全 文 ：并维持在较高水平。本研究应用染料排除法 ,活细胞
悬液荧光染色结合 DNA电泳及 FCM分析 ,均观
察到 THH诱导细胞凋亡的典型表现 ,并且检测结
果较一致地反映了 THH诱导细胞凋亡的动态变化
规律。证实 T HH具有较强的诱导白血病 HL-60细
胞凋亡的能力。
Bcl-2基因在细胞凋亡中起负性调节因子作用 ,
其过度表达可保护肿瘤细胞 ,使许多瘤细胞对阿糖
胞苷、长春新碱、顺铂等化疗药物产生抗性 ,这可能
是形成多药耐药性的原因之一 [ 5] ; Bcl-2表达增强是
许多肿瘤的共性 ,能使肿瘤细胞维持明显的生长优
势。HL-60细胞作为 Bcl-2基因高表达细胞株 ,实验
观察到 , T HH水提取液 ( 10μL /mL) 处理后 4 h,
Bcl-2基因表达即出现显著降低 ,直到处理后 24 h
均保持持续降低趋势。同步 FCM分析则显示凋亡
的高峰发生在 24 h左右 ,说明 Bcl-2表达下调是一
个早期事件 ,提示 Bcl-2基因有可能是 T HH诱导
HL-60细胞凋亡的启动基因。 由于 80% 以上的肿
瘤其 P53基因为突变型 ,使这些肿瘤对传统化疗药
物并不敏感 [6 ]。在 P53基因突变的 HL-60细胞中 ,
T HH能通过下调 Bcl-2基因诱导凋亡发生 ,提示
T HH可能发展成为一种广谱抗肿瘤药物。
大量研究表明 ,在 HL-60细胞凋亡过程中至少
存在两种不同的信号途径: 一种以 Ca2+ 为第二信
使 ,通过参与凋亡过程中一些关键点的调节 ,包括激
活 Ca2+ 依赖性核酸内切酶 ,而启动细胞自主死亡程
序 ;另一种可能依靠其他信号通路诱导细胞凋亡。目
前认为凋亡时细胞内信号还涉及 cAM P,蛋白激酶
系统 ,氧化应激等。 本研究采用目前应用较广的
Ca2+ 荧光指示剂 Fura-2 /AM检测 HL-60细胞内
游离 Ca2+浓度 ,结果提示 T HH在启动细胞凋亡过
程中未引起细胞内 Ca2+ 稳态的改变。 结果提示
T HH可能有通过 Ca2+ 以外的其他信号通路启动
HL-60细胞凋亡。此外 , HL-60细胞为 Bcl-2高表达
细胞株 ,研究表明 ,过表达的 Bcl-2蛋白能抑制胞内
Ca
2+ 库的动员 ,阻止 [Ca2+ ]i升高及核钙的积累 [7 ] ,
这可能是 T HH诱导 HL-60细胞凋亡早期 [ Ca2+ ]i
未发生变化的一个重要原因。
参考文献:
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桂枝对致痫大鼠海马 CA1区诱发场电位的影响
徐淑梅 ,何津岩 ,林来祥 ,郑开俊 ,仇晓菁⒇
(天津医科大学 生理教研室 ,天津　 300070)
摘　要: 目的　探讨桂枝对癫痫模型海马脑片诱发场电位的影响。方法　以毛果芸香碱致痫大鼠为实验对象 ,用细
胞外玻璃微电极记录方法 ,观察桂枝对癫痫模型离体海马脑片 CA1区锥体细胞诱发群峰电位 ( population spike,
PS)的影响。结果　桂枝提取液使致痫大鼠海马脑片 PS幅度平均降低 28. 73% ,平均 16. 8 min恢复。结论　桂枝
能降低致痫大鼠海马脑片 CA1区顺向诱发 PS幅度 ,提示桂枝对中枢神经系统的突触传递过程有明显的抑制
效应。
关键词: 桂枝 ;癫痫 ;海马脑片 ;群峰电位
中图分类号: R286. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 10 0916 03
Effect of cass ia twig on evoked field potential of
CA1 of hippocampal slice in epileptogenic rat
·916· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 10期
⒇ 收稿日期: 2001-04-27基金项目:天津市 21世纪—青年科学基金资助项目 ( No. 963708411)作者简介:徐淑梅 ( 1960-) ,女 ,河北省人 ,副教授 ,学士学位。 1983年毕业于天津医学院医疗系 ,主要从事神经电生理研究。
XU Shu-mei , HE Jin-yan, LIN Lai-xiang, ZHENG Kai-jun, QIU Xiao-jing
　　 ( Depa rtment o f Physio log y, T ianjin Univ e rsity of Medical Sciences, Tianjin 300070, China)
Key words: cassia twig; epi lepsy; hippocampal slices; popula tion spikes
　　桂枝的主要有效成分为挥发油 ,油中主成分为
桂皮醛 ,具有镇痛、镇静和抗惊厥作用。临床上用柴
胡桂枝汤治疗癫痫取得了满意的效果 [1 ]。海马脑片
具有较完整的神经元之间的突触联系 ,且不受全身
性因素的影响。本研究以离体海马脑片 CA1区锥体
细胞诱发群峰电位 ( PS)的幅度为指标 ,观察桂枝
对毛果芸香碱致痫大鼠海马脑片诱发场电位的影
响 ,探讨桂枝对中枢神经系统的作用。
1　材料和方法
