全 文 ：中南药学 2014 年 10 月 第 12 卷 第 10 期　Central South Pharmacy. October 2014, Vol. 12 No.10
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毛细管区带电泳法测定岩陀中岩白菜素的含量
汤菊萍1，姚静亚2，龙行安1*（1. 第二军医大学东方肝胆外科医院放射科，上海 200438；2. 第二军医大学长征医院药学
部，上海 200003）
摘要：目的　建立毛细管区带电泳法测定岩陀药材中岩白菜素的含量。方法　 岩陀药材用甲醇超声提取，采
用未涂渍熔融石英毛细管（75 μm×48.5 cm，有效长度 40 cm），以 25 mmol·L－ 1硼砂溶液为缓冲液，运行
电压 15 kV，温度 25℃，内标为肉桂酸，检测波长为 240 nm，运行时间 10 min。结果　岩白菜素与内标及其
他成分能达到基线分离，在 9.990～ 499.5 μg·mL－ 1与峰面积呈良好的线性关系，Y＝ 0.013 9X＋ 0.005 6，
r＝ 0.999 6，检测限为 4.995 μg·mL－ 1（S/N＝ 3），定量限为 9.990 μg·mL－ 1（S/N＝ 10），平均加样回收率
为 101.1%（RSD＝ 1.9%，n＝ 6），低、中、高浓度日内、日间精密度 RSD均＜ 5%（n＝ 3）。结论 此方法
可用于岩陀药材中岩白菜素的含量测定及质量控制，具有简便快速、准确可靠、试剂消耗量少的优点。
关键词：岩陀；岩白菜素；毛细管区带电泳法；含量测定
中图分类号：R917　　　　文献标识码：A　　　　文章编号：1672-2981(2014)10-1019-03
doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2014.10.022
Determination of bergenin in Rodgersiae Rhizoma by capilary zone electrophoresis
TANG Ju-ping1, YAO Jing-ya2, LONG Xing-an1* (1. Department of Radiology, Eastern Hepatobilliary Hospital,
Second Military Medical University, Shanghai 200438; 2. Department of Pharmacy, Changzheng Hospital,
Second Military Medical University, Shanghai 200003)
Abstract: Objective To establish a method to determine bergenin in Rodgersiae Rhizoma. Methods Rodger-
siae Rhizoma was extracted by methanol. An untreated fused-silica capillary (48.5 cm×75 μm, 40 cm effective
length) was used, the running buffer was 25 mmol·L － 1 borax solution, the voltage was 15 kV, the temperature
was 25℃ , the internal standard was cinnamic acid, the ultraviolet wavelength was 240 nm, and the running time
was 10 min. Results Bergenin, internal standard and impurities were separated. Bergenin had a good linerity at
9.990－ 499.5 μg·mL － 1, the linear equation was Y＝ 0.013 9X＋ 0.005 6 (r＝ 0.999 6), the limit of detection
was 4.995 μg·mL－ 1 (S/N＝ 3), the limit of quantitation was 9.990 μg·mL－ 1 (S/N＝ 10), the average recovery
was 101.1% (RSD＝ 1.9%, n＝ 6), and intra-day and inter-day RSDs were less than 5% (n＝ 3). Conclusion The
method is convenient, fast, accurate with low reagent consumption, and it can be used to determine the content of
bergenin in Rodgersiae Rhizoma.
