全 文 ：表 2　样品多糖含量测定结果
项目 1 2 3
W ( mg) 　 100. 0 　 100. 6 　 100. 9
C ( mg /m L) 0. 0218 0. 0223 0. 0224
含量 (% ) 10. 95 11. 14 11. 16
平均含量 (% ) 11. 083　
RSD(% ) 1. 046　
5份 ,置 50 mL容量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀。精
密吸取每份溶液 2. 0 mL,同标准曲线方法操作 ,测
定吸光度 ,结果为 0. 369, RSD= 0. 75% (n= 5)。
2. 7　稳定性实验: 取样品溶液 ,按样品测定方法操
作 ,每隔 0. 5 h测定 1次吸光度。结果表明 ,在波长
不变的情况下 , 2 h内测定值不变。 结果见表 3。
表 3　稳定性试验结果
t (h ) 0 0. 5 1 1. 5 2
A 0. 376 0. 377 0. 376 0. 376 0. 376
2. 8　加样回收率测定:精密称取样品粉末 0. 1 g,精
制蕨麻多糖 10 mg,置同一烧瓶中 ,按样品液制备与
含量测定方法操作。计算回收率 ,结果得平均回收率
为 97. 74% , RSD为 1. 04% (n= 3,已乘换算因素 )。
3　讨论与小结
本实验测定方法的原理是先用 80%乙醇提取
以除去单糖、低聚糖、苷类及其他干扰性成分 ,再用
水提取多糖类成分。多糖类在硫酸的作用下 ,先水解
成单糖分子 ,并迅速脱水生成糖醛衍生物 ,然后和苯
酚合成有色化合物 ,以比色法测定其含量。 结果表
明 ,蕨麻中多糖含量为 11. 083%。 由于蕨麻中含淀
粉较多 ,水提液浓度不宜过高 ,以免冷却后成冻状。
萃取时药液易乳化 ,振摇时应避免用力。
参考文献:
[ 1 ]　董立莎 ,冯　英 ,冷　泠 ,等 . 黔产党参多糖的含量测定 [ J ].
中国中药杂志 , 1995, 20( 6): 329-330.
[ 2 ]　李满飞 ,徐国钧 ,平田义正 ,等 .中药石斛类多糖的含量测定
[ J ]. 中草药 , 1990, 21( 10): 10-12.
[ 3]　钟方晓 ,彭广芳 ,李贵海 .山东太子参多糖含量对质量的影响
[ J ]. 中草药 , 1997, 28( 7): 428-430.
[ 4 ]　李　俐 ,堵年生 ,韩爱玲 .肉苁蓉多糖的提取及含量测定 [ J ].
中国中药杂志 , 1997,增刊: 163-164.
[5 ]　林　颖 ,吴毓敏 ,吴　雯 ,等 . 天然产物中的糖含量测定方法正
确性的研究 [ J] .天然产物研究与开发 , 1996, 8( 3): 5-9.
伊贝母不同组织培养物中总生物碱和西贝母碱含量比较
翟西峰 1 ,李大龙 2 ,冯永辉1 ,孙文基2
⒇
( 1. 陕西医学高等专科学校 ,陕西 西安　 710068;　 2. 西北大学 ,陕西 西安　 710069)
摘　要: 目的　测定伊贝母外植体培养获得的愈伤组织和芽中总生物碱和西贝母碱的含量。 方法　采用酸性染料
比色法和薄层扫描法分别测定。结果　在 M S、 N6、 ER培养基中生长 22 d,芽中两者含量明显高于愈伤组织。结论
两者之间有显著差异 (P < 0. 01) ,其中 ER培养基中两者含量最高。
关键词: 伊贝母 ;组织培养 ;西贝母碱
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 01 0031 03
Comparison of content between total alkaloid and sipeimine in
tissue culture of bulb of Frit illaria pallidif lora
ZHAI X i-feng1 , L I Da-long2 , FEGN Yong-h ui1 , SUN Wen-ji2
　　 ( 1. Shanxi Junio r Co lleg e o f Medicine, X i an Shanxi 710068, China; 2. No r th west Unive rsity , X i an Shanx i 710069,
