全 文 ：比色法测定冬虫夏草中甘露醇的含 t
中国协和 医科大学
中国医学科学院 药物研究所
(北京 1 0。。 5) 0李雪芹 水 包天桐 王 雁
摘 要 比较了测定冬虫夏草中甘露醉含量的两种方法 。 发现天然虫草 和不 同品种人工虫草制成
品 (胶囊剂 )用 容量法 (A)测得的甘露醉含童 比用 比色法 (B )测得 的甘露醉含 量要高 ,但天然虫草
A / B 比值较为接近 ,而不 同品种人工虫草制成品 (胶囊剂 )的 A /B 比值波动较大 。 认为用 比色法 测
定虫草中甘露醇含量较容量法更具特异性且快速简便 。
关挂词 冬虫夏草 甘露醇 比色测定
冬虫夏草 为我 国名贵 的滋补强壮中药 。
对其化学成分的研究表明它含有较大量的甘
露醇 〔` 〕 。 甘露醇在临床上主要作为脱水剂 , 它
有一定 的药理 作用 ( 如抗 自由基作用 )卿 , 据
临床报道它对多种疾病有一定疗效 〔 3〕 ,故 为
虫草的有效成分之一 。 现甘露醇已作为某些
人工发酵虫草的质控指标之一 〔们 。
甘露醇含量测定有多种方法 , 一般采 用
中华人 民共 和国药 典规定的容量法 〔 5〕 , 该法
系根据甘露醇 的还原性用氧化剂进行滴定 ,
因此适用于较纯的甘露醇制剂 。 但对于含有
其它具有还原性物质 (如单糖等 ) 的中草药制
剂 (如虫草 )来说 , 因其含有的其它还原性物
质也可被高碘酸氧化 , 结果使测得 的含量偏
高 , 且操作较为繁琐 。
甘露醇为多元醇化合物 。 文献报道 〔 6〕含
量可用 比色法测定 ,此法特异性较高 , 许多含
经基的物质包括单糖等对其无 明显干扰 , 而
且方法快速简便 。 故我们试用此法对多种天
然虫草和人工虫草进行甘露醇 的含量测定 ,
并用容量法进行对 比 , 报告如下 。
1 仪器 与试药
72 1 分光光度计 , 甘露醇 (北京化学试剂
公 司 ) 、 天然虫 草 (青海玉树地 区产 ) 、 香棒虫
草 、 亚香棒虫草 ( 中国药品生物制品检定所 ) 、
金水宝胶囊 (江西国药厂 ) 、 宁心宝胶囊 (上海
黄 山制药 厂 ) 、 心肝宝胶囊 (保定制药厂 ) 、 百
令胶囊 (杭州中美华东制药有限公司 ) 。
2 实验方法
2
.
1 样 品制备 : 精密称取标准 品甘露醇 50
m g
, 加蒸馏 水 50 m L 配 制成浓 度为 l m g /
m L 的甘露醇溶液 , 然后 用蒸 馏水分别稀释
成所需浓度待测 。
取待测虫草样品各 2 . 5 9 分别加蒸馏水
5 0 m L 回流 Z h 后 ,过滤 , 用蒸馏水洗残渣 ,
使最后滤液体积为 50 m L , 即得到浓度为 50
m g / m L (按原料生药计 ) 的样 品 ,再取此液加
蒸馏水稀释成所需浓度待测 。
2
.
2 比色法线性范围及重现性考查 : 取浓度
为 5 0 、 4 0 、 3 0 、 2 0 、 1 0 拌g /m L 的标准品甘露醇
溶液各 l m L , 分置不同试管 中 , 然后分别加
l m L 高碘酸钠溶液 (0 . o 15 m ol 高碘酸钠于
0
.
1 2 m ol 盐 酸 溶液 中 ) 混 匀 , 室 温放 置 10
m in
, 加 2 m L 0 . 1% L 一鼠李糖溶液以 除去过
多的高碘酸盐 , 混合后加 4 m L 新鲜配制的
N as h 试剂 ( 1 50 9 醋酸钱 + 2 m L 冰醋酸 + 2
m L 乙 酞 丙 酮 , 用 蒸 馏 水 稀 至 1 0 0 0 m L ) ,
5 3℃水 浴 加 热 15 m in 使 其 呈 色 , 冷 却 , 在
4 1 2 n m 测 出标准品甘露醇的 O D 值 。
2
.
3 比色法测定虫草样品中甘露醇的含量 :
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A d d r e s s
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C h in e s e A e a d e m y o f M e d i e a l S e i e n e e s
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B e ijin g李雪芹 1 9 8 7 年 7 月毕业于江西医学院医疗系 ,在江西九江医学专科学校药理教研室任教 ,讲师 , 教研室副主任 。 1 9 9 7
9 月通过 中国医学科学院协和医科大学药物研究所 C M B 学员资格面试 ,获得美 国中华 医学会奖学金 , 在药物研究 所包 天
桐教授指导下从事抗衰老 中草药 的研究 。
《中草药 》 1 9 9 9 年 第 30 卷第 1 期
醇的含量均 为 ”% 以 上 , 准确度高 , 且重现
性 良好 。
3
.