Key words: bergenin; Rodgersiae Rhizoma; capilary zone electrophoresis; content determination
作者简介：汤菊萍，女，技师，主要从事放射合并中药治疗肝癌方面的研究，Tel：（021）81875218，E-mail：tangjuping1978@163.com
*通讯作者：龙行安，男，主要从事放射合并中药治疗肝癌方面的研究，Tel：（021）81875212，E-mail：longxaxx@163.com
　　岩陀为虎耳草科植物西南鬼灯檠 Rodgersia sambuci-
folia Hemsl.的干燥根茎，别名毛青红、红姜、野黄姜、
血三七等，是云南地区白族、傈族民间习用的民族药。
虎耳草科植物七叶鬼灯檠（Rodgersia aesculifolia Batal.）
的根茎在云南、贵州等地也用作岩陀入药。岩陀性苦、
味涩、具有活血调经、祛风湿的作用，主要用于治疗刀
伤出血、跌打损伤、风湿性关节炎 [1]。岩陀根茎主要含
有糖类、鞣质、岩白菜素及槲皮素及山萘酚等黄酮类成
分，其中岩白菜素含量最高 [2]，药理实验发现岩白菜素
除具有镇痛抗炎作用外，还具有护肝、抗溃疡、提高免
疫等多种作用 [3-4]。岩陀药材的质量控制以岩白菜素的
含量为主要指标，主要的含量测定方法为高效液相色谱
法 [5-8]。毛细管电泳具有快速、高效、试剂用量少的特点，
与传统高效液相色谱法比较，毛细管电泳能够选择性的
分离在溶液中容易电离的成分，柱效高，分析时间短，
尤其适合中药复杂成分的分离分析；且能大大减少有机
溶剂的消耗量，减少对环境造成的污染，保护检验人员
的健康，该方法已经被中国药典 2010版一部收录，并越
来越多地用于中药质量标准研究中 [9-11]。有关采用毛细管
电泳分离分析岩白菜素并进行药材质量控制的研究鲜有
报道。本文将建立毛细管区带电泳法对岩陀中的岩白菜
素进行含量测定，探讨该法用于岩陀药材质量控制的可
行性。
1　仪器与试药
　　Agilent CE高效毛细管电泳仪（美国安捷伦）；
ORION MODEL 828型 pH计（美国奥立龙）；KUDOS
SK2200H 超声发生器（上海科导）；METTLER AE 240
型十万分之一电子天平（瑞士梅特勒）； DJ-04药材粉碎
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机（上海淀久）。
　　岩陀 3个批次药材均购自上海青浦中药饮片厂，由第
二军医大学药学院生药教研室孙连娜副教授鉴定为虎耳草
科植物西南鬼灯檠 Rodgersia sambucifolia Hemsl.的干燥根
茎（产地：湖北，130916；云南，140118）及虎耳草科植
物七叶鬼灯檠 Rodgersia aesculifolia Batal.的干燥根茎（产
地：云南，130224）。岩白菜素对照品（上海斯丹德生物科
技有限公司，纯度≥ 98.0%），内标肉桂酸对照品（北京化
学试剂有限公司，纯度≥ 99.0%），硼砂及甲醇（上海国药
集团，分析纯），其余试剂均为分析纯，水为纯化水。
2　方法与结果
2.1　电泳条件
　　采用未涂渍熔融石英毛细管（河北永年光学纤维
厂，75 μm×48.5 cm，有效长度 40 cm）；缓冲液为 25
mmol·L－ 1硼砂溶液；电压 15 kV；温度 25℃；压力进
样：50 mbar×3 s；检测波长 240 nm；内标肉桂酸。运行
前用 0.1 mol·L－ 1 NaOH及缓冲液各冲洗 5 min，运行时
间为 10 min。在此条件下岩白菜素出峰时间为 5.8 min，
峰形较好，几乎无干扰，与内标达到基线分离，塔板数
＞ 1×105，结果见图 1。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品储备液的制备　精密称取岩白菜素对照品
9.99 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，得 0.999 0 mg·mL－ 1岩白菜素对照品储备液，置
冰箱 4℃保存备用。
2.2.2　内标溶液的制备　精密称取肉桂酸对照品 10.10
