应所用缓冲液相匹配的缓冲液及其适合这
种缓冲液 的酶 。其次 , 应选择识别序列较短的
酶做工具 , 以便获得较多的切点 , 例 如 , 按概
率计算识别 4 碱基的限制性内切酶在 2 5 6 b p
的 D N A 片段有 1 个切点 , 1 kb 的 D N A 片段
概率上有 3 个一 4 个切点 。
参 考 文 献
1 P a l m e r J D
, e t a l
.
T h e o r A P P I G e n e t
,
1 9 8 3 ; 6 5
:
1 8 1
3 W i lli
a m s J G
, e t a l
.
N u e l A e id s R e s
,
1 9 9 0 ; 1 8
:
6 5 3 1
3 W
e l s h J
, e t a l
.
N u e l A c id s R e s
,
1 9 9 0 , 1 8
:
7 2 13
4 P i e t e r V o s
, e t a l
.
N u e l A e i d s R e s
,
1 9 9 5 ; 2 3
:
4 4 0 7
5 G u s t a v o C a e t a n o
一
A n o l le s
, e t a l
.
B i o T e e h n o lo g y
, 1 9 9 1 ; 9
( 6 )
:
5 5 3
6 汪小全 , 等 . 银杉 的遗传多 样性及 系统位置 的研 究—兼论松科 的系统分子 学 : 〔博士学位论文 〕. 北京 : 中国科
学院植物研究所 , 1 9 9 7 : 2 ,
7 S h a w PC
, e t a l
.
P la n t a M e d
,
19 9 5 ; 6 1
:
4 6 6
8 O z e ki Y
, e t a l
.
N a t u r a l M e d
,
1 9 9 6 ; 5 0
:
2 4
9 马小军 , 等 . 中草药 , 1 9 98 , ( 3 ) : 1 9 1
1 0 P a u l W
.
S k r o e h
, e t a l
.
T h e R a p id C y e li s t
,
1 9 8 5 ; 1 ( 1 )
:
9
( 1 9 9 7
一
1 2
一 0 8 收稿 )
P C R
一
R F L P M e t h o d o n G i n s e n g ( aP
n a x g i n s e n g )
,
M
a
X i
a o
j
u n , Z
W
a n g X i
a o q u a n a n d `X i a o P e ig e n ( ` I n s t i t u t e o f M e d ie i n a l P la n t D e v e l o p m e n t
,
C h in
e s e
A
-
e a d e m y o f M
e
d i
e a
l S
e i e n e e s
,
B
e iji n g 1 0 0 0 9 4
, `
I n
s t i t u t e o f oB
t a n y
,
C h i n
e s e
A
e a d e m y o f S e i e n e e s
,
B
e i si n g
1 0 0 0 9 3 )
A b s t r ac t I n o
r d e r t o id e n t i fy h o m o g e n e it y o f R A P D ( r a n d o m a m p li f i e d p o l y m o r p }, ie D N A ) p r o d u c t s
a n d t o m a k e f u l l u s e o f R A P D m a r k e r s fo r t h e s t u d y o f g i n s e n g g e r m p la s m
,
it w
a s t r i e d fo r t h e f i r s t t im e
, t o
d i g e s t P C R p r o d u e t s p r o d u e e d b y e a p i l la r y P C R a n d t h e ir r e s t r ie t io n s i t e s d e t e r m in e d e f f e e t iv e ly
.
R
e s u lt s
s h o w e d t h a t P C R
一
R F L P w a s a s im p le a n d u s e f u l m e t h o d fo r s e r e e n i n g d i s t i n e t i v e m o l e e u la r m a r k e r s o n
P
a n a x g in s e n g C
.
A
.
M
e y
,
w h ie h p r o v id e d a i 、 e w t o o l f o r t h e s t u d y o f g e r m p l a s m o f m e d i e i n a l p l a n t s
.
K e y w o r d s P
a n a x g i n s e n g C
.
A
.
