全 文 ：超滤和醇沉对艾可冲剂有效成分
影响的对比实验
中国中医研究院基础理论研究所 北京 刘振丽 丧 张 玲 张秋海 欧兴长 丁 家欣
摘 要 采用反相高效液相色谱法 , 测定艾可冲剂超滤前后金银花中主要有效成分氯原酸 、黄琴
主要有效成分黄琴营含量变化 , 并与水提醇沉法进行了 比较 。 结果表明超滤法能更有效地保留有
效成分 。
关键词 高效液相色谱法 超滤 醇沉 金银花 氯原酸 黄答 黄芬昔
艾可冲剂为新研制的治疗艾滋病的中药
复方制剂 。 临床观察发现该药具有延长艾滋
病患者的寿命 , 改善其生命质量等作用 。 免疫
学研究表明 , 该药具有抗猴 病毒 , 增强
细胞和体液免疫功能的作用 。本方由金银花 、
黄答等数味中药组成 , 在制备过程中 , 采用超
滤法纯化以除去杂质 。 为考察超滤对方中主
要药物成分的影响 , 我们对超滤前后 金银花
中主要有效成分氯原酸 、 黄答主要有效成分
黄等昔含量进行了测定 , 并与水提醇沉法进
行了比较 。
金银花 芦 , 为常
用的清热解毒药 。其主要成分为氯原酸 , 分 一子
量为 , 具有抗菌 、 抗病毒作用 〔‘〕。 黄芬
主要有效成分黄芬昔 , 分子量为 , 具有
抗菌 、 解热 、抗炎作用 。 采用超滤 分子量截
留值 万 可以 除去它们中的多糖 、蛋 白质等
大分子 。
超滤是一种膜分离技术 。 根据体系中分
子的大小和形状 , 通过膜孔的筛分作用 , 起到
分离 、纯化 、 浓缩或脱盐作用 。近年来 , 中药制
剂工艺中用超滤法研究报道很多 , 尤其是纯
化注射液 , 取得 了良好的效果〔 ’毛〕 。
仪器和材料
高效液相色谱仪 数 据处理
机 紫外可见检测器 。
超滤器 天津纺织工学院生产 , 分子量
截留值 万 。
甲醇为光谱纯 , 其余溶剂为分析纯 氯原
酸 、 黄答昔对照品购于 中国药品生物制品检
定所 金银花购于济宁 , 黄芬购于承德 。
实验方法
溶液的制备
原溶液 按处方称取方中药材一 定
量 , 加入 倍量水 煎煮 , 过滤 ,
药渣再加入 倍量水煎煮 , 合并药液 , 离
心 , 测量 上清 液体积 , 取 出一 定 量药液 为
, 作为测定原液氯原酸 、 黄芬昔含量用 。
将剩余药液平均分成 等份 , 份用作
超滤 , 份用作醇沉 。
醇沉溶液 将醇沉的 部分分别水浴
浓缩至 , 体积 , 加入 乙醇至含醇量 ,
冷藏 , 过滤 , 洗涤沉淀 , 洗涤液与滤液合
并 , 分别测定体积 , 得到 部分醇沉液 为 、
、 , 作为测定醇沉液中氯原酸 、黄芬昔含
量用 。
超滤液 根据以前的实验结果哪 , 以
倍体积超滤得到 部分超滤液 为 、
、 , 测定体积 , 作为测定超滤液中氯原酸 、
黄答昔含量用 。
超滤及醇沉对氯原酸含量的影响
对照品溶液的制备 精密称取 ‘
‘ , , ! , , ! 吸‘ “ ,月业塑 刘振丽 女 , 助研 。 ! 年毕业于北京中医药大学中药学院 、 一直从事 中药有效成分的提取分砰这中约衡纱演里包鹰的研究工作 。 曾承担国家自然科学基金青年课题 “骨碎补 中活性成分对关节软骨细胞功能影 啊的买验研咒 一 , 开参 勺多坝 目家级课题的研究工作 。
《中草药》 年第 卷第 期
恒重的氯原酸对照 品 , 置于 容
量 瓶中 , 加 甲醇一水 溶解并稀释至刻
度 , 作为对照品溶液 。
色谱条件 色谱柱 十八烷基键合硅
胶 柱 , 流动相 甲醇
醋酸钠缓冲溶液
柱温 室温 ℃以上 流量
。 检测波长 。
· 线性关系的考察 精密吸取对照品溶
液 、 、 、 、 拜 依次进样 , 按上述色谱条件
