全 文 ：毛细管区带电泳测定伸筋丹胶囊中士的宁和马钱子碱的含盘
浙江省药 品检验所 ( 杭州 0 3 10 0 4 )
中国药 品生物 制品检定所
姜舜尧 `
田颂九
金 甄 黄宗玉
摘 要 应用毛细管 区带 电泳 法 , 对伸筋丹胶 囊中的 士的宁和马 钱子碱成分进行 了分离研究 。 采
用 p H 一 6 . 0 的 0 . 2 m ol 八J t ir s 一磷 酸溶液作为缓冲液 ;运 行电压 20 k V ;检测波长 为 2 6 0 n m , 被 测成
分可 得到较好分 离 。 用 内标法测定其 含量 , 结果 表明 , 在 0 . 0 2~ 0 . 1 5 m g / m l碑 范围 内 , 士的宁和 马
钱 子碱均 与内标峰 面积之 比呈 良好线性关系 , 平均 回收率分别 为 95 , 1% ( R S D ~ 2 . 8 % ) 和 9 .6 4 %
( R S D = 3
`
O写 ) 。
关键词 毛细管 区带电泳 伸筋丹胶囊 士的宁 马钱子碱
伸筋丹胶囊 由马钱子 、 地龙等 8 味 中药
组成 , 具舒筋通 络 、 活血去痕 、 消肿止痛的功
效川 。 其 中的马钱子有剧毒 , 一般要求对马钱
子中所含的有效成分士的宁 和马钱子碱进行
定量控制 。 报道士 的宁和 马钱子碱 的含量测
定方法有比色法 、 紫外分光光度法 、 薄层色谱
扫描和高效液相色谱法等川 , 药 品质量标 准
则多采用薄层色谱扫描法闭 。 我们运用毛细
管区带电泳对伸筋丹胶囊 中的士的宁和马钱
子碱进行 了分 离研 究 , 并采用内标法 测定 了
其 含量 , 为测定 中药制剂 中士的宁和马钱子
碱的含量提供 了一种新的方法 。
1 仪器 、 试剂和药 品
B e e km a n P / A C E 5 5 0 0 型高效毛细管电
泳仪 (配备二极管阵列检测器 ) , S ys et m G ol d
软件 。
对照品士的宁 、 马钱子碱 由中国药 品生
物 制品检定所提供 ; 盐 酸伊托必利 i( ot rP ide
h y d r o e h l o r id e ) ; 伸筋丹胶囊三批 (山 东 A 公
司生产 , 批 号 : 9 8 0 3 0 1 9 8 0 3 0 3 , 浙江 B 厂 生
产 , 批 号 : 98 04 2 6 ) ; 三 经 基 甲 基 氨 基 甲 烷
( t ir s ) 为优级纯 ; 甲醇 、 氯仿 、 氨水 、 磷 酸均为
分析醇 ;水为二次重蒸馏水 。
2 实验方法和结果
2
.
1 测定条件 : 石英毛 细管柱 内径 5 0 拼m ,
总长度 4 7 C m , 有效长度 40 c m , 毛细管柱控
温 23 C ; 波 长 2 60 n m ; 运 行 缓 冲液 为 0 . 2
m o l / I
J
t r i、 溶液 (用磷酸调节 p H 至 6 , O ) ; 进
样方式 : 压力进样 ,进样时 间 10 5 ,进 样后再
用 5 0%的 甲醇溶 液进 1 5 ; 运行 电压 20 k V
(运行电流约 59 拼A ) ; 柱清洗 : 每次进样前分
别用水 、 缓 冲液各冲洗 3 m in 。
2
.
2 对照品溶液和 内标溶液的配制和测定 :
精密称取对照品士的宁 、 马钱子碱适量 , 加甲
醇制成每毫升各含 0 . 5 m g 的混合对照品溶
液 ; 另取内标盐酸伊托必利适量 , 加水制成每
毫升含 。 . s m g 的内标溶液 。 使用时取混合对
照品溶液 1 m l , , 内标溶液 1 m I J , 加 o . Z m o l /
I
, 磷酸溶液 0 . 5 m l 一 , 甲醇 1 . 5 m l碑 , 加水适量
定容至 s m 1) , 进样测定 , 分离图谱见图 1 。
2
.
3 供试品溶液的制备和测定 : 取本品内容
物 1 9 ,精密称定 , 加浓氨试液 Z m l , , 氯仿 一乙
醇 ( 1 0 : 1 )溶液 4 0 m I J , 超声处理 1 0 m i n , 静
置 24 h ,滤过 ,滤液蒸干 , 残渣用 甲醇温热使
溶解 ,定容于 s m I J 量瓶 中 。 取溶液 Z m I J ,加
内标 溶 液 l m I J , o . Z m ol / L 磷 酸溶 液 0 . 5
m I
J , 甲醇 0 . 5 m I J ,加水适量定容至 5 m I J ,用
0
.
