全 文 ：A-滴加桂枝前　 B-滴加桂枝后
图 1　桂枝对海马脑片 PS幅度的影响
观察了桂枝对毛果芸香碱致痫大鼠离体海马脑片
CA1区诱发场电位的影响 ,结果显示桂枝能明显降
低致痫大鼠海马静发场电位的幅度 ( P < 0. 01) ,表
明桂枝能抑制致痫大鼠中枢神经系统突触传递过
程 ,具有抗痫作用。
桂枝对毛果芸香碱致痫大鼠海马脑片诱发场电位幅
度的抑制作用 ,可能与对 Ca2+ 通道直接阻滞机制或
GABA受体有关。桂枝通过何种途径产生抗痫作用
还有待进一步研究。
参考文献:
[1 ]　王本祥 .现代中药药理学 [M ]. 天津:天津科技出版社 , 1999.
[2 ]　 Tu rski W A, Cavalhei ro E A, Sch aw arz M , et al . Limbic
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Res, 1984, 321: 237-253.
白藜芦醇苷的体外抗氧化活性
田京伟 ,杨建雄⒇
(山东省天然药物工程技术研究中心、山东绿叶制药集团 ,山东 烟台　 264003)
摘　要: 目的　研究白藜芦醇苷的清除自由基、抗氧化活性。方法　以 NADH-PM S-NBT系统产生氧自由基 O2÷ ;
EDTANa2-Fe(Ⅱ ) -H2O2系统和 Fe2+ + V it C系统产生羟自由基 (· OH); H2O2诱导大鼠红细胞氧化溶血来研究白
藜芦醇苷的生物活性。结果　白藜芦醇苷体外可清除 O2÷及· O H;抑制 H2O2诱导的大鼠红细胞氧化性溶血 ;抑制
· OH引起的小鼠肝微粒体过氧化脂质 ( LPO ) 和大鼠红细胞膜丙二醛 ( M DA)含量的升高。 结论　白藜芦醇苷具
清除自由基及抗脂质过氧化的作用。
关键词: 白藜芦醇苷 ;自由基 ;抗氧化作用
中图分类号: R286. 75　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 10 0918 03
In vitro antioxidative effect of polydatin
TIAN Jing-w ei , YAN G Jian-xiong
　　 ( Shandong Engineering Research Center fo r Na tural Drug s, Shandong LU… YE Pharmaceutica l CO. , Ltd. , Yantai Shan-
dong 264003, China)
Key words: polydatin; f ree radical; antioxidation
　　白藜芦醇苷 ( Polydatin,简写 Pol )是中药虎杖
Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc中所含的一
种有效成分 ,据报道 , Pol对心脑血管系统具有十分
明显的药理作用 ,能扩张血管 ,抑制血小板聚集 ,改
善微循环 ,保护血管内皮等 [1, 2 ] ;有关研究证明其对
脑缺血再灌注大鼠脑组织具有保护作用 [3 ]。 但其体
外抗自由基作用尚未见报道 ,而自由基反应在心脑
血管损伤中起着重要作用。为了对 Pol进一步开发
及应用 ,探讨其作用机制 ,对其体外抗氧化作用进行
了初步研究。
1　材料
1. 1　药物与试剂:白藜芦醇苷:白色晶体 ,由陕西师
范大学生科院生化室提供 (含量为 96. 2% ) ,以生理
盐水配成不同浓度的溶液。 1, 1, 3, 3-四乙氧基丙烷
( T EP)、还原型辅酶Ⅰ ( N ADH)、酚嗪二甲基硫酸盐
( PM S)、四氮唑蓝 ( N BT)为 Sigma产品 ,硫代巴比
妥酸 ( TBA)、三氯乙酸 ( TCA)为国产分析纯。
1. 2　动物: SD雄性大鼠 , 200～ 250 g,昆明种小鼠 ,
18～ 22 g ,雌雄各半 ,由陕西省中医药研究院提供。
2　方法与结果
·918· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 10期
⒇ 收稿日期: 2001-04-03作者简介:田京伟 ( 1976. 11-) ,男 ,山东省青岛市人 , 1997年就读于陕西师范大学生命科学学院 , 2000年获理学硕士学位。目前从事于心脑血管方向研究。 E-mail: jingw ei@ luye-ph arm. com
2. 1　对 O2÷生成的影响: O2÷由 NADH-PM S-NBT
系统 ( 16 mmo l /L, pH8. 0的 Tris-HCl缓冲液 ,内
含 NADH 73μmol /L, PM S 15μmo l /L, N BT 50
μmo l /L)产生 ,空白管不加 PM S,对照管不加 Po l。
Pol的终浓度为 25, 50, 100, 200, 400μg /mL,总体
积为 3 mL,于 560 nm比色测定 ,并计算抑制率。结
果显示 , Pol能明显清除 NADH-PM S-NBT系统产
生的 O2÷ ,且呈量效关系 (表 1)。
表 1　 Pol对 O2÷的清除作用 (x± s ,n= 6)
