全 文 ：中药蛇床子水提物活性成分的研究△
江苏省药物 研究所 (南京 2 1 0 0 0 9)
兰州军 区乌鲁 木齐总医院临床 医学 研究所
向仁德 `
殷 学军
张新 勇
刘德祥
韩 英
黄 国香
夏 超
王河川
摘 要 从 中药蛇床 ( 、 , , ; d i u , z: , n o n , , i r r i ( 1 . ) C u s s o n . 果 实的 水提 物中分 得 9 个化合物 , 经化学
和 光 谱 方 法 鉴 定 为 蛇 床 子 素 ( o s t h o l , l ) 、 佛 手 柑 内 酷 ( b e r g a p t e n , 皿 ) 、 异 虎 耳 草 素
( ; s o p im p ; n e ll in
. 班 ) 、 欧芹 属素乙 ( im p e r a t i o n , VI ) 、 5一 甲基尿 啼咙 ( t h y m i n e , v ) 、 6 一氧嗦吟 (
h y p
o x a n t h i
n e , u )
、 尿嗜吮 ( u r a e il , 、 l ) 、 L 一 ( + ) 缴 氨酸 ( L 一 ( 十 ) 一 v a l in e , 讯 ) 与苯丙氨
酸 ( D 一 p h e n y l a la n in e , 以 ) 。 其 中 V , u , 、卜 通与 以均 首次从该植物中获得 。 l , l , . 与 VI 显
示很强 的抗诱变作用 。
关键词 蛇床子 水提物 活性成分 抗诱 变
蛇 床 子 系 伞 形 科 蛇 床 属 植 物 蛇 床
C n i d , , m m o
, , ; : i e r i ( I
J .
) C u s s o n
. 的果实 , 是
我国的传统常用中药 。近几年来 , 我们在同协
作单位合作开展蛇床子水提物抗化学致癌剂
的实验研究 中 , 发现有多种成分具有极强的
抗黄 曲霉素 B l 诱发 的移码突变效应和很强
的抗环磷酞胺诱发的小鼠染色体损伤和染红
细胞微核效应 。 其中一成分可使环磷酞胺诱
发的染色畸变率和多染红细胞微核的频率下
降至 接近阴性 对照组 〔` 一 。 这一研究成果对研
制配合癌症 化疗 、 放疗 以及抗衰老药物 的研
究和开发方面 , 展现 了广阔的前景 。
有关蛇床子化学成分的研究已有较多的
报道 , 但其水溶性成分 的系统研究至今还无
人问津 。为此 , 我们对蛇床子水提物的化学成
分进行 了 比较深人的研究 , 共分得 12 个化合
物 ,除 3 个 因得量微而无法鉴定外 , 其它 9 个
均通 过化学和光谱法确定 了结构 。 其 中 v ,
VI
, 姗 , 恤与 仄 等 5 个化合均首 次从 该植物
中获得 。
1 仪器与材料
熔 点用 Y A N A C O 微 量熔 点测定 仪测
定 , 温度计未经校正 ; U V 用岛津 U V 一 2 0 型
测定 ; I R 用 F T S 一 1 0 0 型测定 ; M S 用 JM S -
D 3 O O 型 测定 ; ’ H N M R 用 B R U K E R A C F -
3 0 0 型测定 。 柱层析和薄层层析用硅胶均为
青岛海洋化工厂产 品 。紫外灯下观察荧光 。原
料药材购 自江苏高淳县 , 并经专家鉴定 。
2 提取和分离
将蛇床子果实粉碎后加 水提取 3 次 , 水
提取液减压浓缩至 小体积后加醇沉 淀 ,弃去
沉淀 , 溶液经适当浓缩后上大孔树脂柱分离 ,
用水和不同比例的水 一醇混合溶媒洗脱 , 各流
分合并后再减压浓缩至小体积后用正丁醇萃
取 。 正丁 醇萃取液经减压浓缩后再进行硅胶
柱和低压硅胶柱层析分离 ,并用不同 比例的
石油醚 一醋酸乙醋溶媒系统洗脱 ,先后得蛇床
子素 ( o s t h o l ) , 佛手柑内醋 ( b e r g a p t e n ) ,异
虎 耳 草 素 ( i s o p im o i n e l l i n ) 、 欧 芹 属 素 乙
( im p e r a t o r i n )
,
5
一甲基尿嗜吮 、 ( t h y m i n e ) ,
6
一氧嚓吟 ( h y p o x a n t h i n e ) , 尿嚓吮 ( u r a e i l )
,
L
一
( 十 卜撷氨酸 ( L 一 ( + ) 一 v al i。 ) 与苯丙氨
酸 ( D 一 p h e n y l a l a n ie n ) 。
3 鉴定
I
: 无色柱晶 ( 乙醇 ) , m p 8 3 C 一 8 4 C ,
R f o
.
