全 文 ：瓜萎皮提取物对大鼠主动脉 P D C C a Z + 内流的影响△
四 川大学原子核科学技术研究所 (成都 6 1 0 0 6 4)
四 川大学化学系
莫尚武 ’ 刘 宁 张坐奎
吴 玉蓉 杨 涛
摘 要 为 了研究瓜 萎皮治 疗冠心 病 的有效成分 , 用 醚醇法 和水 煎醇沉 法提取瓜萎 皮的有效成
分 , 并 用 ‘℃ a 跨膜测量方法研究 各提取物对大 鼠主动脉 P l:犯 钙通道 C a Z + 内流的影响 。 发现抓仿和
醉溶物 能阻滞 C a ‘+ 内流 , 水溶物具 有相反 的作用 , 其中抓仿提 取物浓 度为 3 0 m g / m L 时 , 使 C a , +
内流量 比对照 下降 31 . 57 % 。 实验结果表明瓜萎皮 中可能有 7 种组分具有 治疗冠 心病 的活性 。
关扭词 瓜萎皮 钙拮抗剂 放射 性同位 素弓SC a 冠心病
In flu e n ee o f E x t r a e t o f M e s o e a r p o f M o n g o lia n S n a k eg o u r d (T ri c ho sa n the s kiri lo w ii)
o n T r a n sm em b r a n e C a
Z + In flu x in R a t A o r tie R in g
M
o S h a n g w u
,
W
u Y u r o n g
,
Liu N in g
, e t a l
·
(In s tit u te o f N u c lea r Se ie n e e s a n d T e e hn o lo g y
,
S ie h u a n
U n iv e r s ity
,
C h e n g d u 6 1 0 0 6 4 )
A bs tr a e t P o w d e r e d m e s o e a rp o f T r ic h o s a n th e s k ir ilo w ii M
a x im
.
w a s e x tr a e te d w ith Pe tr o le u m e th e r
,
e t ha n o l a n d w a te r
,
P a r tit io n e d w ith e hlo r o fo r m a n d e thy l a ee ta te o r P r e e iPit a te d w ith th e a dd itio n o f e th a n o l
t o o bta in a to ta l o f 1 4 fra et io n s
·
T h e ir e ffe et s o n C a , + in flu x o f r a t a o r t ie rin g s w e r e st u d ie d w it h ‘SC a t r a n s
-
m e m b r a n e in flu x te e h n iq u e
.
R e s u lt s s h o w e d rh a t 7 fr a e tio n s e o u ld b lo e k p o te n tia l d e p e n d e n t C a Z + in flu x
,
su g g e s tin g th e ir p o te n tia l u se fo r t he t r e a tm e n t o f e o r o n a r y he a r t d is e a s e s
·
A m o n g th e m
, e hlo r o fo r m e x t r a e t
r e s u lte d in a d e e r e a s e o f C a Z + in flu x o f 3 1
.
5 7 % in
e o m p a r is o n w ith th e e o n t r o l
.
K ey w o r d s T ric ho s a n th e s k ir ilo w ii M
a x im
.
Ca Z + a n ta g o n is t ‘SC a in flu x
瓜萎始载于《名医别录 》, 原名括楼实 , 为
葫 芦 科 植 物 括 楼 T ri ch os a nt he : ri ri lo w i
M a r im
. 或双边括楼 T . ro s th o r n ii H a r m S 的
干燥成熟果实 。果实剖开 , 除去果瓤及种子称
瓜萎皮 。 皮 、籽合用称瓜萎 。 瓜萎是一种常用
中药 , 具有清热 、涤痰 、宽胸散结 , 润燥滑肠之
功效 , 对肺热 、 咳嗽 、胸痹心痛 、乳痛 、肺痈 、大
便秘结有显著疗效 [l, 2 〕。近年来研究证明瓜篓
有扩张冠脉 、保护心肌缺血等功效 巨3〕。 为了阐
明瓜萎治疗冠心病的有效成分 , 笔者用醚醇
法和水 煎醇沉 法闭从瓜萎 皮 中分 离提取 出
1 4 个组分 , 并用 弓SC a 跨膜测量方法研究 了各
组分对 大 鼠主 动脉 电压依 赖钙通 道 (PD C )
C a 2+ 内流 的 影 响 。 冠 心病 的发 病 机制 , 和
C a
Z十大量涌人心血管细胞中有重要关系 , 用
钙拮抗剂阻滞钙通道 , 减少 C a “+ 内流 , 病况
将出现好转 [5, 6 〕。 因此 , 瓜萎提取物中凡能阻
滞钙通道 , 减少 C a Z + 内流的组分将被认为是
治疗冠心病的有效成分之一 。 血管平滑肌细
胞 膜上至少存 在 3 种钙内流途径 : (1 )滋流
(le a k )钙通道 , 细胞处于静息状态下的 C a Z+
内流 ; (2 )电位依赖性钙通道 (p o t e n t ita l一d e -
p e n d e n t C a
Z + e h a n n els
,
Pl〕C ) ; (3 )受体操纵
性 钙通 道 (r e e p t o r 一 o p e r a t e d C a Z + eh e n n e ls ,
R O C )
。 当高钾引起平滑肌细胞膜去极化 , 导
致 PD C 开放时 , C a Z + 内流量较 le a k 和 R O C
都强 , 因此研究瓜萎皮提取物对大 鼠主动脉
P IX ) C a
’+ 内流的影响 , 对筛选治疗冠心病中
,
A d d r e s s
:
M o Sha n g w u
,
In s t it u t e o f N u ele a r Sc i
e n e e s a n d T e e hn o lo g y
,
S ie hu a n U n iv e r sity
,
Che n g d u
△国家自然科学基 金 (19 7 7 50 3 4) 、核工 业科学墓 金项 目
.
