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应用 M-H琼脂进行黄连对 252株临床菌株的体外抗菌活性研究
李仲兴 ,王秀华 ,赵建宏 ,杨敬芳 ,王　鑫
(河北医科大学第二医院 ,河北 石家庄　 050000)
摘　要: 目的　评价黄连对 252株临床菌株的体外抗菌活性。方法　采用新方法 ( M -H琼脂代替营养琼脂 )对黄连
进行金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和肠球菌等体外抗菌活性检测。结果　黄连对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌
和肠球菌的 M IC50分别为 0. 161, 0. 161和 0. 322 mg /mL。结论　黄连对金黄色葡萄球菌 、表皮葡萄球菌和肠球菌
均有很好的抗菌活性。
关键词: 黄连 ;金黄色葡萄球菌 ;表皮葡萄球菌 ;肠球菌 ;抗菌作用
中图分类号: R285　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 04 0337 03
Studies on in vitro antibacterial activity of Copt is chinens is against 252 strains in
clinic with mueller-hinton agar
L I Zhong-xing , W ANG Xiu-hua, ZHAO Jian-hong , YANG Jing-fang , W ANG Xin
　　 ( Second Hospital of Hebei Univ er sity o f Medica l Sciences, Shijiazhuang , Hebei 050000, China)
Key words: Copt is chinensis Franch; Staphylococcus aureus Rosenbach; Staphylococcus epidermidi
(Winslow et Winslow ) Evans; Enterococcus Thiercelin et Jouhauh; antibacterial ef fect
　　黄连为临床常用的清热燥湿、泻火解毒中药 [1 ]。
徐仲吕报道 100% 黄连水煎剂对志贺氏菌有抑制
作用 [2 ]。刘国声报道黄连对金黄色葡萄球菌 (以下简
称金葡菌 )的最低抑菌浓度 ( M IC)为 1∶ 160[3 ]。西
安医学院附一院检验科报道 0. 15% 黄连煎剂可抑
制金葡菌生长 [4 ] ,中国医学科学院药物研究所报道
黄连对金葡菌的 M IC为 1∶ 128[5 ] ,还有许多报
道 [6～ 8 ]对研究黄连及其临床应用起了重要作用 ,但
报道大多为定性实验 ,只有少数是定量试验 ,而且多
使用的是 1株 细菌 ,由于样本小 ,很难有重复性和
代表性 ,尤其所用培养基均为肉膏汤和营养琼脂 ,其
结果显示黄连对金葡菌的 M IC数值较低。我们将黄
连定量抑菌实验作了重大改进: 一是利用琼脂稀释
法 ( M-H琼脂代替营养琼脂 ) ;二是采用大批量菌
株进行实验 ;第三是将手工接种细菌改用多点接种
仪接种 (每次可接种 28株细菌 )。经改进后不仅准
确性高 ,具可重复性 ,且提高了中药的抑菌效果 ,也
为中药研究早日与世界接轨创造了条件。
1　材料与方法
1. 1　材料:微量多点接种仪:北京医科大学昆仑药物
发展研究所生产。 培养基: M ueller-Hinton琼脂 (美
国 BD公司生产 , BBL, 简称 M-H琼脂 )。黄连 (购自
河北省药材公司 ) ,先将黄连按常法做成煎液 [9, 1 0] ,即
100 g黄连 ,文火煎后做成 200 mL煎液 (为 50% 黄
连煎液 )备用。菌种:从我院临床病人的血液、尿液、脓
汁、痰等标本分离的菌株共 252株 ,其中金葡菌 112
株 ,表皮葡萄球菌 112株 ,肠球菌 28株。
1. 2　方法: 采用琼脂稀释法 ,用 M-H琼脂对黄连
进行定量抗菌实验 [11, 12 ]。
1. 2. 1　药液稀释:排列无菌中试管 10只 ,于 2～ 10
只管中加无菌蒸馏水 10 mL,取 50% 黄连水煎液
20 mL,于第一管加入 10 m L,第 2管加入 10 mL,
于第 2管混合后取出 10 m L,加入第 3管 ,再混合
