全 文 ：价蒲公英质量的依据 。
3
.
2 作者 选定 含 5 % 甲酸的 甲醇溶液作 为
溶 剂超声 提取 , 因为咖啡酸和绿原酸往往 以
游离和盐的形式存在于生物体 内 , 加酸提取
更完全 。 在流动相的选择 中 , 经过反复摸索 ,
选择酸性流动相 , 因咖啡酸和绿原酸均是有
机酸 , 酸性可抑制其 电离 , 使峰形稳定 , 分 离
度好 。
3
.
3 国内蒲公 英常用 17 个 品种和薄公英
1 2 种商 品药材 中咖啡酸和绿原酸的含量差
别很大 , 含量低的蒲公英品种是否作为药用 ,
值得进一步探讨 。 药典应尽快建立蒲公英药
材的质量标准 , 规定含量下限 , 以保证蒲公英
临床用药的有效性和合理性 。
3
.
4 我们首次成功地应用 H PL C 同时测定
蒲公英 中的有效成分咖啡酸和绿原酸 的含
量 , 分离 良好 , 快速 、准确 、重现性好 , 可在 30
m in 内完成测定 , 为药典 建立蒲公英药材的
质量标准提供了依据 。
参 考 文 献
1 中华人 民共和国药典 . 一部 . 19 95 : 3 14
2 凌 云 , 等 . 中国药学杂志 , 1 9 97 , 3 2 (1 0 ) : 3 8 4
3 国家 医药管理局 中草药情报 中心站 . 植物 药有效成分
手册 . 北京 : 人 民卫生 出版社 , 19 86 : 121
4 李仪奎主编 . 中药药理实验方法学 . 上海 : 上海科学技
术 出版社 , 1 9 9 1 : 2 8 6
(1 9 9 9
一
0 8
一
17 收稿)
抗病毒红藻多糖的提取与测定
天津医科大学药学院(3 0 0 2 0 3)
南开大学生命科学 院
张 斌 ’
陈家童 白玉华 耿运琪
摘 要 从我 国沿海红藻 中提取 的粗多糖 , 经 D E A E 一纤 维素 柱层析得到 红藻多糖 R P : , 实验证实
有 明显抗病毒作用 。 通过气相色谱 、红外光谱 、 YaP he 测定方 法 , 证 明红 藻多糖 R P : 含硫酸基是一
种硫酸醋化多糖 , 其单糖组成为半乳糖和 3 , 6 一 内醚半乳搪 , 定量分析 含量分别 为 : 半乳糖 70 . 04 % 、
3
,
6
一内醚半乳糖 9 . 56 % 、硫酸基 1 7 . 3 0写 。
关扭词 红藻多糖 抗病毒 硫 酸醋化 多糖 艾滋病
E x tr a c tio n a n d C h a r a c te r iza tio n o f a V ir u s In h ib ito r
,
Su lfa te d Po lysa c c ha r id e s
E x tr a c ted f r o m R ed A lg a (H a ly m e m in sin e n sis )
Zh a n g B in
,
C h e n Jia t o n g
,
Ba i Y
u h u a
, e t a l
.
(C o lle g e o f Ph a rm a e y
,
T ia n ji
n U n iv e r s ity o f M
e die a l Sc i
-
e n e e s , T ia n jin 3 0 0 2 0 3 )
A hs t
ra e t A rh o d o p hy t a p o lys a e e ha r id e (R P , ) w a s e x t r a e ted a n d p u r ifie d fr o m r e d a lg a
, 月口ly m em in
sin e ns i
s T se n g e t
.
C
.
F二 Its e hr o m a t o g r a p h ie be ha v io r a n d e he m ie a l p r o p e r t ie s s u g g e s te d t ha t it 15 a su lfa te d
p o lys a e e ha rid e eo m p o s ed o f g a la e t o s e 7 0
.
4 4写 , s u lfo n a t e 1 7 . 3 0 % a n d 3 , 6 一a n h yd r o g a la e t o s e 9 . 5 6 % . P h a r -
m a e o lo g ie a l se r e e n in g p r o v e d th a t R P z 15 a v ir u s in h ib it o r
.
