全 文 ：等限制 ,难以进行大批量样品分析。目前多数作者采
用薄层光密度扫描法测定中药制剂中的牛磺酸 [2, 3 ]。
本文采用薄层光密度测定法测定人血中牛磺酸
的含量 ,操作方法简便 ,成本低 ,线性关系好 ,准确性
好 ,灵敏度可达 40 ng ,精密度高 ,重现性好 ,平均回
收率为 98. 97% ,较适合于大批量样品分析研究 ,可
用作体内药代动力学研究中牛磺酸的检测。
在实验中我们发现 ,在含有牛磺酸的血浆中加
入少量 10%磺基水杨酸 ,沉淀血浆中的蛋白 ,然后
进行层析可得较理想的结果。
参考文献:
[1 ]　岳　旺 ,张士善 . 牛磺酸的药理研究进展 [ J] . 药学通报 ,
1984, 19( 3): 42-44.
[2 ]　唐　盈 . 牛磺酸的薄层光密度测定法 [ J ] .医药工业 , 1987, 18
( 7): 321-322.
[3 ]　刘伟华 . 薄层扫描法测定中药口服液中牛磺酸的含量 [ J ]. 中
国实验方剂学杂志 , 1996, 2( 6): 42-43.
吸附小柱 -高效液相色谱法测定五味沙棘散中栀子苷的含量
刘峰群 ,韩　晋 ,袁海龙 ,张新全 ,崔　燕 ,肖小河 ,蔡光明 ,贺承山
(解放军第 302医院药学部 ,北京　 100039)
摘　要: 目的　测定复方中药制剂五味沙棘散中的栀子苷。 方法　大孔吸附脂预处理样品 ,高效液相色谱法测定。
结果　栀子苷峰面积积分值与进样量 ( 0. 13～ 1. 30μg ) 呈良好的线性关系 ,回归方程为: Y= 1 562. 808 5X+
39. 977 6,r= 0. 999 7;加样回收率 98. 27% , RSD 1. 10%。 结论　大孔吸附树脂小柱富集中药复方制剂中的栀子
苷 ,可排除其它成分对高效液相色谱的干扰。
关键词: 大孔吸附树脂 ;高效液相色谱法 ;五味沙棘散 ;栀子苷
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 03 0218 02
Determination of gardenoside in WUWEISHAJI POWDER by
mini adsorption column-HPLC
LIU Feng-qun, HAN Jin, YUAN Hai-long , ZHAN G Xin-quan, CU I Yan,
X IAO Xiao-he, CA I Guang-ming , HE Cheng-shan
　　 ( Depa rtment o f Pharmacy, No. 302 Hospital o f PLA, Beijing 100039, China )
Key words: macropo rous adso rption resin; HPLC; WUWEISHA JI POWDER
* ; g ardeno side
* W UW EISHAJI POWDER is a Chinese herba l r ecipe o f pow der.
　　五味沙棘散系蒙古族验方 ,由沙棘膏、木香、白
葡萄干、甘草、栀子等多味药材经粉碎后制成的散
剂 ,具有清热祛痰、止咳定喘等功能 ,用于慢性支气
管炎、肺热久嗽、喘促痰多 ,胸中满闷、胸肋作痛 ,收
载于《中华人民共和国药典》2000年版。方中栀子具
有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒等作用 ,其所含主
要成分为栀子苷 ,本文研究其含量测定作为控制质
量的一项指标。
1　仪器、材料与试药
大孔吸附树脂 DA-101,天津农药厂提供 ,粒度
20～ 60目 ,干树脂比表面积≥ 400 m2 /g;高效液相
色谱仪:惠普 HP 1100系统 ,紫外检测器 ;栀子苷对
照品 (中国药品生物制品检定所提供 ) ;甲醇 (色谱
纯 ) ;超纯水 ;五味沙棘散 (本院制剂室自制 )。
2　吸附小柱制备与色谱条件
2. 1　吸附小柱制备:选取 40～ 60目大孔吸附树脂
适量 , 95% 乙醇浸泡 24 h ,湿法装入 5 mL酸式滴
定管内 ,装量以树脂沉降后上沿至滴定管刻度 3. 0
m L处为宜。以 95% 乙醇冲洗至洗脱液加等体积水
不浑无色为至 ,改以足量水冲洗至洗脱液不含乙醇 ,
备用。
2. 2　色谱条件: Kromasi l C18分析柱 ( 5μm, 4. 6
mm× 250 mm);流动相甲醇-水 ( 35∶ 65) ;流速 1. 0
m L /min,检测波长 240 nm;柱温: 30℃。
·218· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 3期
收稿日期: 2000-03-17作者简介:刘峰群 ( 1965-) ,男。江苏泰兴人。 1986年毕业于中国人民解放军第二军医大学 ,医学学士学位。现为解放军第三○二医院药学部副主任药师。 长期从事抗肝病中药新药的研究与开发 ,负责制剂工艺与药物分析工作。通讯地址:北京市丰台路 26号 ,
100039。 电话: 010-66933230。 E-mail: snaketop@ 263. net
3　实验方法
3. 1　对照品溶液的制备: 精密称取栀子苷对照品