后取 10 mL放入第 4管 ,如此连续稀释至第 9管取
出 10 mL弃掉。第 10管只有无菌蒸馏水作对照。这
样 1～ 9管只含有不同浓度药液各 10 mL。
1. 2. 2　含药平板制备:用无菌操作将已溶化的无菌
M-H琼脂 900 mL,分装于 10瓶 ,每瓶 90 mL,将第
·337·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 4期
收稿日期: 2000-06-12基金项目:国家中医药管理局重点课题资助项目 (编号: 97Z099)
1管含 10 m L 50% 黄连水煎液放入含 90 m L培养
基的瓶中 ,混合后倾注 4个平板 ,每个平板含 25
m L含药琼脂 ,第 2管以后的平板制备同第 1管 ,凝
固后备用。 这样第一组的琼脂平板实际含黄连 5%
( 1∶ 2) ,第二组为 1∶ 40,第三组为 1∶ 80……。
含药培养基的药物浓度计算:将一定量 ( 50 mL
或 100 mL)、一定比例 ( 1∶ 2或 1∶ 4)的生药水煎
液于 37℃温箱中烘干 ,称重 ,求出每毫升水煎液的
实际重量 ,就可算出每毫升培养基中水煎药液干重
量。如 100 mL 50% 黄连煎液干重为 10 300 mg,第
一组 100 mL含药培养基含有煎液 10 mL,那么每
毫升培养基含煎液干重= 10300
100
× 10
100
= 103× 1
10
=
10. 3 mg
所以第一组含药培养基实际含煎剂干重为
10. 3 mg /mL,因倍量稀释 ,故第二组含药培养基为
第一组数被 2除即可。
1. 2. 3　菌液制备:将金葡菌等新鲜培养物 (菌落 )制
成菌液 ,浓度相当于 0. 5麦氏比浊管。
1. 2. 4　用多点接种仪分别吸取各种菌液并点种于
含不同药物浓度的琼脂平板上。于 35℃ 培养 18～
24 h,观察 M IC[11, 12 ] ,并统计出 M IC50和 M IC90的药
物浓度和累积抑菌百分率。
2　结果
通过黄连煎剂对 112株金葡菌及 112株表皮
葡萄球菌和 28株肠球菌的抑菌实验 ,结果表明黄
连对上述 3种细菌的抑菌效果均较好。其 M IC90分
别为 2. 575, 1. 288和 0. 644 mg /mL, M TC50分别为
0. 161, 0. 161和 0. 322 mg /mL,结果见表 1, 2。
表 1　黄连对金葡菌、表皮葡萄球菌和肠球菌的抗菌作用
菌种　　　 菌株数 M IC(mg /mL)
MIC范围 M IC50 M IC90 M IC众数
金葡菌 112 0. 04～ 10. 3 0. 161 2. 575 0. 161
表皮葡萄球菌 112 0. 04～ 2. 575 0. 161 1. 288 0. 322
肠球菌 28 0. 04～ 0. 644 0. 322 0. 644 0. 322
表 2　黄连对金葡菌、表皮葡萄球菌和肠球菌的累积抗菌率
菌种 菌株数
M IC( mg /m L)
10. 3
( 1∶ 20)
5. 15
( 1∶ 40)
2. 575
( 1∶ 80)
1. 288
( 1∶ 160)
0. 644
( 1∶ 320)
0. 322
( 1∶ 640)
0. 161
( 1∶ 1 280)
0. 08
( 1∶ 2 560)
金葡菌 112 生长菌株数 3 5 11 16 24 26 36 73
抑制菌株数 109 107 101 96 88 86 76 39
累积抑菌率 (% ) 97. 32 95. 54 90. 18 85. 71 78. 57 76. 79 69. 86 34. 82
表皮葡 112 生长菌株数 0 0 0 1 18 42 55 73
萄球菌 抑制菌株数 112 112 112 111 94 70 57 39
累积抑菌率 (% ) 100 100 100 99. 11 83. 93 62. 5 59. 89 34. 82
肠球菌 28 生长菌株数 0 0 0 0 0 3 15 25
抑制菌株数 28 28 28 28 28 25 13 3
累积抑菌率 (% ) 100 100 100 100 100 89. 29 46. 43 10. 71
3　讨论
　　关于黄连的抑菌作用 ,以前研究报道大多为定
性实验 ,即黄连有无抗菌作用 ;真正观察黄连的抗菌
作用 ,应采用定量方法 ,即稀释法 (分为琼脂稀释法
和肉汤稀释法 )。我们通过用 M-H琼脂以琼脂稀释
法研究表明 ,黄连对革兰阳性球菌有较强的抑菌作
用 ,不仅对两种葡萄球菌有较好的抑菌效果 ,而且对
