全 文 ：HL P C法测定天然胡萝 卜素胶丸中件胡萝 l .素的含量
天津市长征医院( 3 0 0 02) 1王学艳 帝 侯 向明 崔 彪
摘 要 采用HL P C定量测定天然胡萝 卜素胶丸中 p一胡萝 卜素的含量 。 该法用硅胶预柱对样品进
行前处理 , 以 O D S 柱为分析柱 , 以 甲醇一乙睛 ( 90 : 10) ( p H 3 . 0) 为流动相 ,检测波长为 4 5 0 n m 。 实验
表明 ,该方法线性 良好 ,平均回收率为 ” . 2%
关健词 天然胡萝 卜素胶丸 压胡萝 卜素 a 一胡萝 卜素 H P L C 定量测定
近十年来 , 件胡萝 卜素以其优良的着色
能力及防癌 、抗癌 、抗衰老等药用保健特性 “ ,
得到人们的关注 。 美国药典 x X I 一 X X I 版
均收载了 件胡萝 卜素胶囊 。 我国近年也研制
成功了 p一胡萝 卜素制剂 , 如天然 件胡萝 卜素
口服液 、天然 卜胡萝 卜素胶丸等 。 国内外药品
标准 〔 , , “ 〕及文献 〔4〕均用 比色法测 定 件胡萝 卜
素的含量 。
天然胡萝 卜素胶丸和天然 件胡萝 卜素口
服液是由盐藻中提取的天然 件胡萝 卜素加适
宜的赋形剂制成的制剂 。 目前 , 国内从盐藻中
提取 各胡萝 卜素通常使用的技术只能得到主
要含全反式 p一胡萝 卜素 (约含 70 % ) ,还含有
少量的 9一顺式书一胡萝 卜素 (约含 8% )和 a 一胡
萝 卜素 (约含 6% )等其它胡萝 卜素异构体的
混合物〔 5〕 , 所以 ,用上述检测方法测得的结果
有可能是总胡萝 卜素 。 H P L C 法的分析结果
也证实了这一点 。 据报道 〔 6〕 , p型胡萝 卜素的
维生素 A 样作用是 a 型 、 丫型的 2 倍 。 因此 ,
有效地控制该制剂的质量 ,对充分发挥其临
床效用是极为重要的 。
我们力求用 H P L C 法对胡萝 卜素的异
构体进行分离 , 以便有效地测定 件胡萝 卜素
的含量 。 实验证明 , 本文建立的方法简便 、 灵
敏 、快速 。
1 仪器与试剂
L C
一
6A 高效液相色谱仪 , S P D 6A V 紫
外可见检测器 ; Q 一 、各胡萝 卜素对照品为 SI G -
M A 公司制 ,天然胡萝 卜素胶丸由天津市肿
瘤医院提供 ;其它试剂均为分析纯 ;预柱硅胶
为青岛海洋化工厂制 ( 1 0 一 20 0 目 ) 。
2 色谱条件
岛津 O D S 预柱 ( 1 0拼) , 5 0 m m 只 4 . 6 m m
1
.
d
.
;岛津 C L C 一 O D S , 2 5 0 m m 又 4 . 6 m m 1.
d
. ,
5拜分析柱 。 流动相 : 甲醇一乙睛 ( 90 : 1 0) ,
柱 温 35 ℃ , 流 速 : l m L / m in , 检 测 波 长
4 5 o n m
,进样量 2 0 拌 I J 。
3 实验方法
.3 1 样品预处理方法的确定
3
.
1
.