K e y wo
rd s rh o d o p h yta p o ly s a ee h a r id e (R P z ) v ir u s in h ibito r s u lfa te d p o lys a e e ha rid e A ID S
多糖作为免疫促进剂在临床上已广泛应
用 。 近年来研究发现多糖的衍生物特别是硫
酸脂 化多 糖具 有抗 凝 血作 用 [lj 、 抗 病毒 活
性川 , 它在艾滋病 (A ID S )治疗上的应用 已得
到证实阁 。 我国对 A ID S 的防治工作刻不容
缓 , 由于 H IV 基 因组具有高度的可塑性 , 其
A d d r e s s
:
Z ha n g Bin
,
De p
a r t m e n t o f Ph a r m a ey
,
T ia n jin U n iv e r sit y o fM e d ie a l Sc i
e n e e s , T ia n jin
《中草药 》1 9 9 9 年第 3。卷第 12 期 . 8 9 9 -
病毒能不断产生变异株 , 开发有效 的疫苗相
当困难 。因此 , 筛选具有明显治疗意义的药物
尤为重要 。
文献报道 , 从海藻 中提取 的红藻多搪为
硫酸醋化多糖 , 是 A M V 和 H IV 的反相转录
酶的抑制剂闭 。 体外实验表明 , 红藻中提取的
红藻多糖 (R P I 和 R P Z ) , 在细胞水 平上能 明
显抑制牛免疫缺陷病毒 B IV 的生长 , 具有开
发 A ID S 药物 的前景 [5j 。 笔者从我国沿海红
藻 中提取纯化得 到红藻多糖 (R P , ) , 并对其
理化性质 、成分进行了分析测定 , 为进一步开
发利用红藻多搪提供依据 。
1 材料 、仪器和试剂
l
·
l 材料 : 红 藻 H a ly m e n in s in e n s is T s e n g
e t C
.
F
.
C h a n g 采 自北戴河海滨 。
1
.
2 仪器 : M o d e l一 a n a le e t r fx 一6 5 型傅利叶红
外光谱仪 、 岛津 1 2 0 一0 2 紫外分 光光度计 、美
国惠普公 司 H e w le t t Pa e ka r d 5 8 9 0A 型气
相色谱 ;氢火焰离子化检测器 。
1
.
3 试剂 : D E A E 一C e llu lo s e D E 一 3 2 为 W h a -
t m a n 产品 , 标准糖和其它化学试剂均为国产
分析纯 。
2 方法
2
.
1 多糖的提取纯化 : 将采集的海藻漂白晾
干后粉碎 , 加蒸馏水 , 1 0 0 ℃提取 3 h , 过滤后
冷冻过夜 。 经醇沉后 , 以 Sev ag e 法闭去蛋白 ,
并透析 3 h , 再反复醇沉后 , 真空干燥 即得到
粗多糖 。将粗多糖溶于蒸馏水中 , D E A E 一C el -
lu lo s e 装柱后 , 用 0 . 0 1 m o l/ L 乙酸缓冲液平
衡 , 然后加样进行分段洗脱 , 逐步增加洗脱液
中 N aC I浓 度 (0 . 5 , 0 . 7 5 , 2 . 0 m o l/ L ) , 用 部
分收集器 自动收集 , 葱酮法检测 , 按吸收度合
并 、浓缩 、透析后 , 得到 3 个 组分 H S I 、 H S
I 和 H S I , 其 中样 品 H S I 经 实验证明具
有抗病毒活性 , 将其命名为 R P , 。
2
.
2 多糖的分析测定
2
.
2
.
1 多糖的定性检测 : 以 甲醇法和葱酮法
进行检测 。
2
.
2
.
2 紫 外光谱分 析 : 在 2 0 一 4 0 n m 区
间进行紫外扫描 。
·
9 0 0
-
2
.
2
.
3 单糖组分分析 : ¹ 气相色谱分析 : 将
样品加人 Z m ol / L HC L 一 甲醇密闭 8 0 ℃水解
24 h
, 蒸干溶剂后 , 制备糖膝 衍生物 , 然后上
机测定 。 气体 流速 : 20 0 m L / m in , 柱温 : 19 0
℃ ; 检 测 器 温 度 : 250 ℃ ; 气化 室 温 度 : 250
℃ 。 º 采用 Y a p h e 法 [7] , 以半乳搪和果糖作
为标准品 。
2
.