6 3 9 (蓝紫色荧光 ) , U V 入气黔 n m : 5 2 2 ,
2 5 5
。
I R 。 今乳 。m 一 ’ : 2 9 6 0 , 2 9 0 0 ( C H 3 , C H Z ) ,
1 7 1 5 (
a ,
p不饱和 6一内醋 ) , 1 6 0 0 , 1 4 9 5 (苯
A d d r e
s s :
X i a n g R e n d e
,
J i
a n g s u In s t i t u t e o f M a t e
r i a M e d i e a
,
N a n j i n g
△本课题为国家 自然科学基金 ( 2 9 3 7 2 0 5 3 ) 资助 项目
《中草药 》 19 9 9 年第 3 0 卷第 n 期 . 8 1 3 .
环 ) , 1 3 8 5 (偕 甲基 ) 。 ’ H N M R ( C D C 13 ) 6 :
1
.
6 5 ( 3 H
, s , C :
` 一
C H
3
)
,
1
.
8 5 ( 3 H
, s , C 4
` -
C H
3
)
,
3
.
5 1 ( Z H
,
d
,
C
l ` 一
C H
Z
)
,
3
.
9 0 ( 3 H
, s ,
C
7一
O C H
3
)
.
5
.
2 1 ( H
,
m
,
C Z
` 一
H )
,
6
.
2 0 ( H
,
d
,
J = 1 0 H
z , C
3 一
H )
,
6
.
8 2 ( H
,
d
,
J = 8
.
5 H
z , C 。 -
H )
,
7
.
3 8 ( H
,
d
,
J = 8
.
5 H
z ,
C
: 一 H )
,
7
.
6 0 ( H
,
d
,
J = 1 0 H
z , C
、 一
H )
。
M S m /
z : 2 4 4 ( M
十
)
,
2 2 9
,
2 0 1
,
1 3 2
。根据理化数据和 光谱分析与文
献 〔2二比较 , 并与标 准品 一起测混合熔点 不下
降 , 故确定化合物 I 为 o s t h o l 。
l
: 米黄色针晶 ( 丙酮 ) , m p 1 8 9 C ~ 1 9 1
〔、 , R f 0 . 5 3 8 (草绿色荧光 ) 。 jt v 入气撬岔1 n m :
2 4 3 ( 肩峰 ) , 2 5 9 , 2 6 8 , 3 1 2 IR 、 欺鑫 C 】1 1
3 1 0 0 一 3 0 5 0 ( C H ) , 1 7 2 0 ( a , p 不饱 和 内
酷 ) , 1 6 0 0 , 1 4 8 0 ( 苯环 ) 。 ’ H N M R (C D C 13 )
6
: 4
.
3 4 ( 3 H
, s , C
: 一
O C H
:
)
,
6
.
2 0 ( I H
,
d
,
J =
1 0 H z
,
C
3一 H )
,
7
.
1 6 ( I H
, 5 , C s
一
H )
,
7
.
3 3
( I H
,
d
,
J = 8
.
5 H z
,
C
: ` 一
H )
,
7
.
5 3 ( I H
,
d
,
J -
8
.
5 H z
,
C
: ` 一 H )
,
8
.
3 0 ( I H
,
d
,
J = 1 0 H
z ,
C
4 -
H )
。
M S m / z
: 2 1 6 ( M
一
)
,
2 0 1
,
1 8 8
,
1 7 3
,
1 4 5
。
根据理化数据和 光谱分 析与文献 〔3 〕比较 , 并
与标准 品测混合熔点 不 下 降 , 故确定化合物
I 为 b e r g a p t e n 。
皿 : 淡黄色针晶 (丙酮 ) , m p 1 5 O C 一 1 5 2
C
,
R f 0
.
4 5 6 (棕黄色荧光 ) 。 U v 入气款于 n m :
2 4 1
,
2 4 5
,
2 7 0
,
3 1 3
。
xR
。 黑乳 c m 一 ’ : 3 1 2 5 ~
3 0 5 0 ( C H )
,
1 7 2 0 ( > C = O )
,
1 5 8 2
,
1 4 7 0
( 苯环 ) 。 ’ H N M R ( C D C 13 ) a : 4 . 1 4 ( 6 H , s ,
C s a
一
O C H
3
)
,
6
.
2 1 ( I H
,
d
,
J = 1 0 H
z , C 3
一
H )
,
6
.