测定峰面积 , 以峰面积积分值 为纵坐 标 ,
对照品重量 为横坐标 , 进行 回归处理 , 计
算 得 回 归 方 程 一 一 , 二
, 表明对照 品在 拼 一 拜 范
围内具有 良好的线性关系 。
精密度实验 精密吸取上述对照品溶
液 拼 , 连续重复进样 次 , 对照品峰面积
积分值的相对标准偏差 。
色谱样品的制备 取 各 ,
稀释至 , 用 , 膜过滤后
进样 。
色谱测定 分别精密吸取对照品溶液
与各供试品溶液 吕 进样 , 测定峰面积 , 按
外标法计算 , 结果见表 。
表 各供试品中氯原酸含里 一
项目 氯原酸含量 相当原液 平均 回收率
柱温 室温 ℃以上 流量 州
检测波长 。
线性关系的考察 精密吸取对照品溶
液 、 、 、 、 拌 依次进样 , 按上述色谱条
件测定峰面积 。 以峰面积积分值 为纵坐
标 , 对照品重量 为横坐标 , 进行回归处理 ,
计 算得 回 归方程 一 一 , 二 一
, 表明对照品在 拜 一 拼 范
围内具有良好的线性关系 。
! 精密度实验 精密吸取上述对照品溶
液 拜 , 连续重复进样 次 , 对 照品峰面积
积分值的相对标准偏差 。
· 色谱测定 分别精密吸取对照品溶液
与各供试品溶液 拼 进样 , 测定峰面积 , 按
外标法计算 , 结果见表 。
表 各供试品中黄荃普含量 一
项目 黄答普含量 相 当原液 平均 回收率
一泪原液 醇沉 超滤
!
! 礴53 5
0 . 4 8 19
5 4
5 7
。一()60210.5了5 30 . 56 12
原液 A
醇沉 B
C
D
超滤 E
F
G
0.307 2 100.0
54
63
0.
0. 184 3
0 2 16 2
60.0
70.4
0. 224 1
0.2 18 4
73.0
71.1
10 0
59.2
71.8
2 . 3 超滤及醇沉对黄答昔含量的影响
2.3.1 对照品溶液的制备 :精密称取 105 ‘C
恒重的黄等昔对照品 4 m g , 置于 50 m IJ容量
瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 。
2
.
3
.
2 色谱条件 :色谱柱 :十八烷基键合硅
胶 O D s 柱 , 3 . 9 c m x 1 5 0 e m ; 流 动相 :甲醇-
0.02 m ol/IJ磷酸二氢钠 一 1 % 冰醋酸 (28 : 72
·
4 5 2
.
2. 4 定性比较
2.4.1 供试品的制备 :将相当于 ] g 金银花
的水提醇沉液及超滤液蒸干 , 加入石油醚 40
m IJ , 置水浴上回流 l h , 过滤 , 药渣加 甲醇 30
m IJ置水浴上 回流 l h , 过滤 , 滤液蒸干 , 残渣
加水 40 m l一 , 使溶解 , 水溶液 用正丁醇萃取 3
次 , 每次 20 m l一 , 合并正 丁醇液 , 用水洗 涤 3
次 , 置水浴蒸干 , 残渣加 5 m IJ甲醇溶解 。
2
.
4
.
2 金银花定性比较 :硅胶 G F 254一 0 . 3 %
C M C
一
N a 薄层板 , 1 5 c n l 火 2 0 c n : , l o 5 C 活化
0.s h , 醋酸丁酷一甲酸一水 (6 : 1 : l) 展开 , 点
样 3 拌L 一5 拼IJ , 展开 12 em ~ 15 em , 取 出 , 晾
干 , 喷 10 % 硫酸乙醇液 , 1 1 0 ‘ C 加热至显色明
显 , 日光下观察 , 结果 见图 1 。
2
.
4
.
