全 文 ：·药理实验与临床观察·
茶多酚与亚硒酸钠联合对 EBV抗原表达的抑制作用△
中山医科大学肿瘤防治中心 (广州 510060)　　刘宗潮 　简少文　李志铭　朱孝峰　李　端　谢冰芬　冯公侃
摘　要　用间接免疫荧光法测定 Raji细胞和 B95-8细胞 EB病毒抗原的表达。结果显示无细胞毒浓度的茶多酚
与亚硒酸钠联合对 Raji细胞 EBV-EA表达有显著的抑制作用 ,优于单纯茶多酚或亚硒酸钠的抑制作用。两药
显示相互协同增效的作用。抑制率与药物浓度相关 ;单纯茶多酚对 B95-8细胞 EBV-V CA表达无抑制作用 ,但茶
多酚能增强亚硒酸钠对 B95-8细胞 EBV-V CA表达的抑制作用 ,抑制率随药物浓度的升高而升高。 表明茶多酚
能增强亚硒酸钠对 Raji细胞 EBV-EA及 B95-8细胞 EBV-VCA表达的抑制作用。
关键词　茶多酚　亚硒酸钠　 EBV抗原表达　抑制作用
Inhibitory Effect of Tea Polyphenol and Sodium Selenite Combination
on EBV Antigen Expression
Cancer Center , Sun Yat-sen Univ ersity of Medical Sciences ( Guang zhou 510060)　 Liu Zongchao , Jian Shaow en, Li
Zhiming , Zhu Xiao feng , Li Duan, Xie Bing fen and Feng Gongkan
Abstract　 　 EBV antigen expression of Raji cell s and B95-8 cells was detected using indirect
immunof luorescence staining methods. The experimental results show ed that tea polyphenol and sodium
seleni te used in combination at non-cy to toxic concentra tions show ed markedly inhibitory effects, on EBV-
EA expression of Raji cells, superio r to either tea polypheno l or sodium seleni te when used alone. The tw o
drug s showed synerg etic effect w ith each other. With a rate of inhibi tion dependent on tea polyphenol
concentra tion. Sing le tea polyphenol had no inhibi to ry effect on EBV-V CA expression of B95-8 cells, but
could enhance the inhibitory effect o f sodium seleni te in such cases on a concentration dependent manner.
Tea po lyphenol would enhance the inhibi to ry ef fect o f sodium selenite on EBV-EA expression of Raji cells
and EBV-V CA expression o f B95-8 cells.
Key words　　 tea polypheno l　 sodium selenite　 expression o f EBV antigen　 inhibi to ry ef fect
　　华南地区 ,特别是广东省是全世界鼻咽癌
( Nasopha ryngeal Ca rcinoma, N PC)最高发的地区。
EB病毒 ( Epstein-Ba rr Virus, EBV )与鼻咽癌密切
相关。曾毅 [1 ]认为完整的 EB病毒能诱发上皮细胞
癌变。黄腾波等人 [2 ]在高发区对队列人群进行了 10
年的前瞻性观察。 在提出癌前状态和癌前病变的基