2
.
4 多糖的化学结构分析 [8] : ¹ 红外光谱
分 析 : K B r 压片法 , 在4 0 0 0 ~ 4 0 0 e m 一 ’区 间
进行红外扫描 。 º 采用 T e th o[ , 〕法定量测定
硫酸基的含量 。
3 结果与讨论
3
.
1 多糖 的理化性 质 : 红藻多糖 R P I 为白
色粉末状 , 不溶于高浓度的乙醇 、丙酮等有机
溶剂 。其溶液加入甲醇后 出现 白色浑浊 , 加葱
酮试剂后成蓝绿色 , 说 明 R P I 为多糖 。 经紫
外光谱检测 , 在 26 0 一280 n m 处未见到核酸
和蛋白质的吸收峰 。 经去蛋白后 , 在 280 n m
下检测 , 吸收度低于 0 . 05 , 说 明基本不含蛋
白质杂质 。
3
.
2 单搪的组成分析 ; 气相色谱测定红藻多
糖 R P , , 只检测 出一个峰 , 与标准单搪的出峰
时间比较 , 可知 15 . 23 m in 为半乳糖的出峰时
间 (图 1) 。 由此 , 可以推测出红藻多搪 R P , 主
圈 r 红 旅乡 粉
R P : 的 气
相色讼圈
此认为红藻 多糖
3
,
6一 内醚半乳糖 。
要 由半 乳糖 组成 。 Y a p he
法测定 R P ; , 结果表明 R PI
由半乳糖和 3 , 6 一内醚半乳
搪组成 , 经查标准曲线 , 其
含 量 分 别 为 70 . 04 %和
9
.
5 6%
。 据文献报道 , 3 , 6 -
内醚半乳 糖对 酸不稳 定 ,
当多 糖经 酸水解 时 , 它 就
被破 坏 , 所 以气相 色谱 只
检侧出一个峰 。 由于 IR 分
析和 Y aP he 法测定都证实
了 内醚半乳 糖 的存 在 , 因
R P I 组成单糖为半乳糖 和
3
.
3 多搪 的化学结构分析 : I R 图谱可见 , 在
3 6 0 0 ~ 3 20 0 e m 一 ’
, 1 40 0 ~ 1 2 0 0 e m 一 ’有两
组峰 , 表 明 了 R P I 为糖类 化 合物 。 3 6 0 0 一
3 2 0 0 c m
一 ‘吸收是 O 一H 伸缩振动 , 存在分子
间和分子 内氢键 ; 1 4 0 一 1 2 0 c m 一’的吸收
峰是 e 一H 变角振动 ; 1 2 0 0 一 1 o o o e m 一 ‘区段
的吸收峰是毗喃糖环醚键 (C 一O 一C )和经基的
吸收 , 说明多糖中内醚糖的存在 。 8 5 8 c m 一‘处
的吸收峰为硫酸基 一O 一5 0 3 一的 C 一0 一S 伸缩振
动而形成 月 2 56 。m 一 ’处的吸收峰系硫酸基 -
O
一
5 0
3 的 S 一 0 伸缩 振动造成的 , 均证 实了
硫酸根基 团的存在 , 说明 R P I 为硫酸醋化多
糖 。 T er h o 法定量测定 , 经查标准曲线得 出的
硫酸基含量为 1 7 . 30 % (表 1 ) 。
表 1 红旅多辘 R P , 的组成成分
半乳糖 (% ) 3 , 6一内醚半乳糖 (% ) 硫酸基 (% )
7 0 0 4 9 5 6 1 7
.
3 0
实验结果表明 , 红藻多糖 R P I 是一种含
硫酸基 的硫酸酷化多糖 , 检 出组成 的单糖及
其 百分含 量 比为半乳 糖 : 3 , 6一 内醚半 乳糖
70
.
4 : 9
.
56 (表 1 ) 。 我们先前实验证明它对
BI V 的生长有较强的抑制作用 , 这与 国外对
其它的硫酸醋化多糖抗 H IV 的研究结果一
致 。 牛免疫缺陷病毒抗艾滋病药物筛选模型
的运用 [l0 〕, 初步证实了红藻多糖 R P , 在治疗
A ID S 方面具有 良好的前景 。
由于 H a ly m e n in s in e n s is T s e n g e t C . F .