1 预 柱的制备 : 取 1 支 1 0 m m x 10
m m 1
.
d
. 底部为垂熔滤板的玻璃柱 , 内装 29
硅胶 , 用氯仿冲洗柱床 ,使柱床平衡后 ,备用 。
.3 1
·
2 处理方法 : 由盐藻中提取的天然件胡
萝 卜素成分复杂 ,对 H P L C 测定有一定的影
响 。 为此 , 须对其进行预处理 。 取胶丸内容物
(约含 件胡萝 卜素 20 m g ) , 用氯仿充分洗涤
胶丸皮 , 将洗液定量转移至 10 0 m L 棕色量
瓶中 , 用氯仿定容至刻度 ,精密取 5 . 0 m L , 用
氯仿稀释至 10 m L 制备成浓度为 10 0 拜g /
m L 的溶液 ( A ) 。 精密取 1 . 0 m L 溶液 ( A ) ,加
到硅胶预柱中 , 用氯仿洗脱 。 最后 , 定容到 10
m L
,得到溶液 ( B ) 。 用 0 . 4 5 拌m 的微孔滤膜
过滤 , 取续滤液 , 在 上述色谱条 件下进行
H P L C 测定 。
.3 1
·
3 样品预处理后的回收率考查 :精密量
取溶液 ( B )适量 , 用环 己烷制配成每 1 m L 含
,
A d d r e s s
:
W
a n g X u即 a n , C h a n g z h e n g H o s p i t a l _ o f T i a n jin , T i a川in王学艳 女 , 1 9 8 3 年毕业于天津医学专科学校药学系 (现天津第二医学院 ) , 现为天津长征医院药剂科主管药师 。 主要从事外用制剂的开发 ,主管检测 , 在国内刊物上共发表论文 6 篇 。
《中草药 》 1 9 98 年第 29 卷第 2 期
2一 2 .5拼g 件胡萝 卜素的溶液 (C ),按文献的
方法测定 p一胡萝 卜素的含量 。 另精密量取溶
液 ( A )适量 , 用环 己烷制配成测定溶液 ( C ) ,
直接测定 p一胡萝 卜素的含量 ,并计算回收率 。
重复测定 5 次 , 平均回收率为 9 . 2% 。
3
.
2 标准曲线的制备 : 由于该制剂成分复
杂 , 故采用外加对照品法进行标准曲线的制
备 。
取经氯仿适当稀释的天然胡萝 卜素胶丸
的内容物 , 配制外加 p一胡萝 卜素对照品的标
准系列溶液 2 、 5 、 s 、 1 1 、 1 4 、 2 0 、 6 0 、 1 0 0 、 1 4 0 和
18 0 印 g /m L ) , 分 别 精 密 量 取 l m L , 在 与
,’3 . 1 . 2” 相 同的操作条件下 , 进行色谱分析
( 1 ) ; 另取同上述经适当稀释后的胶丸内容物
(浓度与上述的一致 ) ,按上述方法处理后 ,进
行色谱分析 ( 2 ) 。 以 p一胡萝 卜素的浓度 C 对
其相应的 ( l) 一 ( 2) 的峰面积 A 做回归方程 ,
结果 ,昆胡萝 卜素的含量在 2一 14 拌g /m L 时
呈 现 很好的线性关系 。 得到 方程 : A 一 一
1 0 5 2
.
2 3 + 2 0 6 4
.
3 7 C
, 相关系数 r 一 0 . 9 9 9 9 。
3
.
3 相对回收率试验 : 取经氯仿适当稀释的
夭然胡萝 卜素胶丸的内容物 , 加标准溶液 ,使
含外加 件胡 萝 卜素的浓 度为 2 、 5 、 8 、 1 1 、 1 4
(拜g /m L ) , 同时 , 加入适量的 a 一胡萝 卜素对
照品 , 使其含量为 各胡萝 卜素的 6% , 按上述
方法对样品进行处理后 ,进行色谱分析 ; 另取
同上述经适当稀释后的胶丸内容物 (浓度与
上述的一致 ) , 按上述方法处理后 ,进行色谱
分析 。 将测得的峰面积差代入标准曲线的线
性方程中 ,求得相应的浓度后 ,计算相对 回收
率 。 测得的 各胡萝素回收率为 9 9 . 2 % ,各个
浓度点重复 4 次试验 , R S D 为 0 . 76 % , 批间
R S D 为 1 . 2 % 。
3
.