13. 0 mg ,置 10 mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇
匀 ;精密量取 0. 5 mL,置 10 m L量瓶中 ,加甲醇稀
释至刻度 ,摇匀 ,制成 65μg /mL的对照品溶液。
3. 2　样品溶液的制备:取五味沙棘散约 2. 0 g,精密
称定 ,置 25 mL量瓶中 ,加水至刻度 ,密塞 ,称定重
量 ,超声提取 1 h,放冷 ,用水补足减失的重量 ,摇匀 ,
滤过 ,弃去初滤液 ,精密量取续滤液 2. 5 mL,加入大
孔吸附树脂小柱 ,以足量水洗脱至洗脱液无色 ,改用
50% 乙醇洗脱 ,收集前 10 mL洗脱液定容于 10 mL
容量瓶内 ,摇匀 ,作为样品溶液。
3. 3　空白溶液的制备: 按处方比例及制备方法 ,制
备不含栀子药材的阴性样品 ,再按 3. 2项样品溶液
的制备方法制备空白溶液。
3. 4　测定: 分别精密吸取对照品溶液、样品溶液及
空白溶液各 10μL,按上述色谱条件测定 ,结果空白
溶液在栀子苷峰处无干扰。 见图 1。
A-栀子苷对照品　 B-样品溶液　 C-空白溶液　 1-栀子苷峰
图 1　 HPLC色谱图
3. 5　线性关系考察: 分别取 3. 1项下对照品溶液
2. 0, 5. 0, 10. 0, 15. 0, 20. 0μL进样 ,按上述色谱条
件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标 ,对照品进
样量为横坐标绘制标准曲线 ,得回归方程为: Y=
1 562. 808 5X+ 39. 977 6, r= 0. 999 7。表明栀子苷
进样量在 0. 13～ 1. 30μg线性关系良好。
3. 6　精密度试验: 准确吸取对照品溶液 10μL,重
复进样 6次 ,栀子苷峰面积积分值的 RSD 分别为
1. 12% 。
3. 7　精密度试验:精密称取批号为 991020的样品 ,
测定 5次 ,外标一点法计算栀子苷的含量 ,结果平均
为 2. 112 6 mg /g, RSD为 1. 91% (n= 5)。
3. 8　稳定性试验:取对照品溶液在 0, 0. 5, 1, 2, 4 h
分别进样 10μL,记录峰面积 ,结果 4次进样栀子苷
峰面积积分值的 RSD为 1. 53% ,对照品溶液在 4 h
内较稳定。
3. 9　加样回收率: 取已测定含量的样品 (批号
991020)约 1. 60 g,精密称定 ,加入 1. 3 mg /mL对
照品溶液 0. 5 mL,按 3. 2项制备样品溶液并测定 ,
计算回收率 ,结果回收率为 98. 27% , RSD = 1. 10%
(n= 6)。
3. 10　样品测定:精密吸取样品溶液 10μL,按上述
色谱条件测定。 4批样品中栀子苷的含量测定结果
见表 1。
表 1　 4批样品栀子苷含量测定结果　 ( mg /g)
样品批号 测得量 平均含量
990615 2. 035 2
990810 1. 986 6
991020 2. 120 8 2. 043 2
000308 2. 030 0
4　讨论
4. 1　文献 [1～ 3 ] HPLC法测定栀子苷的含量一般采
用甲醇提取液直接进样 ,但本方中富含糖、植物蛋
白、有机酸等 ,对色谱结果的干扰较大。应用大孔吸
附树脂富集制剂中有效成分 ,结合其它方法鉴别和
进行含量测定可控制中药制剂质量 [4 ]。 本文研究建
立的大孔吸附树脂小柱 -高效液相色谱法测定五味
沙棘散中栀子苷含量 ,操作步骤少 ,色谱柱污染小 ,
柱压低 ,分离度、专属性及重现性好、灵敏度高。
4. 2　乙醇浓度增大 ,对栀子苷的洗脱能力也相应增
强 ,但洗脱液同时也含有大量其它脂溶性成分 ,同样
对色谱产生一定干扰。 本文采用 50% 乙醇洗脱 ,制
得的样品溶液主要含环烯醚萜苷类成分 ,空白溶液
色谱几乎无吸收。
4. 3　五味沙棘散为复方中药制剂 ,本研究对样品的
超声提取溶剂进行了考察 ,结果表明以甲醇、水超声
1 h提取含量测定值几乎无差异。考虑到甲醇提取液
装载到吸附小柱时需挥干甲醇后再用水溶解 ,故选
用水超声 1 h提取。此外 ,超声提取液装载到吸附小
柱前亦可不过滤 ,但洗脱液不易通过 ,需对吸附小柱
进行加压或减压操作。
参考文献:
[1 ]　黄新生 . 反相高效液相色谱法测定龙胆泻肝丸中栀子苷的含
量 [ J] .中国中药杂志 , 1998, 23( 11): 674-676.
[2 ]　王钢力 ,赵淑杰 ,陈德昌 . RP-HPLC测定大黄栀子中环烯醚萜
苷类的含量 [ J] . 中国中药杂志 , 1999, 24( 10): 616.
[3 ]　童玉懿 ,章观德 ,相乐和彦 ,等 .栀子及其制剂中栀子苷的高压
液相色谱分析 [ J] .中国中药杂志 , 1989, 14( 4): 228-230.
[4 ]　刘峰群 ,肖小河 ,史成和 ,等 .大孔吸附树脂在药物分离中的研
究应用 [ J ]. 中国医院药学杂志 , 2000, 20( 3): 166-167.
　　 1999年中国科技论文统计分析报告新闻发布:按全国 1 372种主要科技期刊
总被引频次排序 ,《中草药》杂志名列全国期刊第 18名。
·219·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 3期