9 3 ( I H
,
d
,
J = 2 H
z , C
; ` 一
H )
,
7
.
5 6 ( I H
,
d
,
J
一 2 H z , C S ` 一 H ) , 8 . 0 3 ( I H , d , J = 1 0 H z , C 4 -
H )
。
M S m / z
: 2 4 6 ( M
+
)
,
2 3 1
,
2 0 3
,
1 7 5
,
1 6 0
。
以上 光谱数据与文献 〔们 比较 ,并 与标准 品一
起 测 混合 熔点 不下 降 , 故确定 化 合物 班 为
is o p im P in e l l i n
。
w : 无 色 针 晶 ( 丙 酮 ) , m p 1O O C 一 1 0 2
C
,
R f 0
.
5 0 (黄色荧光 ) 。 U v 久气器 n m : 2 4 4
(肩峰 ) , 2 4 9 , 2 6 4 , 3 0 0 。 I R , 乐靠 Cm 一 ’ : 3 1 2 0 ,
3 1 0 0
,
3 0 5 0
,
1 7 2 0
,
1 5 8 0
,
1 3 0 0
。 I
H N M R
·
8 1 4
·
( C D C 1
3
) “ : 1 · 7 1 ( 6 H , s , 一 e < S耳; ) , 4 . 9 5
( ZH
,
d
,
J~ 7
, 一
O C H
Z
)
,
5
.
5 6 ( I H
,
t
, 一
C H 一 ) ,
6
.
2 9 ( I H
,
d
,
J = 10 H z
,
C
3一
H )
,
6
.
7 8 ( I H
,
d
,
J = 2 H
z ,
C
4 ` 一
H )
,
7
.
2 9 ( I H
, s , C
s一
H )
,
7
.
6 7
( I H
,
d
,
J = 2 H
z , C
S` 一
H )
,
7
.
7 3 ( I H
,
d
,
J = 1 0
H z
,
C
4 一
H )
。
M S m / z
: 2 70 ( M
+
)
,
2 0 2
,
1 7 4
,
1 4 6
,
1 1 6
,
6 9
,
4 1
。 以 上光谱数据与文献 〔 4〕比
较 , 并与标准品测混合熔点不下降 ,故确定化
合物 w 为 im p e r a t o r i n 。
v
: 淡 黄 色针 晶 (沸 水 ) , m p > 3 0 0 C ,
u v * 狱貂 n m : 2 0 9 , 2 6 3 。 xR 。 盔乳。 m 一 ’ : 3 2 0 5 ,
3 1 7 2
,
3 0 8 9
,
3 0 4 3
,
2 9 7 8
,
1 7 2 6
,
1 6 7 6
,
1 4 4 9
,
1 2 1 1
,
8 1 3
。 I
H N M R ( D M SO
一
D
。
) 占:
1
.
7 2 ( 3 H
, s , 一 C H
3
)
,
7
.
2 1 ( I H
, s , 一 CH )
,
1 0
.
6 2 ( I H
, s , 一 N H )
,
1 1
.
0 4 ( I H
, s , 一 N H )
。
, 3
C N M R ( D M S O
一
D
6
) 己: 1 5 1 . 6 ( C Z ) , 1 6 5 . 1
( C
寺
)
,
10 7
.
1 ( C
S
)
,
1 3 7
.
9 ( C
`
)
,
1 1
.
9 ( C
7
)
。
m / z
:
1 1 2 (M
+
)
,
6 9
,
5 5
,
4 2
。 以上光谱数据与
S a dt le r 〔4〕标 准光谱一致 , 故确定化合物 v 为
t h y m i n e
。
矶 : 淡 黄 色针 晶 (沸水 ) , m p 1 5 0 C (分
解 ) , u v * 黑君 n m : 2 0 3 , 2 4 5 。 I R v 今乳 e m 一 ’ :
3 1 3 4
,
1 6 8 8
,
1 6 7 8
,
1 5 8 1
,
1 3 4 6
,
1 2 1 3
,
7 9 0
。
,
H N M R ( D M S O
一
D 。 )占: 7 . 9 6 ( I H , s , C ` 一 H ) ,
8
.
1 0 ( I H
, s , C
Z 一
H )
,
1 2
.
3 6 ( I H
, s , 7
一
N H )
,
1 3
.