3 比色法和容量法测定不同品种虫草及
制剂 中的甘露醇含量 : 见表 3 、 4 、 5 。
表 3 三 种虫草两种方法测定甘璐醉含 ,
B 比色法 (% ) A 容量法 (写 ) A / B
天然虫草 1 1 . 0 0 1 2 . 8 2 1 . 17
香棒虫草 2 . 5 0 3 . 3 8 1 . 35
亚香棒虫草 7 . 0 0 8 . 16 1 . 17
由表 3可见 ,天然虫草中甘露醇的含量
最高 ,香棒虫草最低 (仅为前者 1 / 4) 。 但三种
天然虫草的 A / B 比值较为接近 。
表 4 不同批号金水宝原料粉的甘璐醉含 .
编 号 B 比色法 (% ) A 容量法 (% )
.17583
020793810.96
ōUuJjnéLJ50ù丹了n夕一.…门匕亡JtOJ让占匕」
分别取浓度 为 0 . 4 m g /m L 的各虫草样 品 1
m L 进行上述 比色法 测定 , 根 据其 O D 值 计
算 出甘露醇的含量 。
2
.
4 容量法测定标准品甘露醇含量 〔 5 , : 取浓
度为 0 . 8 、 0 . 6 、 0 . 4 、 0 . 2 m g /m L 标准品各 1 0
m L 置碘瓶中 ,加 50 m L 高碘酸钠溶液 〔硫酸
溶 液 ( 98 %浓硫酸 l m L + 蒸馏水 19 m L ) 90
m L 与高碘酸钠溶液 (高碘酸钠 2 . 3 9 + 蒸馏
水至 1 0 0 0 m L ) 1 10 m L 混合制成〕 , 置沸水浴
加热 1 5 m i n , 放冷 , 加 0 . 5 %碘化钾试液 1 0
m L
, 密 塞 , 放 置 s m in , 用 硫代 硫 酸 钠溶 液
(0
.
0 5 m ol / L )滴定 , 至接近终点时加淀粉指
示 液 l m L , 继续滴定至蓝色消失 , 并将滴定
的结果用空白实验校正 。 每 l m L 的硫代硫
酸钠滴定液相当于 O , 9 m g 甘露醇 。
2
.
5 容量法测定虫草 中甘露醇含量 : 分别取
浓度为 s m g / m L 的各虫草样品 10 m L 进行
上述容 量法测定 , 根据其 消耗硫代硫酸钠溶
液 的量计算 出甘露醇的含量 。
3 实验结果
3
.
1 比 色法线性 范围及重现 性考查 : 见表
1
。
表 1 比色 法测定标准 品甘见醉的 O D 值
气藻莞莞笋 5。 ` 。 3 0 2。 ` 。
9 7 0 1 0 1 3
9 7 0 2 0 3 8
9 7 0 3 0 7 9
9 7 0 3 0 8 9
9 7 0 4 1 0 2
l
2
3
4
5
平均
0
.
5 3 0
0
.
5 1 0
0
.
5 1 0
0
.
5 1 0
0
.
3 5 0
0
.
5 1 8
0
.
4 5 0
0
.
4 1 0
0
.
4 2 0
0
.
4 2 0
0
.
4 1 0
0
.
4 2 2
0
.
3 2 0
0
.
3 1 5
0
.
3 2 0
0
.
3 3 0
0
.
3 3 0
0
.
3 2 3
0
.
2 3 0
0
.
2 0 5
0
.
2 4 0
0
.
2 5 0
0
.
2 2 0
0
.
2 2 9
0
.
1 1 0
0
.
1 0 0
0
.
1 2 5
0 1 1 5
0
.
1 1 0
0
.
1 1 2
由表 1 数据计算得回归方程 Y 一 。 . 0 2 1 7
十 0 . 0 0 9 9 7 X , r 一 0 . 9 9 3 , 结果说 明甘露醇在
10 一 50 拌g /m L 呈线性关系 ,且重现性 良好 。
3
.
2 容量法测定标准品甘露醇的准确性 : 见
表 2 。
表 2 容一法测定标准 品甘露醇的含 ,
实 际甘露醇量
( m g )
测 得甘露醇量
( m g )
测得 %值
7
.
9 6 5
.
97 3
.
9 6 1
.
9 8
9 9
.
4 7 9 9
.