础上确定凡处于癌前状态或癌前病变者应视为鼻咽
癌的高危人群。癌前状态人群血清中各种抗 EB病
毒抗原的抗体 ,如 EB病毒壳抗原抗体 Ig A( VCA /
Ig A) ,早期抗原抗体 Ig A( EA /Ig A)和 DNA酶抗体
( DEAb)的检测水平或同时升高 ,或单项异常升高。
因此 ,如果能控制 EB病毒在人群中的感染和激活 ,
降低人群 EB病毒抗原抗体水平 ,就有可能预防或
降低鼻咽癌的发病率。
据文献报道 [ 3～ 6 ] ,绿茶水、绿茶提取物及茶多酚
( tea polypheno l, TP)具有抗氧化、抗突变、防癌和
抗癌作用 ;亦有文献证明 [7 ] ,硒有防癌、抗癌作用。罗
慧玲等人 [ 8, 9 ]还证明 ,无毒性浓度的亚硒酸钠
( sodium seleni te, Se)对正丁酸巴豆油协同诱导的
Raji细胞 EA抗原和 B95-8细胞的 V CA抗原呈显著
的抑制作用。笔者研究了茶多酚和亚硒酸钠分别对
Raji细胞 EB病毒 EA抗原表达和 B95-8细胞 EB病
毒 V CA抗原表达的抑制作用 ,还测定了茶多酚与
亚硒酸钠联合对 Raji细胞 EB病毒 EA抗原表达和
B95-8细胞 EB病毒 V CA抗原表达的抑制作用。
1　材料
1. 1　材料: FITC-抗人 IgG购于上海生化所 ,
RPM I-1640培养基为 Sigma公司产品。
·110· 中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2000年第 31卷第 2期
Address: Liu Zh ongch ao, Cancer Center, Sun Yat-sen Univ ersi ty of Medical Sciences, Guang zh ou刘宗潮　男 ,研究员 ,硕士导师 ,中国药理学会肿瘤理药及化疗专业委员会委员 ,癌症杂志常务编委。 专长肿瘤药理及肿瘤化疗研究。除 4次获得国家自然科学基金的资助外 ,还负责或参与广东省科委基金、卫生部科研基金及国家“九· 五”攻关资助课题的研究。 主要学术成就有:超螺旋 DN A和 DNA拓扑异构酶Ⅱ分别在抗癌药物研究中的应用 ;绿茶提取物的抗癌作用和药理作用 ,被第二届世界中西医学术论坛年会评为“国际名医成果贡献奖”。△本课题系国家“九· 五”攻关研究项目 ,项目编号: 96-906-01-03
1. 2　受试药物:绿茶提取物 ,购于暨南大学生物系 ,
含茶多酚 86. 9% 。 亚硒酸钠为广州化学试剂厂产
品 ,化学纯 ,批号 970601。
1. 3　细胞株: Raji细胞含 EB病毒 DNA和核抗原
( EBN A)阳性 ,其余抗原阴性的人淋巴母细胞株。在
正丁酸钠 4 mmo l /L和巴豆油 200 ng /mL激发下可
产生 EB病毒的早期抗原 ( EA)。 B95-8细胞为 EB病
毒转化的绒猴淋巴母细胞株 ,恒定表达 5%左右壳
抗原 (V CA)。在正丁酸钠 4 mmol /L激发下 ,可增加
V CA的表达。上述二种细胞按常规培养于含 10%
小牛血清的 RPM I-1640培养液中 ,在二氧化碳培养
箱中培养传代。末次传代后 24 h检查活细胞数在
90%以上方可用于试验。
2　方法
2. 1　细胞毒性测定: 用台盼蓝拒染法 [10 ]分别测定
茶多酚、亚硒酸钠及茶多酚+ 亚硒酸钠对 Raji细胞
和 B95-8细胞的细胞毒作用。 测出茶多酚、亚硒酸钠、
茶多酚+ 亚硒酸钠最大的无毒浓度。
2. 2　 EBV-EA和 EBV-VCA抗原检测: 将待检测
的 Raji细胞或 B95-8细胞悬液分装入试管 ,将不同浓
度的药液加入各细胞培养管中 ,同时加入激发物正
丁酸钠 4 mmol /L和巴豆油 200 ng /mL。每一药物
浓度设 3个平行管 ,培养 48 h后收获细胞制成抗原
涂片、固定。 用间接免疫荧光法染色 ,再经伊文思蓝
复染 ,在荧光显微镜下每管数 500个细胞中 EA或
V CA阳性的细胞数 ,算出阳性百分率。 实验重复两
次 ,按下列公式计算抑制率 ( IR):
IR=
对照组阳性百分率 -实验组阳性百分率
对照组阳性百分率 × 100%
两个单药合用是否增效 ,按下列公式算出 q
值 [11 ]:
q=
E( A+ B)
EA+ ( 1- EA)× EB
E( A+ B)为两药合用的抑制率 ; EA和 EB为各