3 黄答 定性 比较 :硅 胶 G F二 4一 0 . 3 %
C M C
一
N a 薄层板 , 一5 Cm 只 2 0 em , I O S C 活
化 0.s h , 氯仿一乙酸乙酷一 甲醇一 甲酸 (5
2 : 1)展开 , 点样 3 拌L 一 5 拜L , 展开 12 Cnl~
15 cm 取出 , 晾干 , 日光下观察 , 结果见图 1 。
口 O
a b e
A 一金银花 B 一黄琴 a一水提醇沉
b一氯原酸 c一超滤液 d一黄芬昔
图 1 薄层层析图
3 结果及讨论
艾可冲剂方经超滤 后 , 氯原酸的平均 回
收率为 71 .8% , 而醇沉为 59.2% 。 超滤后黄
芬 昔的平 均 回收 率 为 70 .1% , 而 醇 沉 为
54 .9% , 从薄层结果看 , 超滤与醇沉斑点无明
显差异 。 可见超滤法较水提醇沉法能有效地
保留有效成分 。
根据以前的实验结果 〔5 〕, 采用 1.25 倍体
积超滤以确保完全 。 但超滤后处方金银花中
氯原酸的回收率低于单味药金银花中氯原酸
的回收率 。 因中药成分很复杂 , 颗粒及粘液等
易堵塞膜孔 , 可以采用冷藏 、 离心 、 纸浆过滤
等方法处理药液再超滤 ;在超滤过程中采用
短时反冲可以减少药液在膜上沉积 ;超滤结
束 , 用热水清洗超滤器可达到 良好的效果 。
参 考 文 献
1 林启寿 . 中草药化学 . 北京 :科学出版社 , 1 9 7 : 14 5
2 国家医药管理局 中草药情报中心站编 . 植物药有效成
分手册 . 北京 :人民卫生出版社 , 19 8 6 : 1 1 1
3 中 国人 民解放军空军北京医院药局 . 中草药 , 19 80 ; n
( 6 )
:
2 4 8
4 中国人民解放军空军北京医院药局 . 中草药 , 19 81 ; 12
( 6 )
:
8
s 刘振丽 , 等 . 中成药研究 , 1 9 9 6 ; 1 8 ( 2 ) : 4
( 1 9 9 7
一
0 7
一
0 7 收稿)
线叶菊总黄酮含量测定
内蒙古医学院(呼和浩特 。1 0 0 5 9 ) 乔俊缠 丧 陈 理 刘 涛 管艳艳 ‘ ’
摘 要 利用分光光度法测定了线叶菊地上部分及根部的总黄酮含量 , 结果显示地上部分的含量
明显高于根部 。
关键词 线叶菊 分光光度法 总黄酮 含量测定
线叶菊 F ilifo li:‘m s i b i r i c u m ( I才
·
) K i
-
ta m
. , 又名兔子毛 、 兔毛篙 、 西伯利亚艾菊 、
消疗草等 , 是菊科线叶菊属 植物 , 全草入药 ,
可治疗传染病高热 、 疗疮痈肿 、 血疲刺痛等
症 〔‘ , 2 〕 。 研究证明该药对金葡萄 、大肠和痢疾
杆菌均有一定 的抑制作用 , 并有镇静作用及
其它生理活性 〔3 , 4 〕。 据报道 〔5 〕, 线叶菊的抗菌
有效成分为兔毛篙素 、 北美圣草素 、万寿菊黄
素 3 , 6 一二 甲醚等多种黄酮类化合物 。 为了给
该药材的进一步研究和合理利用提供基础资
料 , 我们利用分光光度法对线叶菊地上部分
和根部的总黄酮含量进行了测定 。
1 仪器及实验材料
仪器 :u v 一 1 2 0 一 0 2 型分光光度计 。
A d d r e s s
:
Q i
a o
J
u n e h a n
,
I
n n e
乔俊缠 男 , 1 9 8 3 年毕业于内
Ia M edieal C ollege , H u h e h a o t e生物学系 , 学士学位 。 现任内蒙古医学院药学系中草药教研室讲师 。 多年来一直从事医药学教育事业 , 并致力于中草药鉴定和药用植物栽培技术的研究 , 取得了显著成绩 。 参加了《内蒙古植物药志》和《中成药药理及临床 》的编写工作 , 发表学术论文 10 多篇 , 其许多研究成果和项 目具有系统性 、 实用性 , 受到了药学界的好评和重视 。“ 本院 1997 届毕业生
《中草药 》1 9 98 年第 29 卷第 7期 . 4 5 3 .