mg，置于 10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇
匀，得 1.010 mg·mL－ 1肉桂酸溶液，作为内标，置冰
箱 4℃保存备用。
2.2.3　供试品溶液的制备　参照药典前处理方法 [12]，取
岩陀药材饮片置粉碎机中打碎，过 100目筛，取此粉末约
0.2 g，精密称定，置 50 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇
20 mL，称重，超声 40 min，取出放冷至室温，称重，用
甲醇补足减失重量，取上清液过 0.45 μm微孔滤膜，精密
量取续滤液 5 mL置 10 mL量瓶中，精密加入内标肉桂酸
溶液 0.5 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀作为供试品溶液。
2.3　标准曲线及线性考察
　　精密量取岩白菜素对照品储备液适量置 10 mL量
瓶中，精密加入 0.5 mL内标溶液，用甲醇稀释至刻度，
摇匀，配制成浓度分别为 9.990、24.98、49.95、99.90、
199.8、499.5 μg·mL－ 1的对照品溶液。取上述岩白菜素
对照品溶液按“2.1”项下电泳条件进行测定，以对照品峰
面积同内标峰面积之比为纵坐标（Y），对照品溶液的浓度
为横坐标（X），得回归方程：Y＝ 0.013 9X＋ 0.005 6，r
＝ 0.999 6；线性范围：9.990～ 499.5 μg·mL－ 1。
2.4　精密度试验
　　取浓度为 24.98、199.8、499.5 μg·mL－ 1的低、中、
高3种浓度对照品溶液按“2.1”项下电泳条件各进样3次，
连续 3 d，进行日内、日间精密度考察。结果低、中、高
浓度日内精密度分别为 1.4%、1.3%、0.5%（n＝ 3），日
间精密度分别为 2.1%、1.8%、2.5%（n＝ 3），表明该方
法日内、日间精密度良好。
2.5　检测限及定量限考察
　　取岩白菜素对照品溶液，以不同比例稀释后按“2.1”
项下电泳条件进行测定，以信噪比 S/N＝ 3时的浓度作
为检测限，以信噪比 S/N＝ 10时的浓度作为定量限，结
果岩白菜素检测限为 4.995 μg·mL－ 1，定量限为 9.990
μg·mL－ 1。
2.6　重复性试验
　　取岩陀药材（批号：140118）粉末约 0.2 g，按“2.2.3”
项下方法制备供试品溶液，平行操作 6份，按“2.1”项
下电泳条件进行测定，计算岩陀药材中岩白菜素的含量，
RSD为 1.2%，表明方法的重复性良好。
2.7　稳定性试验
　　按“2.1”项下电泳条件，取供试品溶液分别于 0、1、
2、4、6、8 h进样分析，记录峰面积的比值，代入标准
曲线计算浓度，考察样品室温放置稳定性，结果发现样
品在 8 h内稳定，RSD为 2.2%。
2.8　加样回收试验
　　精密称取岩白菜素对照品 30.07 mg，置 25 mL量
瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，得浓度为 1.203
mg·mL－ 1岩白菜素对照品溶液。取岩陀药材（批号：
140118）粉末约 0.1 g，精密称定，加入上述对照品溶液
4.0 mL，再精密加入甲醇 16 mL，按“2.2.3”项下过程操
作，按“2.1”项下电泳条件进样分析，平行操作 6份，计
算回收率，平均回收率为 101.1%，RSD为 1.9%（n＝ 6）
（见表 1）。
2.9　样品含量测定
　　取不同批次岩陀药材粉末约 0.2 g，按照“2.2.3”项下
过程操作提取样品，按“2.1”项下电泳条件进样分析，每
批药材平行操作 3份，记录峰面积比值，代入标准曲线
计算样品浓度，得每批岩陀药材中岩白菜素的含量，结
果见表 2。
3　讨论
3.1　检测波长的选择
　　采用毛细管电泳自带的二极管阵列检测器对岩白菜素
图 1 岩陀提取物毛细管电泳色谱图
Fig 1 Capilary zone electrophoresis chromatogram of the extract of Rodgersiae Rhizoma