药单用的抑制率 ; q= 0. 85～ 1. 15表示两药作用相
加 ; q> 1. 15表示两药作用协同增强 ; q < 0. 85表示
两药作用互相拮抗。
3　结果
3. 1　药物最大无毒浓度的测定:茶多酚、亚硒酸钠、
茶多酚+ 亚硒酸钠对 Raji细胞最大无毒浓度分别
为 100. 0, 1. 0和 ( 50+ 0. 5) μg /mL;对 B95-8细胞的
最大无毒浓度分别为 100. 0, 1. 0和 ( 25+ 0. 25)μg /
mL。与 Raji细胞对比 , B95-8细胞对茶多酚+ 亚硒酸
钠作用更敏感。
3. 2　茶多酚对 Raji细胞 EB病毒 EA表达的抑制
作用: 茶多酚在 12. 5, 25. 0, 50和 100μg /mL浓度
下对 Raji细胞 EB病毒 EA表达 3批实验的平均抑
制率分别为 25. 9% , 32. 4% , 42. 7%和 54. 1% 。 IC50
为 79. 62μg /mL,显示中度的抑制作用。
3. 3　亚硒酸钠对 Raji细胞 EB病毒 EA表达的抑
制作用:亚硒酸钠在 0. 125, 0. 25, 0. 5和 1. 0μg /mL
浓度下 ,对 Raji细胞 EB病毒 EA表达 3批实验的
平均 抑 制 率 分 别 为 2. 5% , 21. 6% , 33. 7%和
63. 7% ,呈现中度的抑制作用。 IC50为 0. 7μg /mL。
3. 4　茶多酚与亚硒酸钠联合对 Raji细胞 EB病毒
EA表达的抑制作用:见表 1。从表 1可以看出 ,茶多
酚+ 亚硒酸钠分别为 ( 6. 25+ 0. 0625) , ( 12. 5+
0. 125) , ( 25+ 0. 25)和 ( 50+ 0. 5) μg /mL浓度下 ,
对 Ra ji细胞 EB病毒 EA表达 3批实验的平均抑制
率分别为 40. 3% , 56. 9% , 64. 9%和 72. 3% ,根据 q
值公式计算 q分别为 2. 05, 1. 38和 1. 17。 均大于
1. 15,说明两药联合应用有相互增效的作用。
3. 5　茶多酚对激发 B95-8细胞 EB病毒 V CA表达的
抑制作用: 单纯茶多酚对激发 B95-8细胞 EB病毒
VCA表达无抑制作用。
3. 6　亚硒酸钠对激发 B95-8细胞 EB病毒 VCA表达
的抑制作用: 亚硒酸钠浓度为 0. 125, 0. 25, 0. 5和
1. 0μg /mL情况下 ,对激发 B95-8细胞 EB病毒 V CA
表达 3批实验的平均抑制率分别为 1. 4% , 8. 7% ,
21. 7%和 25. 6% ,呈现轻度的抑制作用。
3. 7　茶多酚与亚硒酸钠联合对激发 B95-8细胞 EB
病毒 V CA表达的抑制作用:见表 2。 从表 2中可以
看出 , 茶多酚+ 亚硒酸钠分别为 ( 6. 25+ 0. 0625) ,
表 1　茶多酚与亚硒酸钠联合对 Raji细胞 EB病毒 EA表达的抑制作用
药物浓度 (μg /m L)
茶多酚 亚硒酸钠
抑　制　率　 (% )
茶多酚* 亚硒酸钠* 茶多酚+ 亚硒酸钠* * q值
6. 25 0. 0625 - - 40. 3 -
12. 5 0. 125 25. 9 2. 5 56. 9 2. 05
25. 0 0. 25 32. 4 21. 5 64. 9 1. 38
50. 0 0. 5 42. 7 33. 7 72. 3 1. 17
100. 0 1. 0 54. 1 63. 7 - -
　　　* 单纯含茶多酚或亚硒酸钠的抑制率 ;　* * 茶多酚+ 亚硒酸钠合并的抑制率
·111·中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2000年第 31卷第 2期
表 2　茶多酚与亚硒酸钠联合对激发 B95-8细胞 EB病毒 VCA表达的抑制作用
药物浓度 (μg /m L)
茶多酚 亚硒酸钠
抑　制　率　 (% )
茶多酚* 亚硒酸钠* 茶多酚+ 亚硒酸钠* * q值
6. 25 0. 0625 - - 2. 8 -
12. 5 0. 125 0 1. 4 18. 8 13. 4
25. 0 0. 25 0 8. 7 37. 3 4. 3
50. 0 0. 5 0 21. 7 - -
100. 0 1. 00 0 25. 6 - -