M
e y g e r m p l a s m P C R
一
R F L P
柿叶鉴别的实验研究
广西中医学院 (南宁 530 0 0 1 ) 甄汉深 ` 张三平 “ 唐 维宏 “ “
摘 要 为更好地利用柿 叶这一资源 和评价其质量 提供科学依据 , 采 用性状 、 显微 、 化学 、 可见紫
外分光光度法 、 薄层色谱法对柿 叶进行鉴别研究 。 结果表 明 : 这些方法可 用于柿叶的质量控 制 。
关健词 柿叶 鉴别 显微 理化
柿叶为柿科植物柿 及口 s p , or : ak ik L . .f
的干燥 叶 。 中医传统认为其味苦 、 酸 、 涩 , 性
凉 ,具有清肺止咳 ,凉血止血 , 活血化疲 , 降血
压之功效 , 主要用于咳喘 ,肺 气肿 , 各种 内出
血 ,高血压等症 ` 1〕 。 柿叶的生药学鉴定 ,未见
有显 微 、 理化 方面 的报道 , 我 们就此进行研
究 ,报道如下 。
1 仪器与材料
,
A d d r e s s
:
Z h e n H a n s h e n
,
G u a n g x i C o lle g e o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i e i n e
,
N a n n in g
~ 广西柳州市人 民医院 ( 5 4 5 0 0 1 )… 广西北海市中医院 ( 5 3 6 0 0 0 )
《中草药 》 19 9 8 年第 29 卷第 9 期 · 6 2 7 -
UV
一
1 6OA 分光光度计 (日本岛津 ) ; 紫外
分析仪 (日本岛津 ) 。 柿叶采 自广西全州县郊
区 , 经本 院周 子静 教授 鉴 定为 柿科 植 物 柿
iD
o s扔 , or : ka ik L f . 的干燥叶 。 硅胶 G , 青岛
海洋化工厂产品 。齐墩果酸对照品 : 由中国药
品生物制 品检定所提供 。 实验所用试剂均为
分析纯 。
2 实验 内容
2
.
1 药材性状 : 叶片多皱缩或破碎 。 完整叶
片展平后呈卵状椭圆形 、 宽卵形或近圆形 ,长
1 0 c m 一 1 5 e m , 宽 6 e m一 1 0 e m ,先端渐尖或
钝 , 基部楔形至圆形 , 全缘 ; 上表面灰绿色或
黄棕色 , 较光滑 ; 下表面颜色稍浅 , 中脉及侧
脉上面凹下或平坦 ,下面凸起 ,侧脉每边 5 条
一 7 条 , 向上斜 生 , 将近叶缘 网结 , 脉上有微
毛 ; 叶柄长 s m m一 2 0 m m ,质脆 。 气微 , 味微
苦涩 。
2
.
2 显微特征
2
.
2
.
1 叶横切 面 : 上表皮细胞长方形 ; 下表
皮细胞较少 , 非腺毛 、 腺毛较多 ,气孔可见 。栅
栏组织 1 列细胞 。 主脉维管束外韧型 , 弯月
状 , 木质部导管常 4 个一 7 个排列成行 , 韧皮
部较小 ; 主脉上下表皮 内侧有若 干列厚角细
胞 。 主脉及叶肉中散有粘液细胞及草酸钙方
晶 ( 图 1 ) 。
2
.
2
.
2 叶粉末 : 上表皮细胞多角形 ,垂周壁
较平直 , 气孔少见 ; 下表皮细胞较小 , 垂周壁
多稍弯曲 , 气孔较密集 。非腺毛 、 腺毛较多 。 表
皮细胞 内常存 在棕黄色块状物 , 有时脱离 出
来 。 草酸钙方 晶较多 。 导管多为网纹 、 螺纹
(图 2 ) 。
2
.
3 理化鉴别
2
.
3
.
1 化学定性鉴别 : 取本品粉末约 0 . 5 9 ,
置试管中 ,加水 1 0 m L 振摇约 1 0 m i n ,静置 ,
过滤 , 取滤液 s m L , 加人硝酸银试液数滴 , 出
现混浊 , 放置后有大量沉淀产生 (检验维生素
C )
。
取本 品 粉 末 约 0 . 5 9 , 加 60 % 乙 醇 10
m L
, 水浴加热 1 0 m i n , 过滤 ,取滤液 5 m L ,加
人少量镁粉与盐酸 0 . 5 m L , 加热片剂 ,滤液
.
6 2 8
-
由黄绿色变为红色 (检验黄酮类成分 ) 。
0
1一上表皮
5一腺毛
2
一栅栏组 织 3一海绵组织 4一厚 角组织
6一非腺 毛 7一木质部 8一草酸钙方晶 9一韧
皮部 1 0一下表皮
柿叶主脉横切面组织 图
ù酬锄渐泪自
l
曾登
马多一二因句协 .
1
一上表皮细胞 ,示有的细胞内含棕黄色物
2
一下表皮细胞 3 一非腺毛 4一导管 5一腺毛
6
一草酸钙方晶
图 2 柿叶粉末显徽特征图
2
.
3
.