China)
Key words: bulb of Fritil lary pall idif lora Schrenk; tissue culture; sipeimine
　　伊犁贝母 Fritillaria pallidif lora Sch renk是名
贵药材伊贝母的主要植物来源之一 ,有清肺、化痰和
散结之功效 ,为止咳化痰之要药。伊犁贝母产于新疆
北部 (伊宁、绥定和霍城等地 ) ,生于海拔 1 300～
1 700 m的林下或草坡中 [1 ]。由于长期过度采挖 ,资
源日趋减少并面临枯竭 ;伊贝母人工种植耗种量大 ,
生长周期长、产量低 ,因而药源紧缺。
组织培养可望作为开发名贵中药材资源的一种
·31·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 1期
⒇ 收稿日期: 2000-01-24作者简介:翟西峰 ( 1962-) ,男 ,陕西蓝田人 ,学士 ,讲师 , 1984年毕业于西安医学院药学系 (现为西安交大药学院 )。 1984年至今在陕西医学高等专科学校药学系任教 ,先后从事了“生药学”、“药剂学”等课程的教学工作 ,近年来在省级以上学术刊物发表论文 7篇 ,现主要从事中、西药剂制备工艺、质量标准及中药现代化方面研究。
有效手段 ,我们对伊贝母外殖体培养获得的愈伤组
织和芽 ,分别在 MS、 N6、 ER培养基中生长 , 22 d后
测定总生物碱和西贝母碱含量 ,目的在于找出伊贝
母最佳组织培养条件 ,为工业化生产伊贝母药材及
其有效成分作基础研究。
1　仪器和试剂
Sar to rius全自动分析天平 ,日立 U-2001紫外
分光光度计 ,岛津 CS-9300型双波长薄层扫描仪 ,
YCQ-300超声波清洗器 ,薄层层析用硅胶 G(青岛
海洋化工厂 ) ,其它试剂均为分析纯。 西贝母碱对照
品购自中国药品生物制品检定所。
2　实验方法与结果
2. 1　总生物碱含量测定 [1 ]: 采用文献方法 ,以酸性
染料比色法测定总生物碱含量。 溴麝香草酚蓝为染
料 ,最大吸收波长 410 nm,以西贝母碱计算总生物
碱含量。
2. 1. 1　标准曲线绘制: 精密称定西贝母碱对照品
20. 00 mg于 100 mL容量瓶中 ,加氯仿至刻度 ,制
成每 1 mL含西贝母碱 0. 20 mg的标准液。 精密吸
取此标准液 10 mL于 50 mL容量瓶中 ,加氯仿至刻
度 ,制成每 1 m L含西贝母碱 0. 040 mL的标准液 ,
精密吸取此标准液 1, 2, 2. 5, 5, 10 mL,加氯仿至 10
m L,制成每 1 mL含西贝母碱 0. 004, 0. 008, 0. 010,
0. 020, 0. 040 mg的溶液 ,加 0. 001 mol /L溴麝香草
酚蓝溶液 2 mL,振摇 1 min,放置 10 min,分层后分
取氯仿液 ,在 410 nm处测吸光度 ,以浓度为横坐
标 ,吸光度为纵坐标作图 ,在 0. 004～ 0. 040 mg /mL
范围内线性关系好 ,以浓度对吸光度回归 ,得回归方
程式: Y= 51. 919X - 0. 001 2, r= 0. 998 1。
2. 1. 2　样品测定及结果:精密称取干燥至恒重的组
织培养物干品粗粉 2 g ,置 50 mL具塞瓶中 ,以 2
m L氨水 ( 1∶ 1)湿润后 ,加 25 mL混合溶剂 (乙醚 -
氯仿-乙醇= 25∶ 8∶ 2. 5) ,超声提取 30 min,放置
24 h。精密吸取上清液 15 mL,置蒸发皿中 ,水浴蒸
干 ,加氯仿溶解 ,定容至 10 mL。精密吸取氯仿液 1
( 0. 5) mL,氯仿 9( 9. 5) mL, 0. 001 mol /L溴麝香草
酚蓝溶液 2 mL,同标准曲线法操作 ,分取氯仿层测
吸光度 ,计算含量 ,结果见表 1。
2. 2　薄层扫描法测定西贝母碱含量 [2 ]
2. 2. 1　色谱条件: 硅胶 G-CMC-Na板 (厚 0. 3 mm,
105℃活化 1 h ) ;展开剂:醋酸乙酯 -甲醇 -浓氨试液