C ha ng 为 我 国沿海 常 见藻 类 , 且 红 藻多 糖
R P
, 提取方法简便易行 , 这就为开发新 的抗
病毒药物 , 研制我国 自己 的抗 A ID S 药物提
供 了新 的资源 。所以 , 这一方面的研究具有重
要意义 。另外 , 红藻多糖抗病毒的作用机理还
有待于进一步研究 。
参 考 文 献
1 H a t a n a k a K
,
et a l
.
J M e d C h e m
, 1 9 8 7 , 3 0 ; 8 1 0
2 Ba b
a M
.
J In fe e t D is
,
19 9 0
.
1 4 2
:
4 0 7
3 W a g n e r W H
.
A r z n eim
一
Fo r s eh D r u g R e s
,
19 8 9
,
3 9
:
1
4 H id e ki N
, e t a l
.
A n t im ie r o b ia l A g e n ts a n d C h em o th
-
e r a Py , 1 9 8 7
, 3 1
:
1 5 2 4
5 陈家童 , 等 . 南开大学学报 (自然科 学版 ) , 19 98 , 4 : 26
6 S ta u b A M
.
M e t ho d s in C a r b o hyd r Ch e m
,
1 9 6 5
,
5
;
5
7 Y a p h e W
,
et a l
.
A n a ly t ie al B ioc h e m is t r y
,
1 9 6 5 13
:
1 4 3
8 张维杰 主编 . 复合多搪生化技术 . 上 海 : 上海科学技
术出版社 , 1 9 8 7 : 1 2 1
9 T e r h o T
, e t al
.
A n aly tie a l B io eh em is t r y
,
19 7 1
, 4 1 :
4 7 1
10 王 岱 , 等 . 中国药理学与毒理学杂志 , 19 96 , 1 : 49
(1 9 9 9
一
0 1
一
1 4 收稿 )
车前草中熊果酸 、齐墩果酸的 H PL C 测定 △
河南中医学院 (郑州 45 0 0 3) 哀 坷 ’ 李根林 李俊芝 杨 怡
摘 要 采用 H P LC 法 同时测定车前草中熊果酸 、齐墩果 酸 的含 量 。 选用 Cl 。 O D S 色谱柱 , 流动
相 : 甲醉 一水 (8 8 : 1 2) , 检测 波长 : 2 2 0 n m , 流速 : 0 . 6 m L / m in , 柱 温 : 25 ℃ 。 熊 果酸和齐墩果 酸分别
在 0 · 4 0 4 2 ~ 2 · 0 2 0 拌g (r = 0 . 9 9 8 4 )和 0 . 4 1 0 一 2 . 0 5 0 拜g (; = 0 . 9 9 9 7 )范围 内呈线性 ; 熊果 酸 、齐墩果
酸的平均 回收率分别 为 98 . 2 % (R S D 一 1 . 74 % )和 97 . 8环 (R S D ~ 2 . 24 % ) 。 该法准确 、快 速 、灵敏 ,
重现性好 。
关键词 车前草 熊果酸 齐墩果 酸 H PL C 法
D e te r m in a tio n o f U r s o lie A eid a n d O le a n o lie A c id in A s ia tie Pla n ta in
(Pl
a n t a g o a sia tica ) b y H PL C
Y u a n K e
,
A bs tr 肠C t
L i G e n lin
,
L i Ju n z h i
, e t a l
.
(H e
’n a n C o lle g e o f T CM
,
Z he n g z h o u 4 5 0 0 0 3 )
T he e o n te n ts o f u r s o lxe a e id a n d o le a n o lie a e id in P la n ta g o a sia tic a L
.
w a s d e te rm in e d by
A d d r e s s
:
Y
u a n K
e ,
H e n a n C o lle g e o f T
r a d it io n a 王C hin e s e M e d ie in e ,
△河南省 自然科学基金资助课题第 9 9 4 0 2 4 0 号
Z h e n g z h o u
《中草 药》19 9 9 年第 3 0 卷第 1 2 期 9 0 1