2 3 ( H
, s , 1
一
N H )
。
M S m / z
: 1 3 4 ( M + )
,
1 0 9
,
8 1
,
5 4
。 以 上测试光谱数据与 S a d t l e r 标
准 光谱一 致 , 故确 定化 合物 VI 为 h y p o xa n -
t h i n e
。
vI : 浅黄 色 针 晶 (热 水 ) , m p > 30 0 ` C ,
u v 入狱六 n m : 2 0 6 . 5 , 2 5 5 . 3 。 I R , 盔乳 。 m 一 ’ :
3 2 1 2 ~ 3 1 0 0
,
1 7 13
,
1 6 5 0
,
1 5 10
,
1 4 2 0
,
1 2 4 0
,
8 2 7
,
7 6 0
。 I
H N M R ( D M S O
一
D 。 ) 6 : 5
.
4 4
( I H
,
d
,
J = 7
.
5 H z
,
C
S一
H )
,
7
.
3 9 ( IH
,
d
,
J =
7
.
5 H z
,
C
`一
H )
,
10
.
8 0
,
1 0
.
9 9 ( 各 I H , s , -
N H )
。 ` 3
C N M R ( D M SO
一
D
。
) 6
:
1 0 0
.
3 ( C
S
)
,
14 2
.
2 ( C
6
)
,
1 5 1
.
6 ( C
Z
)
,
1 6 4
.
4 ( C
`
)
。
M S m /
z : 1 1 2 (M
+
)
,
6 9
,
4 2
。 以上光谱数据与文献 〔, 〕
比较 , 确定化合物 VI 为 u r a e i l 。
恤 : 无色鳞 片状结 晶 (热 水 ) , m p > 3 0
c
,苟三酮反应呈阳性 。 u v 入狱弈 n m : 20 7 . 2 ,
2 7 1
.
5
,
2 9 5
.
9
。
I R 、 软乳 。 m 一 ’ : 2 9 6 0 , 2 5 7 5 ,
2 1 8 0
,
1 6 0 6
,
1 5 8 4
,
1 3 6 0
,
1 3 5 1
,
8 4 3
。
,
H N M R ( D
Z
O ) 6
: 0
.
9 9 ( 3 H
,
m
, 一
C H 3 )
,
1
.
0 5
( 3 H
,
m
, 一
C H
3
)
,
2
.
2 2 ( I H
,
m
,
C
3 一
H )
,
3
.
5 5
( I H
,
d
,
C Z
一
H )
。 以上光谱数据与 S a d t l e r 〔8 〕标
准光谱一致 , 并与标准品测混合熔点不下降 ,
故确定化合物珊 为 L 一 ( + ) 一 va h n e 。
仄 : 无色片状结 晶 (热 水 ) , m p > 29 8 C
(分解 ) , 苟三酮 反应呈 阳性 。 u v 入狱火 n m :
2 4 2
,
2 5 8
,
2 6 7
。
I R , 盔乳 e m 一 1 : 3 0 4 0 , 2 1 0 0 ,
1 5 9 0
,
1 4 9 0
,
1 4 0 0
,
1 3 30
,
1 0 7 0
,
8 4 0
。 以 上
光谱数据与光谱集 〔9二所载数据一致 , 并与标
准品对照纸层析亦相同 , 故确定化合物 仄 为
D
一
p h e n y l a l a n i n e
。
参 考 文 献
1 殷学军 ,等 . 癌 变 · 畸变 · 突变 , 1 9 9 8 , 10 (3 ) : 13 3
2 陈尚齐 ,等 . 药学学报 , 19 8 2 , 17 ( 5 ) : 3 9 1
3 杨秀伟 ,等 . 中草药 , 1 99 3 , 2 4 ( 1 0 ) : 5 0 7
4 I e e K H
,
e r a l
.
J P h
a r m s e i
,
1 9 6 9
, 5 8 ( 6 )
: 6 8 1
5 S a d t l e r s t a n d a r d
s p e e r r a
.
U V
s p e e t r a , 1 9 7 2
:
1 8 3 8 5
S a d t l
e r s t a n d a r d
s P e e t r a
.
IR
s Pe e t r a
,
1 9 7 1 : 8 6 83
S a d r l e
r s t a n d a
r
d
s p e e t r a
.
I
H
一
N M R S p
e e t r a
,
1 9 7 0 : 9 3 9 4
6 S a d l l e r
s t a n d a r d
s p e e r r a
.
U V
s p e e t r a , 1 9 7 1
:
1 7 7 6 3
S a d t l e r s r a n d a r d s P e e t r a
.
IR s Pe e t r a
, 1 9 7 1 : 2 1 1 38
S
a
d t l
e r s t a n d a r d
s p e e r r a
.
I
H
一
N M R S p
e e t r a
,
1 9 7 7
:
2 75 60
7 卢颖等 . 中国中药 杂志 , 1 9 7 2 , 17 ( 8 ) : 4 8 8
8 S a d t l e
r s t a n d
a r
d
s P e e t r e
.