6 7 4
.
药的有效成分有一定意义 。
1 材料和方法
1
.
1 动物及药 品 : W ist a r 大鼠 , 体重 (2 0 0 士
2 0 ) g
, 雌雄兼用 , 购 自成都抗生素研究所实
验 动物 中心 ; 放射 性 同位 素 4 5 Ca CI: ( 1 7 5 0
MBq / g C
a )英国 A m e r s ha n 公司产 品 , 硅 胶
H 60 青岛海洋化工厂产品 。 其它药物市售分
析纯 。
1
.
2 试液 : PS S 溶液 (m m o l/ L ) : N a C I 1 3 7 ,
C a C 1
2 1
.
5
,
M g C 12 1
.
0
,
K C I 3
.
0
,
H E PE S 2 0
,
葡萄 糖 2 0 ; 高钾 PS S 溶 液 (m m o l/ L ) : K C I
1 0 0
,
N a C I 4 0
, 其 余 成 分 同 P SS 溶 液 ; 无
C a
’+ 一E G T A 洗 涤液 (m m o l/ L ) : E G T A 1 0 ,
无 C a C1 2 , 其余成分同 PS S 液 , 以上溶液用重
燕水配制 pH 7 . 4 ; 甲苯 闪烁液 : PPO 5 . 0 9 ,
PO PO P 0
.
4 9
, 乙二醇乙 醚 3 0 0 m L 加 甲苯
定容至 1 0 0 0 m L 。
1
.
3 瓜萎皮分离提取方法
1
.
3
.
1 醚醇提取法 : 将瓜篓皮粉碎用石油醚
回流提取 Z h , 残渣再用 95 % 乙醇 回流 Z h ,
然后将提取液浓缩 , 浓缩液分别用 50 m L 的
水 一饭仿 ~ 1 : 1 ;水 一乙酸乙酷一 l : 1 洗涤 , 得
石油醚 、抓仿 、 乙酸乙醋有机相和水相 4 个组
分 , 将各组分除尽溶剂 , 配成 30 m g / m L 水溶
液备用 (若不溶可加少量吐温 一40 ) 。
1
.
3
.
2 水煎醇沉法 : 将瓜萎皮粉碎 , 水 煎 3
次 , 合并滤液蒸发成浸膏状 , 95 % 乙醇沉淀 ,
滤液蒸 干 , 过大 孔树脂 , 分 别用 水和 30 % ,
7 0写 , 9 5 % 的乙 醇梯度洗脱 , 除尽溶剂 , 配制
成 3 0 m g / m L 水溶液备用 。
1
.