1. 1　动物和材料: Wistar大鼠 ,体重 120～ 150 g ,
雌雄不限 ,由天津市劳动卫生研究所实验动物研究
中心提供。盐酸毛果芸香碱 ( pilocarpine. HCl )德
国 GMBH生产 ,由天津市化学试剂公司提供 ,加蒸
馏水配制成 100 mg /mL浓度溶液。 桂枝注射液由
天津市南开医院中西医结合研究所制剂室采用水提
醇沉及提取挥发油的方法制成 1 g /mL注射针剂
( 1 g 生药制成 1 mL 提取液 )。 人工脑脊液
(a rtificial cerebrospinal f luid, ACSF)成分 (单位:
mmol /L ): NaCl 124, NaHCO3 26, KH2 PO4 1. 2,
MgCl2 · 6H2O 2. 4, KCl 3. 3, CaCl2 2. 5,
C6 H12O6· H2O 10。pH值为 7. 35。
1. 2　癫痫模型制备: Wista r大鼠 , ip盐酸毛果芸香
碱 ( 350 mg /kg体重 )制备癫痫模型 [2 ]。选取出现癫
痫大发作的大鼠饲养 1周后进行实验。
1. 3　离体海马脑片的制备: 致痫后 7 d,将大鼠在
清醒状态下断头 ,迅速取全脑置于 4℃ 人工脑脊液
中持续给于 95% O2和 5% CO2饱和 ,待脑组织冷却
后迅速剥离出海马 ,沿海马槽纤维平行方向切成
350～ 400μm厚的脑片 ,至预先通以 95% O2和 5%
CO2混合气的室温的 ACSF中 ( pH为 7. 35) ,室温
下孵育 1～ 2 h。
1. 4　诱发场电位的记录及给药:将孵育后脑片移至
以上述人工脑脊液灌流的内浴槽 ,灌流速率为 1. 25
m L /min,保持温度 35℃。用微操纵器将充满生理
盐水的玻璃微电极 (即记录电极 ) 插入海马 CA1
区锥体细胞层 ,以引导诱发的场电位。刺激电极则置
于 CA3区发出的 Schaf fer侧支处。刺激参数为 0. 1
ms和 1 Hz。 由刺激电极诱发的场电位经记录电极
引导 ,经微电极放大器放大 ,输入 SBR-1型双线示
波器 ,经好友生物信号分析系统 (由天津医科大学研
制 )转换至电子计算机进行观察、记录、测量、分析。
实验时选取能记录出诱发场电位的脑片进行实验 ,
首先记录给药前的诱发杨电位 ,待其稳定 30 min后
再进行药物实验 ,给药后连续观察 20～ 30 min,记
录诱发场电位幅度变化和恢复时间。给药途径选用
脑片旁微量滴注法 ,滴注量为 20μL (分 4滴 )。
本研究以正常大鼠海马脑片 CA1区诱发场电
位为空白对照 ,观察了毛果芸香碱致痫后 PS的变
化 ;以滴加生理盐水为实验对照组 ,观察桂枝提取液
对致痫大鼠 CA1区 PS的影响。
1. 5　数据处理:对空白对照组与注射毛果芸香碱组
的大鼠海马脑片诱发场电位的比较采用成组 t′检
验 ;对致痫大鼠滴药前、后诱发场电位幅度值采用配
对 t′检验 ,利用 SPSS统计软件进行统计学处理。
2　结果
2. 1　致痫前后海马脑片 CA1区诱发场电位的变
化:结果显示毛果芸香碱使海马脑片 CA1区诱发场
电位的幅度增大 ,出现痫样放电。提示毛果芸香碱具
有致痫作用 (表 1)。
表 1　致痫前后海马 CA1区 PS幅度的比较 ( mV ,x± s )
组别 例数 PS幅度
正常对照 10 2. 64± 0. 27
致痫 10 4. 06± 0. 24*
　　与正常对照组比较: * P < 0. 01
2. 2　生理盐水对致痫海马脑片 CA1区诱发场电位
的影响: 滴注生理盐水前后 , PS幅度无明显变化
( P < 0. 05) 说明脑片表面微量滴注生理盐水后 ,对
诱发场电位无明显影响。
2. 3　桂枝提取液对致痫海马脑片 CA1区诱发场电
位的影响: 结果显示 1 g /mL浓度的桂枝使致痫海
马脑片 PS幅度明显下降 ,幅度平均降低 28. 73% ,
平均 16. 8 min恢复 ,经统计学检验 P < 0. 01,有显
著意义 (图 1和表 2)。
表 2　桂枝对 CA1区 PS幅度的影响 ( mV , x± s )
组　别 n 给药前 给药后
生理盐水 10 　 3. 88± 0. 63 　 3. 87± 0. 83
桂　　枝 10 　 4. 49± 1. 13 　 3. 20± 0. 51*
　　与给药前比较: * P < 0. 01
3　讨论
本研究利用海马脑片 CA3区锥体细胞的
Schaffer侧支与 CA1区锥体细胞之间的突触联系 ,
·917·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 10期
A-滴加桂枝前　 B-滴加桂枝后
图 1　桂枝对海马脑片 PS幅度的影响
观察了桂枝对毛果芸香碱致痫大鼠离体海马脑片
CA1区诱发场电位的影响 ,结果显示桂枝能明显降
低致痫大鼠海马静发场电位的幅度 ( P < 0. 01) ,表
明桂枝能抑制致痫大鼠中枢神经系统突触传递过
程 ,具有抗痫作用。
桂枝对毛果芸香碱致痫大鼠海马脑片诱发场电位幅
度的抑制作用 ,可能与对 Ca2+ 通道直接阻滞机制或
GABA受体有关。桂枝通过何种途径产生抗痫作用
还有待进一步研究。
参考文献:
[1 ]　王本祥 .现代中药药理学 [M ]. 天津:天津科技出版社 , 1999.