肠球菌的抑菌活性也很好 ,生药的 1∶ 640 ( 0. 322
mg /mL)稀释 ,则可抑制 28株肠球菌的 89. 29%。
在目前肠球菌对许多抗生素耐药的情况下 ,黄连对
肠球菌的抑菌效果 ,对治疗此菌的感染有重要的现
实意义。
关于黄连体外抗菌实验所用的培养基 ,过去一
般液体培养基用肉汤或肉膏汤 ,固体培养基使用营
养琼脂 ,由于培养基中大多含有蛋白胨 ,能钝化抗菌
药物的抗菌作用 ,因此不能很好地显示黄连的抗菌
作用。我们将国际上公认的抗菌药物敏感实验所用
的培养基—— Mueller-Hinton琼脂培养基引入抗感
染中药的抗菌实验中 ,提高了抗菌效果 [13 ] ,本试验
在对黄连的抗菌实验中亦可看出此培养基可提高黄
连的抗菌效果 (表 3)。
实验菌株是反映抗菌效果的重要指标 ,然而菌
株之间其对抗菌药物耐药程度则截然不同。 同种药
物对同种菌的不同菌株的抑菌结果也不同 ,如我们
使用的 112株金葡菌 ,黄连对这些菌株的 M IC最
高可达 1 0. 3mg /m L ,而有的菌株 M IC则低于
·338· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 4期
表 3　不同作者定量检测黄连对金葡菌抑菌活性报道情况
作者 报道年代 所用培养基 菌株数 菌株来源 MIC　　　
刘国声 [3] 1950 肉膏汤 1 实验室保存 1∶ 160
中国医科院药 1960 肉膏汤 1 实验室保存 1∶ 128
物研究所 [5]
陈杏科等 [14] 1987 双料基础培养基 1 实验室保存 1∶ 640
魏长志等 [9] 1994 营养琼脂 1 实验室保存 1∶ 320
本试验 2000 M-H琼脂 112 临床菌株　 1∶ 1 280*
　　　　* M IC众数值
0. 08 mg /mL,因此 ,要想对一种中药客观地反映其
抑菌效果 ,就必须采用大样本 ,至少同一菌种的抑菌
实验应在 30株以上 ,否则很难有代表性和重复性。
关于接种细菌方法 ,过去接种菌株 ,一般采用手
工方法 ,由于取菌量不一 ,往往会出现误差 ,而且手
工接种每次只能接种 1株细菌 ,不仅费时、费力 ,同
时准确性差 ,建议今后琼脂稀释法应采用多点接种
仪接种细菌 ,不仅易于操作 ,每次可接种至少 28株
细菌 ,同时由于取菌量一致 ,从而保证了结果的准
确性。
总之 ,中药抑菌实验宜采用 M-H琼脂 ,淘汰使
用营养琼脂 ,采用大样本以多点接种仪进行实验 ,可
促进中药抑菌实验逐步走向标准化 ,为中药尽快走
向世界创造条件 ,发挥中药为全人类服务的重要
作用。
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大承气汤对大鼠肠平滑肌细胞内磷酸二酯酶的影响
谢文利 1 ,林秀珍 2 ,马德禄 2 ,李宏捷 2
( 1. 武警医学院 药理教研室 ,天津　 300162;　 2. 天津医科大学 ,天津　 300070)
摘　要: 目的　探讨大承气汤的“通里功下”作用与肌醇脂质信号系统的关系 ,进一步阐明大承气汤的作用机制。方
法　采用反相高效液相色谱法分别测定了手术对照组、肠梗阻模型组、不同剂量大承气汤组的大鼠肠平滑肌细胞
内磷酸二酯酶 ( PDE)的含量。结果　体内实验发现: 50% , 100% , 250% 大承气汤可使肠梗阻大鼠肠平滑肌细胞内
PDE含量明显升高 (P < 0. 05)。体外实验发现: 50% , 100% , 250%大承气汤可使肠便阻大鼠肠平滑肌细胞内 PDE
含量明显升高 (P < 0. 05)。 结论　大承气汤可使大鼠肠平滑肌细胞内钙调蛋白 ( CaM )活性提高 ,由此推断 ,大承
气汤的通里攻下作用很可能是通过激活肌醇脂质 ( IP3 )信号转导系统使胃肠道平滑肌细胞内 Ca2+ 释放增加 ,再通
过 CaM间接地激活一系列的蛋白激酶而实现。
关键词: 大承气汤 ; IP3; CaM ; PDE;肠道平滑肌
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 04 0339 03
·339·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 4期
收稿日期: 2000-07-08作者简介:谢文利 ( 1968-) ,男 ,湖南 ,讲师 ,硕士学位。 本科毕业于中国药科大学 ,硕士毕业于天津医科大学。 研究方向为生化药理。
Tel: 24372788-78457