　　　* 单纯含茶多酚或亚硒酸钠的抑制率 ;　* * 茶多酚+ 亚硒酸钠合并的抑制率
( 12. 5+ 0. 125)和 ( 25+ 0. 25) μg /mL混合物浓度
下 ,对激发 B95-8细胞 EB病毒 V CA表达 3批实验的
平均抑制率分别为 2. 8% , 18. 8%和 37. 3%。两药联
合作用对激发 B95-8细胞 EB病毒 V CA表达的抑制
作用有所加强 ,但仍属轻度的抑制作用。
4　讨论
黄腾波等 [2 ]认为凡具有下列条件之一者:① EB
病毒 V CA /Ig A≥ 1∶ 80;② EB病毒 EDAb≥ 60% ;
③ EB病毒 VCA /IgA≥ 1∶ 5、 EA /Ig A≥ 1∶ 5、
EDAb≥ 30% 3项中任何 2项或 3项阳性 ;④ EB病
毒 V CA /Ig A、 EA /Ig A、 EDAb 3项中任何单项持续
高滴度或滴度持续升高 ,为处于鼻咽癌的癌前状态。
特别是 EA /IgA抗体阳性 ,发生鼻咽癌的危险性增
高。因此 ,控制 EB病毒的感染和激活可能从根本上
降低鼻咽癌的发生率。
绿茶是我国居民最喜爱的饮料。 从绿茶中提取
的茶多酚有许多生理学活性和药理作用 [3～ 6 ]。 硒是
机体必须的微量元素。 它的抗癌作用已为大多数学
者所肯定 [7 ]。王辉云等 [12 ]实验证明 ,硒可以预防
Wista r大鼠鼻咽癌的发生。罗慧玲 [8, 9 ]等报告 ,无细
胞毒性亚硒酸钠对正丁酸、巴豆油协同诱导的 Raji
细胞 EBV-EA表达和 B9 5-8细胞 EBV-V CA表达呈
现显著的抑制作用。
本文分别用无细胞毒性作用的茶多酚、亚硒酸
钠以及茶多酚与亚硒酸钠联合分别测定对 Raji细
胞 EBV-EA表达和 B95-8细胞 EBV-V CA表达的作
用。单纯的茶多酚或亚硒酸钠对 EBV-EA表达呈现
中度的抑制作用。 而茶多酚与亚硒酸钠联合在分别
降低药物浓度的情况下 ,仍能相互增强对 EBV-EA
表达的抑制作用。 单纯茶多酚对 B95-8细胞 EBV-
VCA的表达无抑制作用。单纯亚硒酸钠对 B95-8细胞
EBV-V CA的表达呈轻度的抑制作用。而茶多酚与
亚硒酸钠联合在分别 4倍降低药物浓度下 ,茶多酚
仍能增强亚硒酸钠对 EBV-V CA表达抑制作用。茶
多酚的加入可减少亚硒酸钠的用量 ,降低亚硒酸钠
的毒性。
黄家琛 [13 ]等人测定了鼻咽癌高发区四会县鼻
咽癌病人与健康人血清及头发中硒的含量 ,发现 50
例鼻咽癌病人血清硒平均含量是 ( 0. 084± 0. 016)
μg /mL;显著低于 56例健康人 ( 0. 096± 0. 029)μg /
mL, 54例鼻咽癌病人头发硒平均含量 ( 0. 443±
0. 070) μg /g,显著地低于 53例健康人 ( 0. 469±
0. 066)μg /g。揭示高发现场人群服用茶多酚及亚硒
酸钠合剂有可能降低人群中 EBV抗原体的滴度 ,从
而有可能降低鼻咽癌的发病率。
参 考 文 献
1　曾　毅 .中国肿癌 , 1996, 5( 5): 8
2　黄腾波 ,等 .癌症 , 1997, 16( 2): 81
3　 Yang C S, et al . National Cancer Ins ti tu te, 1993, 85( 13): 1035
4　唐幼英 .中草药 , 1991, 22( 9): 419
5　姚　林 ,等 .肿瘤防治研究 , 1995, 22( 2): 123
6　刘宗潮 ,等 .癌症 , 1996, 15( 3): 164
7　孔祥瑞编 .必须微量元素的营养、生理及临床 .合肥:安徽科学
技术出版社 , 1982: 296
8　罗慧玲 ,等 .癌症 , 1986, 5( 4): 341
9　罗慧玲 ,等 .中山医科大学学报 , 1993, 14(3) : 192
10　张鸿卿 ,等主编 . 细胞生物学实验方法及技术 .北京 . 北京师
范大学出版社 , 1992: 60
11　金正均 .中国药理学报 , 1980, 1( 2): 70
12　王辉云 ,等 .中华预防医学杂志 , 1992, 26(5) : 281
13　黄家琛 ,等 .癌症 , 1986, 5( 1): 17
( 1999-06-14收稿 )
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