4 精密度试验 : 取同一份样品 , 依法平行
操作 ,测定 5 次 ,结果 R S D ~ 0 . 92 % 。
3
.
5 样 品测定 : 取天然胡萝 卜素胶丸 10 粒
中的内容物 ,用氯仿充分洗涤胶丸皮 ,将洗液
定量转移至 10 m L 棕色量瓶中 , 用氯仿定
容到刻度 ,精密量取 5 m L ,置 50 m L 棕色量
瓶中 , 用氯仿定容到刻 度 , 摇 匀 , 得 到溶液
.
9 0
.
( A )
。 然后 ,按“ 3 . 1 . 2” 和 “ 3 . 2 ” 项下的方法进
行操作求得标准 曲线 。 同法配制溶液 ( B ) ,在
上述色谱条件下 , 测定其峰面积 ,将峰面积值
代入标准曲线中 , 求得 件胡萝 卜素的浓度 , 经
过一系列的计算 , 即可求得该制剂含 p一胡萝
素为标示量的百分数 。重复操作 5 次 ,结果见
表 1 。 色谱图见图 1 。 将溶液 ( B )的浓度加大
1。 倍 , 依法测定 , 按归一化法测得 3 批含 a -
胡萝 卜素的量约为 1 . 6% , 二个未知物的含
量总计约为 2% 。
表 1 样品分析结果
批号 含量 ( % ) R S D ( % )
A 9 5
.
8 0
.
7 2
B 9 4
.
9 0
.
6 1
C 9 5
,
2 0
.
6 5
。
3
时间 r (而n )
图 1 样品的 H P L C 图
1
一 a 一胡萝 卜素 2一未知物
3一件胡萝 卜素 4一未知物
3
.
6 方法稳定性试验 : 在样品处理后 。 、 2 、 4
和 s h 时 ,测定批号为 A 的样品 。 结果含量分
别为 9 5 . 8% 、 9 5 . 4 % 、 9 4 . 8%和 9 3 . 7% 。 因
此 , 应在样品处理后的 h4 内进行 H P L C 分
析 。
4 讨论
4
.
1 流 动相 的选择 : 我 们研究了 甲醇同氯
仿 、 乙睛的不同比例对分离结果的影响 。结果
见表 2 。
表 2 甲醇同抓仿 、 乙睛的不同
t七例对分离结果的影响 :
罕 流动相 R t ( a 一 ) ( m in ) R t (卜) ( m i n ) R s (a 一 、件)甲醇一氛仿
9 0
:
1 0
甲醇一抓仿
1 3
1 8
08 2 1 3
.
923
20
.
246曝茹 3 3 . 643
1
.
2
.
4
.
八OU自óKé J斗月了八曰
甲醇一乙脯 2 1 . 60 4 24 . 08 9
9 0
:
10
. . . . . . . . 曰冲. . . . . .
流动相 1时 ,在 各胡萝 卜素的前端峰沿
处出现一个小峰 ;流动相 2 时 ,在 民胡萝 卜素
的后端峰沿处 出现一个小峰 ;流动相 3 时 ,在
件胡萝 卜素 后端峰沿处各出现 一个小峰 ;流
动相 4 时 ,在 各胡萝 卜素的前后端峰沿处各
出现一个小峰 ,但后面的小峰与 件胡萝 卜素
的峰接近基线分离 ,故本试验选择流动相为
甲醇一乙睛一 90 : 10 。 第 2 号和第 4 号峰估计
为其他胡萝 卜素异构体 , 由于缺少对照品无
法对它们进行定性 。
4
.
2 对本方法的评价 : 本文建立的方法简
便 、 灵敏 、 快速 ,可较准确地测定 p一胡萝 卜素
的含量 。 该法同样适用于其他含 件胡萝素制
剂的含量测定 。
参 考 文 献
1 M a t h e w
s 一
R o t h M M
.