45 拜m 微孔滤膜滤过 ,滤液进样测定 ,分离
,
A d d r e s s
:
J i
a n g S h u n y a o
,
Z h e i i a n g P r o v in e i a l I n s t i t u t e姜舜尧 男 , 3 0 岁 , 主管药师 , 1 9 9 1 年毕业于 中国药科大
D r u g C o n t r o l
,
H a n g z h o uf o r -
学 中药 专业 ,学 士学位
其质 t 标准起草工作 。 1 9 98 年 5 月开始研究运用高效毛细管 电泳方 法分 析中药成分
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3 0 卷第 5 期
在浙江省药 品检琴所从 事中药检验及
34 1
图谱见图 2 。 Yl = 1 1. 4 9X I +0 . 7 1 7又 10 一 ` , r 一 0 . 9 9 2
Y Z一 7 · 6 6X 2 + 4 · 5 2 2 又 1 0 一 ` , )一 0 . 9 9 9 4
2
.
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6
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子 士的 宁
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图 1
3一马钱子碱
对照品和 内标分离图谱
0
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翼、 》 . 0 2。。 }“ 。 。 。。…” 。咒乐 盯面 4 . 0 0时间 了〔 . 以n ) 扁丽 0 7 . 0
1
一内标 2一士的宁 3一马钱 子碱
图 2 供试品分离图谱
2
.
4 空白对照实验 : 模拟处方制得缺 马钱子
空 白对照液 , 按供试品溶液的制备方法制备 ,
测定 ,分离图谱见图 3 ,结果表明空白无干扰 。
2
.
5 线性 范围 : 分 别量 取混合对 照 品溶 液
0
.
2
、
0
.
5
、
0
.
7 5
、
1
.
0
、
1
.
2 5
、
1
.
5 m I
J 至 5 m l ,
量 瓶 中 , 各 加 人 内标 溶 液 l m l 一 , 加 人 0 . 2
m ol / L 磷酸溶液 0 . 5 m I J , 加水和 甲醇适量稀
释至刻度 ( 甲醇浓度 为 50 % ) , 按选定的方法
测定 , 所得的士的宁峰面积 与内标峰面积 的
比值 ( Y l ) 、 马钱子碱峰面积与内标峰面积 的
比值 ( Y Z ) , 分别和混合对照品溶液中的士的
宁浓度 ( X , , m g /m L ) 、 马 钱 子 碱 浓 度 ( X Z ,
m g /m L )作 回归处理 , 线形范围均为 0 . 0 20 一
.0 1 5 m g /m L
, 回归方程分别为 :
·
3 4 2
.
图 3 空 白对照分离图谱
2
.
6 精密度及方法的重现性 : 对同一份对照
品溶液重复进样 6 次 ,测定其士 的宁 、 马钱子
碱峰 面积 与 内标 峰面积 的 比值 , 计算 R S D
分别为 0 . 5%和 1 . 0 % (n 一 6 ) ;精密称取同批
样 品各 6 份 , 按选定的方法测定士的宁和马
钱 子 碱 含 量 , 计 算 R S D 分 别 为 2 . 4 % 和
3
.
0% ( n = 6 )
。
2
.
7 回 收实验 : 采用加样回 收法 , 取 已知含
量的样品加人定量的士 的宁和马钱子碱对照
品各 6 份 , 测 定 , 结 果 平 均 回 收率 分 别 为
9 5
.
1%和 9 6 . 4 % , R S D 分 别 为 2 . 85 %和
3
.
0 5% ( n = 6 )
。
.2 8 样品测定结果 : 按上述选定方法测定 3
批伸筋丹胶囊中士的宁和 马钱子碱的含量 ,
结果见表 1 。
表 1 伸筋丹胶囊中士的宁和
马钱子碱含 t 测定结果
批号 士的宁含量 ( m g / g ) 马钱子碱含量 ( m g / g )
9 8 0 3 0 1
9 8 0 3 0 3
9 8 0 4 2 6
1
.
5 6
1
.
2 9
0
.
6 7 : :;
3 讨论
3
.