组别 剂量 (μg /m L) 吸光度 A560nm 抑制率 (% )
对照 - 0. 483± 0. 017
Pol 25 0. 330± 0. 013* 31. 68
50 0. 311± 0. 008* 35. 61
100 0. 206± 0. 010* * 57. 35
200 0. 116± 0. 009* * 75. 98
400 0. 055± 0. 006* * * 88. 61
　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01　* * * P < 0. 001
2. 2　对· OH生成的影响:由于 · OH可特异的使
碱性桃红 T褪色 ,据褪色的幅度可衡量 · OH的生
成量。实验按文献 [5 ]进行: 反应总体积 5 mL,其中碱
性桃红 T ( 70μg /mL) 1 mL, 3% H2O2 1 mL,
2mmo l /L EDTANa2-Fe(Ⅱ ) 2 mL,再加一下量 Pol
和 0. 15 mmol /L pH7. 4的 PBS, Pol的终浓度为
25, 50, 100, 200, 400μg /mL,混匀 , 37℃ 保温 30
min,对照组以 H2O代替药品 ,空白组以 H2O代替药
品和 EDTANa2-Fe(Ⅱ ) , 520 nm比色测定 ,并计算
抑制率。 结果显示 , Pol能明显清除 EDTANa2 -Fe
(Ⅱ ) -H2O2体系产生的 · OH,且呈量效关系 (表 2)。
表 2　 Pol对 · OH的清除作用 (x± s ,n= 6)
组别 剂量 (μg /m L) 吸光度 A520nm 抑制率 (% )
正常组 - 0. 881± 0. 016
模型组 - 0. 052± 0. 007* * *
25 0. 088± 0. 013 4. 34
50 0. 122± 0. 009△ 8. 44
100 0. 196± 0. 012△△ 17. 37
200 0. 317± 0. 006△△ 31. 97
400 0. 603± 0. 012△△△ 69. 72
　　与对照组比较: * * * P < 0. 001
与模型组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01　△△ P < 0. 001
2. 3　对大鼠红细胞氧化性溶血的影响 [6 ]: SD大鼠
颈总动脉采血 ,分离红细胞 ,生理盐水洗涤 3次后
制成 0. 5% 悬液 ,取红细胞悬液 1 mL,加不同浓度
的 Pol ,最后加 100 mmol /L H2O2混匀 , 37℃ 温浴
1 h,用生理盐水稀释 5倍 , 1 000 g离心 10 min,取
上清于 415 nm比色测定 ,计算溶血度及抑制率。结
果显示 , Pol能明显抑制 H2O2诱导的大鼠红细胞氧
化溶血 ,溶血率降低 ,且呈量效关系 (表 3)。
2. 4　对大鼠肝微粒体脂质过氧化物 LPO的影
表 3　 Pol对 H2O2所致大鼠红细胞
溶血率的影响 (x± s ,n= 10)
组别 剂量
(μg /m L)
吸光度
A512nm
溶血率
(% )
抑制率
(% )
正常组 - 0. 088± 0. 007 15. 94
模型组 - 0. 552± 0. 004* * * 100. 00
Pol 25 0. 451± 0. 007 81. 70 21. 77
50 0. 427± 0. 004△ 77. 36 26. 94
100 0. 406± 0. 005△△ 73. 55 31. 47
200 0. 362± 0. 007△△ 65. 58 40. 95
400 0. 313± 0. 008△△△ 56. 70 51. 51
　　与正常组比较: * * * P < 0. 001
与模型组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 001　△△△ P < 0. 001
响 [7 ]:昆明种小鼠 20只 ,处死 ,迅速分离肝组织 ,用
冰冷的 0. 25 mo l /L蔗糖溶液制成 20% 的匀浆 ,
9 800 g离心 20 min,沉淀再洗 1次 ,合并上清液 ,
并于 96 000 g 离心 40 min,沉淀用冰冷的 0. 15
mo l /L KCl洗 2次 ,最后悬浮于 0. 15 mol /L KCl
中 , Low ry法测蛋白。在 0. 2 mol /L磷酸钾缓冲液
( p H7. 4)中含微粒体蛋白 200～ 400μg /mL,硫酸
亚铁 10μmol /L, Vi tC 0. 1 mmol /L,及不同浓度的
Po l, 37℃振荡温浴 1 h,测定 LPO。结果显示 , Pol
能明显抑制 Fe2+ + Vit C系统产生 · OH对小鼠肝
微粒体刺激所引起的脂质过氧化反应 , LPO含量降
低 ,且呈量效关系 (表 4)。
表 4　 Pol对大鼠肝微粒体脂质过氧化
的影响 ( x± s,n= 10)
组别 剂量 (μg /m L) LPO含量 ( nm ol /g) 抑制率 (% )
正常组 - 39. 32± 3. 68
模型组 - 188. 54± 12. 26* * *