P u r e A P P I C h e m
,
19 8 5
, 5 7
:
7 17
2 美国药典 X X 皿 版 . 15 5
3 沪 Q / w s 一 1一 2 14 9一 9 4
4 何庆元 , 等 . 中国药科大学学报 , 1 9 96 , 2 7 ( 5 ) : 3 10
5 袁 生 , 等 . 药物生物技术 , 2 9 9 6 , 3 ( z ) : 35
6 姜文侯 , 等 . 食品发酵工业 , 19 94 , 3 : 65
( 1 9 9 7
一
0 7
一
1 1 收稿 )
Q u a n t i t a t i v e A n a l y s i , o f p
一
C a r o t e n e i n N a t u r a l C a r o t e n e C a P s o l e s b y H P L C
W
a n g X
u e y a n
,
H
o u
X i
a n g m in g
,
C
u i B i
a o ( T ia n j in C h
a n g z h e n g H o s p i t a l
,
T ia n ii n 3 0 0 0 2 1 )
A b s t r a e t A
n
H p L C m e th o d w a s u s e d f o r t h e q u a n t i t a t i v e d e t e r m i尹a t i o n o f 卜 e a r o t e n e in n a t u r a l
e a r t e n e e a p s u l e s
.
T h e s a m p l e w a s p r e t r e a t e d w i t h a s i li e a g e l e o l u m n
, a n d t h e n d e t e r m in e d o n a O D S e o lu m n
,
w it h
a m o b ile P h a s e o f m e t h a n o l
一 a e e t o n it r il e ( 9 0 : 1 0 ) ( P H 3
.
0 )
, a n d d
e t e e t e d a t 4 5 0 n m
.
T h e li n e a r i t y w a s
v e r y g o o d
.
T h e a v e r a g e r e e o v e r y w a s 9 9
.
2 %
.
K e y w o r d s n a t u r a l e a r o t o n e e a p l s u l e s p
一 e a r o t e n e H P L C
金乌香冲剂中槟榔碱定量方法研究
徐州市医学科学研究所 ( 2 2 1 0 0 6)
徐州市中医药研究所
秦孟根 `
刘大跃
摘 要 对金乌香冲剂中槟榔碱进行了酸性染料比色法定量方法研究 ,结果表明在 pH 一 5 . 0 时 ,
槟榔碱可与澳甲酚绿生成稳定呈色离子对 ,在槟榔碱浓度范围 1 . 65 拜g /m L ~ 1 0 . 4 拜g /m L 内线性
关系良好 , r = 0 . 9 9 9 2 ,平均回收率 9 9 . 7 % , R S D一 2 . 1% ( n = 5 ) 。
关镇词 槟榔碱 嗅甲酚绿 酸性染料比色法
金乌香冲剂为我所自制纯中药制剂 ,对
胸隔痞闷及 胃脱疼痛等症有效 , 为控制产品
质量 ,对其 主要有效成分槟榔碱 ( a r e e o l i n e )
进行了定量方法研究 ,本法设备简单 、 结果准
确 、 重现性好 。
1 仪器试剂 、 样品 、对照品
U V
一
1 60
一
A 紫外分光 光度计 ( 日本 、 岛
津 ) , P H S 一 25 型酸度计 (上海雷磁仪器厂 ) ,
所有试剂 为市售 A R 级 ,金乌香冲剂 为本所
自制 , 氢嗅酸槟榔碱对照品 由中国药科大学
提供 ( E . M . K 分装 ,含量达 9 . 9% ) 。
2 溶液制备
2
.
1 供试品溶液制备 : 精密称取冲剂颗粒 5
份各 2 . 5 9 分别置于带塞三角磨口瓶中 , 加
,
A d d r e s s
:
Q in M e n g g e n
,
X u z h o u I n s t i t u t e o f M e d i e a l cS i
e n e e , X u
z
h o u
《中草药》 1 998 年第 29 卷第 2 期