1 缓冲液 : 缓冲液的 p H 值 、 浓 度对样品
分离均有影响 。 考虑士的宁的 p k 。 为 8 . 2 6 , 马
钱子碱 的 p k , 为 6 . 0 4 ( p k Z 为 1 1 . 7笋4〕 , 所 以
对 tr i s 缓 冲液在 p H 6一 8 范围作了考察 ( 0 . 2
m ol / L tr i S 溶液用磷酸调节 p H 值 ) ,结 果以
缓冲液 p H 6 . 0 的分离效果最佳 ,缓 冲液 p H
对 士 的 宁 、 马 钱 子碱 的 拜。 。 ( e l e e t r o p h o r e s i s
m o b i l i t y笋5 〕的影响见图 4 。 对不同浓度的 t r i s
缓冲液进行 比较 , 结果表明随着缓冲液浓度
的增加 , 分离情况渐好 , 0 . 2 m ol / L tr is 缓冲
液 可得 到较为满意的分离 。 另用磷酸盐 ( 80
m m o l/ L
, p H ~ .6 0) 作为缓冲液进行 了试验 ,
结 果分离效果差 。 tr i s 缓冲液不同浓度 、 磷酸
级冲液与运行 电流值的关系及对士 的宁 、 马
钱子碱之间分离度 ( R )的影响见表 2 。
.二九`
5冶-浮,j Z月-
.2r3o
。针一一飞丁一一一 r 一一 , 六甲一一
1
一士的宁的 阵 P Z一马钱子 的 协 p
圈 4 级冲液 p H对士的宁和 马钱子喊 阵 p的影响
裹 2 级冲液 ( mmo l/ L )与电流的关系及
对分离度 ( R )影响 (电压 ~ 0 . 2 k V )
级冲液
( PH “ 6 . 0 )
电流值 (尸A )
分 离度 ( R )
1 0 0 1 5 0 2 0 0 80
( r n们。 0 1 / L t r i s 磷酸 )
3 4 4 8 5 9
4
.
2 4
.
6 5
。
7
56
3
。
4
实 验结 果表 明 , 采用 p H = 6 . 0 的 0 . 2
m ol / L tr is 溶液可使 内标峰 、 士的宁峰 和马
钱子碱峰之间及与邻近其它杂质峰得到比较
好 的分离 。
3 , 2 电泳谱带展宽 : 沿用色谱 的塔板高度概
念 ,测得理论板数按士的宁峰计约为 28 万 。
3
.
3 供试 品的溶解溶媒 : 实验发现 , 在供试
品的溶解溶媒 中加一定浓度的磷酸 , 则士的
宁和马钱子碱的峰形变好 , 而且 回收率高 ,表
明磷酸对士的宁和马钱子碱的溶解性及其峰
形有影 响 ; 而对含不同甲醉浓度的溶解溶媒
( 甲醇浓度分别 为 30 % 、 5 0写 、 60 % , 均含有
20 m m ol / L 磷 酸 ) 进行试 验 比较 , 则定 t 结
果基本相同 ,分离的峰形均尚可 。
3
.
4 供试品的提取和分离 : 实验发现样品直
接用浓氨 一抓仿提取则难以过滤 ,加人一定浓
度的乙醇可使滤过顺利 ; 因样品中含较多 的
脂溶性成分 (乳香 、 没药等 ) ,所以用甲醇溶解
的样 品提取物加人水后会有不溶物产生 , 应
用微孔滤膜可滤去不溶物 。
参 考 文 献
1 中华人 民共和国卫生部 . 药品标准 中药成方制剂第十六
册 , 1 9 9 8 : 5 7
2 阴 健 主编 . 中药现代研究与临床应用 . 北京 : 学苑 出
版社 1 9 9 5 : 1 1 8
3 中华人 民共 和国药典 ( 1 9 9 5 年版 ) . 一部 . 北京 : 人 民卫
生出版社 , 3 72
4 M e r e k l n d e x
.
1 2 t h e d
.
M e r e k
,
R a h w a y
,
N J
,
1 9 9 6
:
1 5 12
、
2 3 7
5 W
e ib e r g e r R
.
P r a e t i e a l C a p i l la r y E l e e t r o p h o r e s i s
.
A e a
-
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e
.
p r e s s , N e w y o r k
,
1 9 9 3
:
2 2
( 1 9 9 8
一
0 9
一
2 3 收稿 )
D e t e r m i n a t i o n o f S t r y e h n i n e a n d B r u e i n e i n S h e n j i n d a n C a P s u l e
b y C a P i l lar y Z
o n e E l e e t r o P h o r e s i s
Jia n g Sh u n y a o
,
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·
( Z h e ji
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s t it u t e f o r D r u g C o n t r o l
,
H a n g z h o u 3 1 0 0 0 4 )
A b s t r a e t A e a p il l a r y z o n e e l e e t r o p h o r e s is m e t h o d w a s e s t a b l is h e d f o r t h e d e t e r m i n a t io n o f s t r y e h n i n e
a n d b r u e in e in S h e n j in d
a n e a p s u l e
, a p r e p a r a t i o n
e o m p o s e d o f 8 d if f e r e n t T C M i n
e l u d in g S e m e n S t勺 c h n i a n d
d r ie d e a r t hw o r m f o r r e li e v i n g r ig id it y o f m u s e le s b y p r o m o t i n g b l o o d e ir e u la t i o n t o r e m o v e b lo o d s t a s is
.
0
.
2
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T h is m e t h o d e a n g i v e a g o o d s e p a r a t i o n f o r t h e d e t e r m i n a t io n o f s t r y e h n i n e a n d
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e a p il la r y z o n e e l e e t r叩 h o n e s is Sh e n j in d a n e a p s u l e s t r y e h n i n e b r u e in e
《国外医药 · 植物药分册 》 1 9 9 9 年征订启事
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矿币覃西瓦丽百牟甭 3石春第 弓期 . 3 4 3 .