1 176. 32± 13. 39 8. 21
2 168. 47± 11. 66△ 13. 47
4 151. 49± 12. 92△△ 24. 85
8 113. 64± 9. 24△△ 50. 21
16 55. 72± 7. 86△△△ 89. 01
　　与正常组比较: * * * P < 0. 001
与模型组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01　△△ P < 0. 0001
2. 5　对大鼠红细胞膜脂质过氧化物 MDA的影
响 [8 ]:大鼠红细胞膜按 Dodge法 [9 ]制备 ,配成 1 mg
膜蛋白 /mL的膜悬液备用 ,取 1 mL膜悬液加入一
定量药品 ,然后加 2 mmol /L EDT ANa2-Fe (Ⅱ )-
H2O2 , 3% H2O2 1 mL,最后加 10 mmo l /L pH7. 4
PBS,混匀 ,总体积为 5 mL。 37℃保温 30 min后 ,
加 100 g /L磷戊酸 0. 5 mL, 0. 042 mol /L硫酸 4
mL,离心 ( 2 000 r /min, 10 min) ,收集沉淀。在沉淀
中加 H2O 4 mL,加 TBA 1 mL,按荧光法测定
MDA (以 H2O作对照 ,以 TEP作标准 )。 结果显
示 , Pol能明显抑制 EDT ANa2-Fe(Ⅱ ) -H2O2系统产
·919·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 10期
生 · OH引起的大鼠红细胞膜脂质过氧化反应 ,氧
化产物 MDA含量下降 ,且呈量效关系 (表 5)。
表 5　 Pol对大鼠红细胞膜 MDA含量
的影响 ( x± s ,n= 10)
组别 剂量 (μg /m L) M DA含量 ( nmol /g) 抑制率 (% )
正常组 - 1. 21± 0. 02
模型组 - 10. 06± 0. 18* * *
1 9. 51± 0. 13 6. 22
2 9. 06± 0. 11△ 11. 30
4 8. 14± 0. 09△ 21. 70
8 6. 23± 0. 07△ 43. 28
16 2. 15± 0. 05△△△ 89. 38
　　与对照组比较: * * * P < 0. 001
与模型组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01　△△ P < 0. 0001
3　讨论
超氧阴离子自由基、羟自由基等含氧的自由基
称为氧自由基。自由基性质活泼 ,可损伤蛋白质、脂
质、核酸等。 羟自由基对细胞的危害最大 ,可直接作
用于生物膜上的不饱和脂肪酸 ,损伤生物膜 ,导致多
种疾病的发生 ,许多病理生理现象:衰老、肿瘤、炎
症、脑缺血等均与氧自由基有密切关系 [10 ]。
本研究利用 NADH-PM S-N BT系统产生 O2÷ ,
EDTANa2 -Fe(Ⅱ ) -H2O2系统和 Fe2+ + Vit C系统产
生· OH, H2O2诱导大鼠红细胞氧化溶血来研究 Pol
的清除自由基、抗氧化活性 ,结果发现 , Pol体外可
清除 O2÷及· OH,抑制小鼠肝微粒体和大鼠红细胞
膜的脂质过氧化反应 ,抵抗大鼠红细胞的氧化性溶
血 ,说明 Pol具有清除自由基及抗脂质过氧化的作
用 ,是一种天然抗氧化剂 ,这对于其药效学研究、作
用机制研究提供了一些理论依据。
参考文献:
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参麦注射液在肿瘤放化疗中减毒增效作用观察
宋高武 ,詹顺江 ,李发强 ,王大伟⒇
(河南焦作矿务局中央医院 ,河南 焦作　 454150)
中图分类号: R285. 64　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 10 0920 02
　　 1997年 9月— 2000年 8月 ,我院用参麦注射液
配合放化疗以增效减毒 ,取得了较好疗效 ,现报道
如下。
1　临床材料
全组 114例住院进行放化疗的晚期恶性肿瘤
患者 ,均经病理学确诊 ,男 77例 ,女 37例 ,年龄
18～ 76岁 ,平均 53岁。其中非小细胞肺癌 25例 ,小
细胞肺癌 3例 ,乳腺癌 8例 ,食道癌 26例 ,胃癌 28
例 ,肝癌 8例 ,大肠癌 8例 ,恶性淋巴瘤 3例 ,原发灶
不明的转移癌 5例。 单纯放疗 12例 ,单纯化疗 68
例 ,放化疗同步进行 34例。
2　治疗方法
·920· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 10期
⒇ 收稿日期: 2000-01-08作者简介:宋高武 , ( 1959-) ,男 ,河南温县人 ,现任焦作矿务局中央医院肿瘤科主任 ,副主任医师 ,学士学位。 1983年毕业于河南医科大学 ,现任中国肿瘤临床学协作中心会员 ,河南省抗癌协会肿瘤临床化疗专业委员会会员 ,焦作市抗癌协会常务理事 ,主要从事常见恶性肿瘤的化疗及中西医结合治疗。 Tel: 2917045