4 4 5C a 跨膜测量 : 按文献仁, , 8〕加以改进 。击
昏大鼠取出胸 主动脉 , 置于 PS S 溶液中轻轻
除去血管外结缔组织 , 剪成长 5 ~ 6 m m 的动
脉 环 (重 s m g 左右 ) , 将动脉环置 PS S 液中
保温 l h , 移动脉环到含 4 5C a (3 7 kB q / m L )的
PS S 平衡 1 0 m in ;再 移动脉 环到含 ‘S C a (3 7
k鞠 / m L )高钾溶液中处理 10 m in , 以上步骤
都是在 37 ℃连续通 0 : 条件下进行 。 然后将
动脉环移人 O一 2℃无钙 E G T A 中洗涤 l h ,
用滤纸吸干动脉环称重后 , 分别放人测量瓶
《中草药 ) 1 9 99 年第 3 0 卷第 9 期
中 , 加 入 7 0 % H C IO 、 2 5 拜L 和 3 0 % H ZO : 5 0
拼L , 于 8 0 ℃水浴中消化 2 0 m in , 冷却后加 甲
苯闪烁液 4 m L 黑暗中放置 3 h , 用 EJ一21 0 7P
液体闪烁计数器测量放射性活度 (d p m ) 。 动
脉环 C a 2+ 内流量由以下公式确定 :
Ca Z + 内流量年 m o l/ k g ) =
动脉环 ‘SC a d p m 、
二丁气韶尸军军爪二 ;, 二r 忿T - 2 味叨豚 外里重比g 少
溶液 C a , + 浓度年m o l/ m L )
溶液中‘SCa 活度 (d pm / m L )
实验数据用 牙+ : 表示 , 用 t 检验计算显
著性差异 。 操作过程中 , 待测药物于保温 0 . 5
h 后加人到 PS S 液 中 , 继续保温 0 . s h , 移人
到 4 5 C a 一PS S 平衡液 和 ‘S C a 一高钾液这 两溶液
中也含相同浓度待测药物 。 对照组于相应步
骤加等量的三蒸水 。
2 实验结果
2
.
1
、 瓜萎皮醚醇法提取物 C a 2+ 拮抗作 用 :
见表 1 。
衰 1 瓜葵皮醉醉法提取物对 PD C C扩+ 内流的影晌
组别 浓度 (m g / m L ) C a Z + 内流量年m o l/ k g )
对 照 一 1 8 2 . 8 0士 1 4 . 8 4
石油 醚组 3 0 1 3 8 . 9 8士 8 . 1 1 荟 荟
石油 醚组 3 1 6 7 . 2 7士 1 3 . 5 8 .
氛仿组 3 0 1 2 7 . 5 0士 1 0 · 0 “ ‘
抓仿组 3 1 5 8 . 1 6士 1 1 . 3 4 ’ ‘
乙酸 乙醋组 3 0 1 4 3 . 7 6士 18 · 8 1 ‘ ’
乙酸 乙酷组 3 1 6 9 . 8 7士 1 3 . 3 2 ’
水溶组 3 0 2 1 6 . 7 9士 8 · 5 5 . ‘
水溶组 3 2 0 8 . 7 9士 14 · 3 9 ”
n 一 6 , 与对照组 比较 ; ’ 尸< 0 . 05 二 尸< 0 . 01
. 件 . 尸< 0 . 0 0 1
石 油醚 、 抓仿 、 乙 酸乙 酷提取物 浓度在
3 0 m g / m L 时 , 都使 C a 叶 内流显著减 少 , 当
浓度稀释 10 倍 , 即为 3 m g / m L 时 , 仅氛仿组
阻滞 C a 2+ 内流的作用仍显著 。 表明抓仿萃取
物钙拮抗作用很好 。 水溶组分不使 C a Z+ 内流
减 少 , 反 使 C a 2+ 内流上 升 。 浓度为 30 和 3
m g / m L 的 C a Z + 内流 量 比 对 照 分 别 增 加
3 3
·
9 9 和 2 5 · 9 9印m o l/ k g ) 。 说明水溶物不仅
无钙拮抗作用 , 而且有激动作用 。
2
.
2 氛仿组分薄层分离的 4 种成分 的钙拮
抗作 用 : 见 表 2 。 将 抓仿 提 取 物 过 硅胶 柱
(G 6 0 )
, 用丙酮 一 乙酸乙醋 一石油醚 ~ 1 : 2 . 7 :
.
6 7 5
·
2
.
7 进行薄 层分 析 , 发现共有 4 个斑点 。 A :
R f= 0
.
8 6
,
B
: 为两种物质 R fl 一 0 . 6 1 、 R f: ~
0
.
4 6
,
C
:
R f= 0
.
2 2
,
D : R f= O(即在原点 ) 。 用
展开剂分离洗脱获取 A , B , C , D 4 种成分 。从
表 2 看出 , 当浓度为 1 0 m g / m L 时 , 这 4 种成
分的钙拮抗作用与对 照组 比都有显著差异 。
而相互之间差异不大 。 说 明这 4 种成分药效
学特性相近 。
表 2 级仿组分中 4 种成分对 P D C C扩十 内流的影晌
浓 度 (m g / m L )
l0
l0
10
l0
C a Z+ 内流量 年m o l/ k g )
1 7 9
.
5 2士 1 0 . 2 6
1 5 6
.