( 20∶ 1. 5∶ 1) ;显色剂:改良碘化铋钾。
2. 2. 2　对照品溶液制备:精密称定西贝母碱对照品
5. 06 mg于 10 mL容量瓶中 ,加无水乙醇至刻度 ,
制成浓度为 0. 506 mg /mL的标准品溶液。
2. 2. 3　供试品溶液制备:精密吸取上述总碱氯仿液
5 m L,蒸干后准确加入无水乙醇 1 mL溶解 ,作供试
品溶液。
2. 2. 4　扫描条件:双波长锯齿法扫描 ,λs= 505 nm,
λR= 600 nm , Sx= 3,步进距离 0. 1 mm。
2. 2. 5　标准曲线制备: 取西贝母碱对照品溶液 2,
4, 6, 8, 10, 12μL于薄层板上 ,按上述条件展开 ,测
定斑点面积 ,以对照品微克数为横坐标 ,斑点面积为
纵坐标 ,得一直线 ,线性范围 1. 012～ 6. 072μg,回
归方程 Y= 22 393. 6X+ 617. 2, r= 0. 999 8。
2. 2. 6　稳定性试验:将显色后薄层板上西贝母碱斑
点按上述条件进行扫描 ,表明显色后 6 h内稳定。
1-MS　 2-N6　 3-ER为 3
种培养基中愈伤组织　 4-
MS′　 5-N′6　 6-ER′为 3
种培养基中芽
图 1　伊贝母培养物总
生物碱 TCL图
2. 2. 7　加样回收试验: 于薄
层板上点 10μL已知含量样
品溶液 ,再各加入不同量的对
照品溶液 ,展开显色后扫描测
定 , 4份样品回收率分别为
95. 0%、 98. 1% 、 98. 7%和
97. 3% ,平均回收率 97. 3% 。
2. 2. 8　样品测定及结果: 准
确吸取供试品溶液和对照品
溶液各 5μL,分别点于同一
硅胶 G薄层板上 ,展开 ,取出
晾干 ,均匀喷以薄层显色用改
良碘化铋钾试液 ,待斑点清楚
后 (橙红色 ) ,用干净玻璃板盖
其表面 ,用透明胶纸将玻璃板
四周封严 ,结果见图 1。 以前
述条件扫描测定 ,根据峰面积外标法计算含量 ,结果
见表 1。
2. 3　取愈伤组织和芽的 MS培养基各 10 g ,加甲醇
表 1　不同培养基、培养物中总生物碱和西贝母碱含量
组织 　　　　　　　愈伤组织　　　　　　　 　　　　 　　　　芽　 　　　　　　　
培养基 M S N 6 ER M S N 6 ER
总生物碱含量 (% ) 0. 077 0. 079 0. 063 0. 157 0. 176 0. 205
西贝母碱含量 (% ) 0. 010 0. 011 0. 001 0. 061 0. 053 0. 062
20 mL超声提取 ,水浴蒸干 ,加无水乙醇 1 mL溶 解 ,将其点于硅胶 G薄层板 ,按前述方法展开、显
·32· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 1期
色 ,未见生物碱斑点 ;给剩余供试品液中加入改良碘
化铋钾试液 2滴 ,均显阴性。 表明培养基中无生物
碱 ,生物碱仅存在于培养物组织中。
3　讨论
3. 1　对愈伤组织和芽两种培养物中总生物碱和西
贝母碱进行分析 (见表 2)。结果表明 ,芽中总生物
表 2　愈伤组织与芽中总生物碱和西贝母碱含量比较
部位 总生物碱 (% x± s ) 西贝母碱 (% x± s)
愈伤组织 0. 073± 0. 009 0. 007± 0. 005
芽 0. 179± 0. 024* * 0. 058± 0. 005* *
　　与愈伤组织比较: * * P < 0. 01
碱和西贝母碱含量明显高于愈伤组织 ,两者之间有
极显著差异 ( P < 0. 01) ,其中 ER培养基中两者含
量最高。 芽中总生物碱和西贝母碱含量比药材中两
者含量均高 (伊贝母鳞茎中总生物碱和西贝母碱含
量分别为 0. 14%和 0. 04% [2 ] ) ,有一定的开发价值。
3. 2　培养基中无生物碱 ,与高山林等人在暗紫贝母
培养中所得结论一致 [3 ]。 这对培养方法有选择性意
义 ,如固定化培养、连续发酵培养在技术上存在限
制 ,同时对一般工艺亦有参考价值。
参考文献:
[1 ]　王文杰 .贝母 [M ] .北京:中国医药科技出版社 , 1994.