IR s Pe e r r a
,
1 9 70 : 4 5 3
S
a
d t l
e r s t a n d a r d
s p e e t r e
.
I H
一
N M R S p
e e t r a
,
1 9 7 1
:
10 3 6 3
9 A t l a
s ( ) f s p e e t
r a
1 D a [ a a n d P h y
s
i e a l C o o
s t a n t s f o r o
r -
g a n i
e
C o n p o u n d
s
( 1 9 9 9
一
0 1
一
1 1 收稿 )
异黄酮类薄层简易显色鉴别方法
上海中医 药大学 中药研 究所 ( 2 0 0 0 3 2) 宋 纯清 胡之璧
黄酮体 化合物是具有 C 。 一 C 3 一C 。 骨架 的一大类化
合 物 , 是许 多 中草 药 的主要 有效 成分 , 到 目前 已 有
2 0 0 0多 天 然化 合物 〔 , · 2〕 , 其 生理 活性 与应用 范 围也
愈来愈广 泛 , 而异 黄酮类是其 中一大类化合物 , 主要
包括异黄酮 ( is o f l a v o n e s ) , 异黄 烷 ( , s o f la v a n s ) , 紫
檀 烷 ( p t e r o e a r p a n s ) 3 类 。 主 要分 布 在 豆 科 ( 占
7 0 % )
, 其次分布于莺尾科和 桑科 等植物中〔 3 2 。 其 中
生理 活 性也 相 当广 泛 , 如 芒柄 花素 ( f o r n z o n o n e t ; n )
的 降 血 脂 、 抗 氧 自 由 基 作 用 “ , ; 染 料 木 素
( g e n is t e i n )
、 大豆 素 ( d a id z e i n ) 、 p r u n e t in 的雌 性激
素作用 〔创 ;异黄烷 、 紫植烷类 的抗菌 、 植 物毒素 、 霉菌
毒素作用等 〔 7一 ’ 。 , 。 在中草药有效成分研 究中如何运
用快 而简便 的方法来识 别有效 成分类 别 , 进而 拟定
分离 方法 或定 向 寻找 某类 成分 越来 越 受到 普遍 重
视 。 我们在 豆科相 思子 、 黄茂等有效成分研究 中发现
上述 3 类异 黄酮成分 〔 l 。一 ` 3〕结合 紫外 和应 用香 兰素
硫酸 薄层 显色法 加 以区别 , 并 在实 践中追 踪薄 层显
色相 同的斑点分 得相同骨架的异黄酮 类成分 。 并经
35 个化合物 进一得到验证 。 这为定向寻找和鉴别异
黄酮 化合物提 供 了一个简便快捷的方法 。
l 材料和方 法
硫酸 ( A R ) . 香兰 素 , 硅胶 F 25 ; 预制板 ( 青岛 ) , 电
热板或 电吹风 . 待分离样品 , 层析缸 。
样 品 : 化 合 物 8 一 1 8 , 2 一 3 4 我 们 从黄 蔑 中分
得 〔 1。一 ’ z 一 , 其余 为 E xt r as y nt h e s e 公 司标准 品 , 样 品点
于 薄层 板后 , 用 适 当展 开 剂 展层 ( 如抓 仿一 甲醇 一 5 0
, 1
·
2 0 ’ 卜 1 0 , 卜 5 : l ) . 展 开后 的板 先在紫外分 析
灯下观 察 , 并斑点记 号 , 然后用 0 . 5 %香 兰素硫酸 喷
雾后 用电热板 或电吹风加热显色 , 异黄烷类 ( is of la -
v a n s ) 显 红色 , 紫檀素类 ( p t e r o e a r 一 p a n s ) 显黄色 , 且
显 色较持 久 ;黄 酮 、 异黄酮 、 双 氢黄酮 类在 紫外灯 下
可见斑 点 。
几 种黄酮类化 合物 的化学结构见 图 1 。 35 个黄
酮化合物 薄板 显色特征见表 1 。
2 结论
运 用硅胶 F 2 5。预制薄板 , 香兰 素硫酸 显色方 法 ,
简 单而快捷的 区 别 3 个 主要类别的异 黄酮类成分 。
这对 于定向寻找有效成分 、 对 于化学分类学 、对 于植
物化学 和中草药有 效成分研究提供 了一个 简便有用
的方 法 。 在具体鉴定 化合物结构时还需结合其 它光
谱学和 化学转化等方法 〔’ 令· ` 5〕 。
《中草 药 》 ] 9 9 9 年第 3 0 卷第 H 期 . 8 1 5 .