3 9 士 6 . 4 0 “
1 5 2
.
8 0士 1 3 . 9 8 “ .
1 5 2
.
4 9士 3 . 6 1 . ‘
1 4 9
.
5 0士 1 6 . 9 9 “ .
n 一 6 , 与对照组 比较 : ‘ . 尸< 0 . 0 5
2. 3 水煎醇沉法 提取物 的 C a 2+ 拮抗 作用 :
见表 3 。
裹 3 水煎醉沉法提取物对 PD C C扩 + 内流的影晌
组 别 浓度(m g / m L ) C a Z + 内流t 伽m o l/ k g )
对照 一 18 9 . 25士 10 . 8 4
水煎浓 30 17 9 . 10士 15 . 5 6 ·
水煎液的醉沉物 3 0 2 2 3 . 16士 15 . 9 2二
醉溶液过柱 30% 乙醉洗 3 0 16 9 . 4 0士 11 . 9 2 , .
70 %乙醇洗 3 0 14 9 . 0 6士 6 . 6“
95 %乙醇洗 3 0 1 64 , 1 6士 11 . 8 9“
水洗 3 0 1 98 . 2 7士 14 . 6 1 ,
。= 6 , 与对照组比较 : . 尸> 0 . 0 5 “ P < 0 . 05
结果表明 : 瓜萎皮水煎液的钙拮抗作用
很弱 , Ca Z + 内流 比对照组下 降仅 8 . 1 拜m ol /
k g
, 差异不 明显 。 水煎液 乙醇的沉淀物没有
钙拮抗 作 用 , 反而 使 C a Z+ 内流 增加 3 5 . 9 1
拼m ol /k g 。 水煎液醇沉后 的醇溶部分 , 经柱层
析 , 水洗脱组分 , 也无钙拮抗作用 , 而且能使
内流上升 。 乙醉 3 0 %一 9 5 %的洗脱组分 , 都
使 C a 2+ 内流减少 , 共 中 70 % 乙醇洗脱组 比对
照降低达 2 0 . 4 0 % , 有显著差异 。
3 讨论
3
.
1 瓜萎中所含化学成分十分复杂 , 用常规
方法筛选治冠心病 的活性成分工作量较大 ,
在分离筛选过程中 , 有效成分易丢失 , 最后得
到的单体化合物往往不令人满意 。 用 咯SCa 跨
膜测量技术和化学分离方法相结合 , 初步确
定 氛仿 萃取的 4 种成分 和 3 0 %一 95 % 乙 醇
洗脱的 3 种组分具有钙拮抗作用 。 这几种组
分 可能是瓜萎皮治疗冠 心病 的有效成分 之
一 。 今后拟进一步分离纯化 , 再用质谱 、核磁
共振谱以确定其分子结构 。
3
.
2 瓜萎皮的水溶部份有明显的钙激动作
用 。目前有关钙拮抗剂研究资料较多 , 但钙激
动剂研究资料还很少 。 其水溶部分主要由蛋
白质 、多糖 、多肚组成 。 到底是那种物质有激
动作用 , 有待深人研究 。
3
.
3
‘S
C a 跨膜流动测量方法 , 在筛选 中药钙
拮抗剂的有效成分研究中有快速 、准确 、直观
等优点 , 可避免有效成分在分离 、纯化过程中
丢失 。所得的有效成分是否真有价值 , 尚需进
行 临 床 检验 。 各 提 取 组分 对 静 流 钙 通 道
(le a k )和受体钙通道 (R O C )的影响 , 将另文
报道 。
参 考 文 献
1 颜正 华 , 主编 . 中药学 . 北京 : 人 民卫 生出版社 , 1 9 91 :
6 1 1
2 集志茂 . 中国中药杂志 , 19 90 , 15 (12 ) ; 4 9
3 杜上鉴 . 医药工业 , 1 9 8 8 , 1 9 (7 ) : 3 0 1
4 陈 奇 . 中药药理研 究方法 . 北京 : 人民卫生 出版社 ,
1 9 9 3
:
6 6
5 张廷杰 . 心血管病学进展杂志 . 1 9 95 , 16 (1 ) : 4 3
6 藏万生 , 等 . 云南中医 学院学报 , 19 9 4 , 17 (2) : 25
7 G o d fr a in g T
.
J Pha r m a e o l E x P T he r
,
19 8 3
,
2 2 4
: 4 4 3
8 陈恒留 . 新 药与临床 , 1 9 94 , 5 1 3 (3 ) : 1 4 4
(1 9 9 8
一
0 1
一
1 2 收稿)
ABCD
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敬 告 读 者
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6 7 6
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