[2 ]　沙振方 ,孙文基 ,范　伟 ,等 . 几种贝母中总生物碱和西贝素的
含量测定 [ J] .中草药 , 1988, 11( 1): 35-37.
[3 ]　高山林 ,朱丹妮 ,蔡朝辉 ,等 . 暗紫贝母鳞茎器官培养生长特征
和生物碱累积研究 [ J] . 中国药科大学学报 , 1992, 23( 3): 144-
147.
三波长分光光度法测定牙痛一粒丸中脂蟾毒配基的含量
宋宝鹏 1 ,王志光2
⒇
( 1. 鸡西市药品检验所 ,黑江龙 鸡西　 158100;　 2. 鸡西市人民医院药剂科 ,黑龙江 鸡西　 158100)
摘　要: 目的　测定牙痛一粒丸中脂蟾毒配基的含量。方法　利用三波长分光光度法。结果　对样品未经分离 ,直
接测定 ,方法的平均回收率为 98. 7% , RSD为 0. 83%。 结论　三波长分光光度法可作为该药质量控制指标之一。
关键词: 三波长分光光度法 ;脂蟾毒配基 ;牙痛一粒丸
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 01 0033 02
Determination of content of res ibufogenin in YATONG YILI PILL by
tri-wavelength spectrophotometry
SONG Bao-peng1 , W ANG Zhi-guang2
　　 ( 1. Jixi Institute for Drug Contro l, Jix i Heilong jiang 158100, China; 2. Depa rtm ent o f Pharmacy, Jix i People s
Hospital, Jix i Heilong jiang 158100, China)
Key words: t ri-w aveleng th spect ropho tometry; resibufo genin; Y ATONG YILI PILL
　　牙痛一粒丸由蟾酥、朱砂、雄黄和甘草 4味药材
制备而成 ,是用于治疗风火牙痛、牙龈肿痛和龋齿引
起肿痛的常用中成药。 1995年版《中华人民共和国
药典》一部仅对蟾酥等药材作薄层定性鉴别 ,无定量
控制指标。本文利用三波长分光光度法 ,测定蟾酥中
脂蟾毒配基的含量 ,作为控制该药质量的指标之一。
1　仪器与药品
岛津 VU-265自动记录分光光度计 (日本 )、
SP5200超声清洗器。 脂蟾毒配基 (中国药品生物制
品检定所 ) ,试剂均为分析纯。牙痛一粒丸及原料药
材均为市售品。药材经鉴定均为正品。
2　方法与结果
2. 1　供试品溶液的配制:精密称定样品细粉 0. 5 g,
加石油醚 ( 60℃～ 90℃ ) 20 mL,超声提取 10 min,
离心 ,残渣加氯仿 30 mL,超声提取 50 min,过滤 ,残
渣用氯仿 20 mL冲洗 ,合并滤液 ,蒸干 ,残渣用乙醇
定容至 100 mL后 ,精取 2. 5 mL用乙醇定容至 25
mL,得供试品溶液。
2. 2　空白对照液的制备:精密称取按药典处方配制
的样品细粉 0. 5 g ,加石油醚 ( 60℃～ 90℃ ) 20 mL,
超声提取 10 min,离心 ,残渣加氯仿 30 mL,超声提
取 50 min,过滤 ,残渣用氯仿 20 mL冲洗 ,合并滤
·33·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 1期
⒇ 收稿日期: 2000-05-18作者简介:宋宝鹏 ( 1967-) ,男 ,辽宁东沟人 ,主管药师 ,理学士学位。 1990年毕业于黑龙江中医学院 , 1990～ 至今在黑龙江鸡西市药品检验所 ,主要进行中药质量标准研究。 Tel: ( 0467) 2364391