A.空白对照（blank）；B. 对照品加内标（standard and IS）；C. 岩陀提取物（extract of Rodgersiae Rhizoma）；1.岩白菜素（bergenin）；2.内
标肉桂酸（cinnamic acid，IS）
0 2.5 5 7.5 0 2.5 5 7.5 0 2.5 5 7.5 t/mint/mint/min
A CB 1 2 21
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的紫外吸收进行了全扫描，发现岩白菜素在 240 nm处紫
外吸收大于 280 nm处的吸收，见图 2，且内标肉桂酸在此
波长也有较好吸收，故选择 240 nm用于检测。
表 1　加样回收试验结果 (n＝ 6)
Tab 1 Recovery (n＝ 6)
称量
（sample weight）/g
含量（sample
content）/mg
加入量
（added amount）/mg
测得量
（detected amount）/mg
回收率
（recovery）/%
平均值（average
recovery）/%
RSD
/%
0.103 5 4.854 4.812 9.769 102.1 101.1 1.9
0.101 1 4.742 4.812 9.694 102.9
0.104 7 4.910 4.812 9.810 101.8
0.106 8 5.009 4.812 9.742 98.4
0.110 3 5.173 4.812 10.090 102.2
0.112 1 5.257 4.812 10.020 99.0
表 2　岩陀中岩白菜素含量测定结果 (n＝ 3)
Tab 2　Content of bergenin in Rodgersiae Rhizoma (n＝ 3)
产地
（place）
批次
（batch No.）
平均值
（average）/%
RSD
/%
湖北 130916 5.54 2.4
云南 140118 4.69 2.3
云南 130224 2.41 3.7
图 2　岩白菜素紫外光谱图
Fig 2　UV spectrum of bergenin
3.2　缓冲液对分离的影响
　　分别考察了硼砂及磷酸盐缓冲液对岩陀提取物中岩
白菜素与干扰峰分离的影响，发现以硼砂溶液为缓冲液
时，色谱基线平稳，其他干扰峰与岩白菜素色谱峰能达
到基线分离。用磷酸调节缓冲液 pH值，发现随着 pH降
低，岩白菜素的迁移时间延长，不利于快速分离分析。
考察了缓冲液浓度对分离度的影响，发现缓冲液浓度增
加，电流增大，毛细管发热量增加导致岩白菜素色谱峰
与干扰峰不能很好的分离，所以最终确定 25 mmol·L－ 1
硼砂溶液（pH＝ 9.03）作为缓冲液。
3.3　温度及电压对分离的影响
　　考察了温度从 15～ 30℃每隔 5℃进样分析的结果，
发现温度对出峰时间影响较大，温度越低出峰时间越晚，
对电泳分离影响较小，最终选择 25℃。电压升高，电流
也增大，不利于电泳分离；电压降低，整个迁移时间延
长，最终选择 15 kV作为分离电压。
3.4　毛细管内径对分离的影响
　　考察了 75 μm及 50 μm内径的毛细管柱，结果发现
采用 50 μm内径毛细管柱时，整个分析时间将延长至 20
min以后，最终选用 75 μm内径，40 cm有效长度的毛细
管柱进行电泳分离。
3.5　样品含量测定结果
　　含量测定结果表明湖北产地岩陀中所含岩白菜素的
含量高于云南产地，云南产地 2种药材中岩白菜素含量
结果差异也较大。文献报道 [6]在我国贵州等地也会以七
叶鬼灯檠（Rodgersia aesculifolia Batal.）的根茎作岩陀入
药，来解决野生岩陀资源短缺的问题。本文所建立的毛
细管电泳方法对于岩陀中岩白菜素的含量测定结果与文
献报道 [6-7]结果相似；同时，采用中国药典 2010年版一
部高效液相色谱法测定矮地茶中岩白菜素含量的方法 [12]，
对 3个批次的岩陀药材中所含的岩白菜素含量进行了测
定，结果分别为 5.73%、4.92%及 2.48%，显示较好的一
致性，可见本研究所建立的毛细管电泳方法能够用于岩
陀药材的质量控制。
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（收稿日期：2014-03-07；修回日期：2014-05-15）