4 7 9 9 4 7 9 9 0
由表 2数据看出容量法测定标准品甘露
。
2 0
。
由表 4可见 ,不 同批号金水 宝原料粉的
甘露醇含量有一定的波动 ,但 A / B 比值较为
接近 。
表 5 不同品种人工虫草胶囊剂的甘礴醉含 t
B 比色法 ( % ) A 容量法 (% ) A / B
金 水宝胶囊 4 . 2 0 14 . 5 6 3 . 4 7
心肝宝胶囊 6 . 75 9 . 65 1 . 43
百令 胶囊 6 . 8 3 7 . 8 6 1 . 15
宁心宝胶囊 2 . 7 0 6 . 9 0 2 . 5 6
由表 5 可见 ,百令胶囊 中甘露醇 的含量
最高 , 宁心宝胶囊最低 (仅为前者 2 / 5 ) 。 4 种
人工虫草胶囊剂的 A / B 比值不恒定 , 波动较
大 。
4 讨论
两种测定方法的结果显示 : 容量法测得
虫草 中甘露醇 的含量 明显高于 比色法 , 两者
的比值与虫草品种有关 。 这是 由于在强酸 、 温
度 1 0 0℃ 、 第一步反应 时间为 15 m in 这 一充
分反应条件下 ,糖类及其他具有还原性 的物
质亦可参与高碘酸钠 的氧化还原反应 , 从而
使测定结果不能正确反映冬虫夏草中甘露醇
的实际含量 。 而在 比色法测定中 ,可以把糖的
干扰减少 到最小 , 因为在温度为 25 ℃左右 、
第一步反应时间为 10 m in 时 ,高碘酸钠与甘
露醇反应产生 黄色 的 3 , 5 一二 乙 酞 一 1 , 4 脱氢
二 甲基 毗陡 , 此化 合物 在 4 12 n m 时吸 收作
用最大 〔6〕 。 我们 曾用一些单搪 (如半乳糖 、葡
萄糖 、 甘露糖等 ) 制成 50 拌g /m L 浓 度 , 用上
述 比色法测其 O D 值均接近零 , 证 明这些单
糖对甘露醇的干扰很少 , 与文献报道一致 〔。 。
我们用比色法测出青海玉树地区产虫草
的 甘 露 醇 含 量 为 n . 0% , 容 量 法 测 得 为
1 2
.
86 % ; 汪宝琪等用薄层扫描分析法测定西
藏虫 草 中 的甘露 醇 含量 为 8 . 84 % 〔7〕 , 王化
远 〔的用容量法测 出不同生长期川产野生虫草
中甘露醇 的含量 分别 为 n . 10 % 、 14 . 42 % 、
14
.
45 %
,而人工虫草中用 比色法测得甘露醇
含量最高的百令胶囊也仅 为 6 . 83 % ,说 明不
同地区 的天然虫草 中甘露醇含量 比较接近 ,
而较人工虫草要高 。
由实验结果可以看 出天然虫草用容量法
与比色法测得的甘露醇含量的比值较为接近
( 1
.
1 7一 1 . 35 ) , 说明两种方法都能反映虫草
的甘露醇的含量 ,而 比色法由于其它物质 (如
单糖等 ) 的干扰少 , 其测定值更能代表甘露醇
的实际含量 。 不 同批号金水宝的原料粉的 A /
B 比值亦较接近 ( 1 . 5 8~ 1 . 8 5 ) , 但 比天然虫
草的比值要高 ,说明金水宝原料粉 中除甘露
醇外其它还原性物质较天然虫草为多 。
不同品种人工虫草的制成品 (胶囊剂 )用
这两种方法测得的甘露醇含量的比值波动较
大 ( 1 . 15 ~ 3 . 4 7 ) ,这可能是 由于制做成品时
所加人辅料的还原性不同之故 。 由于辅料中
还 原性物质 (如单糖 ) 的影响 ,使得用容量法
测定 的甘露醇含量 比实际值可高出几倍 , 因
此用容量法测定人工虫草成品中甘露醇含量
会 出现更大的误差 。
由于 比色法测定的结果可排除样品中其
它还原性物质的千扰 , 其测得 的结果较容量
法更能代表甘露醇的实际值 , 故对于中草药
中甘露醇含量的测定用比色法测得的结果要
比容量法可靠 , 而且方法也远 比容量法快速
简便 。
致谢 : 三种 天然 虫草由中国药品生物制
品检定所李瑞芬 、 张继老师提供 ,特此致谢 !
参 考 文 献
1 中国医学科学 院药物研究所编著 . 中草药现代研究 . 第
一卷 . 北京 : 北京 医科大学 , 中国协和医科大学联合出版
社 , 1 9 9 5 : 9 9
2 阿部裕 ,他 . 最新 医学 , 1分7 8 , 3 3 ( 4 ) : 7 0 9
3 孙成秀 ,等 . 新 医学 , 1 9 9 6 , 2 7 ( l ) : 4 1
4 陈传盈 ,等 . 中草药 , 1 9 9 2 , 2 3 ( 8 ) : 4 0 9
5 中华人 民共和 国药典 . 二部 . 北 京 : 化 学工 业 出版社 ,
19 9 5
:
8 5
6 S o ng H B
,
et a l
.
B i o e h e m
,
1 9 7 7
,
8 1
:
1 8
7 汪宝琪 ,等 . 中草药 , 1 9 9 5 , 2 6 ( 4 ) : 1 8 9
8 王化远 ,等 . 华西药学杂志 , 1 9 9 6 , 1 1 ( l ) : 5 8
( 1 9 9 8
一 0 4
一
2 2 收稿 )
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《中草药 》 1 9 9 9 年第 3。 卷第 1 期