[2 ]　 Tu rski W A, Cavalhei ro E A, Sch aw arz M , et al . Limbic
sei zures p roduced by pilocarpine in rat s: a b ehavioural elec-
troencephalographic and morphological analysi s [ J ] . Brain
Res, 1984, 321: 237-253.
白藜芦醇苷的体外抗氧化活性
田京伟 ,杨建雄⒇
(山东省天然药物工程技术研究中心、山东绿叶制药集团 ,山东 烟台　 264003)
摘　要: 目的　研究白藜芦醇苷的清除自由基、抗氧化活性。方法　以 NADH-PM S-NBT系统产生氧自由基 O2÷ ;
EDTANa2-Fe(Ⅱ ) -H2O2系统和 Fe2+ + V it C系统产生羟自由基 (· OH); H2O2诱导大鼠红细胞氧化溶血来研究白
藜芦醇苷的生物活性。结果　白藜芦醇苷体外可清除 O2÷及· O H;抑制 H2O2诱导的大鼠红细胞氧化性溶血 ;抑制
· OH引起的小鼠肝微粒体过氧化脂质 ( LPO ) 和大鼠红细胞膜丙二醛 ( M DA)含量的升高。 结论　白藜芦醇苷具
清除自由基及抗脂质过氧化的作用。
关键词: 白藜芦醇苷 ;自由基 ;抗氧化作用
中图分类号: R286. 75　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 10 0918 03
In vitro antioxidative effect of polydatin
TIAN Jing-w ei , YAN G Jian-xiong
　　 ( Shandong Engineering Research Center fo r Na tural Drug s, Shandong LU… YE Pharmaceutica l CO. , Ltd. , Yantai Shan-
dong 264003, China)
Key words: polydatin; f ree radical; antioxidation
　　白藜芦醇苷 ( Polydatin,简写 Pol )是中药虎杖
Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc中所含的一
种有效成分 ,据报道 , Pol对心脑血管系统具有十分
明显的药理作用 ,能扩张血管 ,抑制血小板聚集 ,改
善微循环 ,保护血管内皮等 [1, 2 ] ;有关研究证明其对
脑缺血再灌注大鼠脑组织具有保护作用 [3 ]。 但其体
外抗自由基作用尚未见报道 ,而自由基反应在心脑
血管损伤中起着重要作用。为了对 Pol进一步开发
及应用 ,探讨其作用机制 ,对其体外抗氧化作用进行
了初步研究。
1　材料
1. 1　药物与试剂:白藜芦醇苷:白色晶体 ,由陕西师
范大学生科院生化室提供 (含量为 96. 2% ) ,以生理
盐水配成不同浓度的溶液。 1, 1, 3, 3-四乙氧基丙烷
( T EP)、还原型辅酶Ⅰ ( N ADH)、酚嗪二甲基硫酸盐
( PM S)、四氮唑蓝 ( N BT)为 Sigma产品 ,硫代巴比
妥酸 ( TBA)、三氯乙酸 ( TCA)为国产分析纯。
1. 2　动物: SD雄性大鼠 , 200～ 250 g,昆明种小鼠 ,
18～ 22 g ,雌雄各半 ,由陕西省中医药研究院提供。
2　方法与结果
·918· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 10期
⒇ 收稿日期: 2001-04-03作者简介:田京伟 ( 1976. 11-) ,男 ,山东省青岛市人 , 1997年就读于陕西师范大学生命科学学院 , 2000年获理学硕士学位。目前从事于心脑血管方向研究。 E-mail: jingw ei@ luye-ph arm. com