2 U V
一
V i s 鉴别 : 取本 品粉末适 量 , 分
别用 95 写乙醇 、 氯仿浸泡过夜 ,过滤 , 取滤液
在 20 0 n m 一 8 0 0 n m 波长范围 内进行光谱扫
描 。 结果醇液在 2 1 8 、 3 7 0 、 4 1 2 、 6 6 4 n m 波长
处有吸收峰 ; 氯仿液在 2 4 8 、 4 1 5 、 4 5 8 、 6 6 8 n m
波长处有吸收峰 ( 图 3 ) 。
置上为黄色荧光斑点 ( 图 4) 。
O
00。O000
o0O
内`召二
嘴侧川裕
0
.仪 .` 一一一 - 一一一一户一一一一一二二二二20 位长 ` (侧 )
公 吕
o
咬侧娜哪
.0 0知尸一一 一一一一一一一一一一 -
该长 孟 (~ )
1
一
9 5% 乙醇提取液 2一氛仿提取液
图 3 柿叶光谱图
2
.
3
.
3 T L C 鉴别 : 样品供试液制备 : 取本品
粉末适量 ( 约 5 9 ) , 过 8 0 目筛 , 以 95 %乙 醇
5 0 m L 回流 提 取 3 h , 过 滤 , 滤 液 加 盐 酸 5
m L
,水浴 回流水解 l h , 滤过 , 滤液用石油醚
萃取 3 次 (每次用 s m L ) , 合并萃取液 , 挥干
石油醚 ,残渣用无水乙醇 s m L 溶解 。
对 照液制备 : 取对照 品齐墩果酸加氯仿制成
.0 s m g /m L 的对照液 。
操作方法 : 分别取上述样品液 、 对照液适
量 , 点于 同一块硅胶 G 一。 . 7% C M C 一N a ( 1 :
3) 薄层板上 , 以苯 一乙 酸 乙 醋 ( 3 : 1) 为展 开
剂 , 展开 , 展距 12 C m , 晾干后喷 以 10 %硫酸
乙 醇 液 , 于 90 ℃烘 10 m in , 在可 见 光下 观
察 , 两者在相同位置上为红色斑点 ; 在紫外光
下 ( 2 5 4 n m 或 3 6 5 n m 均可 ) ,两者在相 同位
1
、
2
一柿叶供试液 3一齐墩 果酸对照液
图 4 柿叶 T L C 图谱
3 讨论
3
.
1 柿叶横切面组织及粉末特征较明显 , 特
别是草酸钙方晶 、 腺毛 、 非腺毛及表皮细胞形
状 , 内含物均可作为其鉴别特征 。
3
.
2 据现代研究表明 , 柿叶含有有机酸类化
合物 , 如齐墩果酸等 , 还含有 V it C 、 黄酮昔等
成分〔`〕 。 实验以 V it C 、 黄酮昔为指标对其进行
化学反应鉴别 , 以齐墩果酸为对照品对其进行
T L C 鉴别 ,这些方法均灵敏 , 重现性好 。
3
.
3 在 U V 一 V is 鉴别 中 ,可供鉴别 的特征峰
较多 , 特别是氯仿提取液其在 可见光 区 和紫
外光区特征峰更明显 。
我们认为上述研究 ,可 为今 后制 定柿 叶
质量标准提供科学依据 。
参 考 文 献
1 广西卫生厅 . 广西中药材标准 . 南宁 : 广西 科学技术 出版
社 , 2 9 9 2 : 2 4 5 ( 1 9 9 7一 0 8一 2 5 收稿
1 9 9 8
一
0 5一 0 4 修回 )
《湖北 中医杂 志 》1 9 9 9 年征订启事
《湖北 中医杂志 》 (月 刊 )是综合性中 医药科技期 刊 , 由湖北中医学院主办 , 国内外公开发行 。 设有专家论坛 、 老中医 经验 、
临床研究 与报道 、学术探讨 、 方药研究 、针灸按摩 、新药观察 、 验方新编 、 改革与管理 、 综述等栏 目 。 本 刊从 1 9 9 9 年起 由双月刊
改 为月刊 , 每月 10 日出版 。 每册定 价 2 . 50 元 ,全年定 价 30 元 。 统一刊号 : C N 42 一 1 1 8 9 / R 。 国内代号 : 38 一52 , 国外代号 :
BM 75 3
。 欢迎新老订户订 阅 。 如读者在当地邮局订阅不便 ,本社可代办邮购 。 地址 : 武汉市武昌区云架桥 1 10 号湖北 中医
学院内 邮编 : 4 3 0 0 6 1 电话 : ( 0 2 7 ) 8 8 9 1 0 0 9 6
《中草药 》 1 9 98 年第 29 卷第 9 期 · 6 2 9 ·