全 文 ：粗茎秦芜组织培养及再生植株
兰州大学生物系 ( 7 3。。 0 0) 孟玉玲. 贾敬芬
摘要 用粗茎秦芜 G。 。 t fa a n e ra s o i。 a o l i。子叶和下胚轴为材料 。 在 M S+ Zm g /L Z, 魂一 D + 0 . 5
m g / L B A的培养基上进行培养 , 子叶及下胚轴的出愈率为 1 0 % 。 愈伤组织继代培养于M S + 0 . 5
m g / L Z
,
4刃 + o . s m g / L B A + o . s m g / L N A A + 50 o m g / L L H + 3倍M S有机物和维生素的培
养基上生长旺盛 。 愈伤组织转入分 化培 养基M S + l m g / L N A A + Zm g / L B A + 3m g / L z T + 3
m g / L G A + s o o m g / L L H + 6 %蔗糖 + 3倍M S有机物和维生素 + 3倍 F e S O 一 ( N a : 一 E D T A ) 上
培养 , 其中40 %形成体细胞胚 。 体细胞胚在无激素M S培养基上发育成苗 。
关键词 秦芜 组织培养 体细胞胚胎发生 再生植株
秦芙是国家重点保护野生药材之一 。 秦芜以根入药 , 能祛风湿 , 退虚热 , 止痹痛〔。 。 秦
芜主要含龙胆苦贰等生物碱 , 秦芜生物碱对抗风湿性关节炎有显著作用 (2 〕 。 粗茎秦芜属龙胆
科植物 , 组织培养成功的龙胆科植物只有龙胆草 G即 t i a肋 s c a b r a B u n g e 〔3〕和 东 北 龙胆
G
. 。 。 。 s加 r i o a K it ag 〔` 〕。 粗茎秦芜 的组织培养在国内外尚未见报澎。 粗茎秦充为国家药典
规定的 4种商品秦羌之一 。 近年来野生资源大量减少 , 应用组织培养方法繁殖和保存野 生 药
用植物种质已成为必需 。 今通过体细胞胚胎途径获得粗茎秦芜再生苗 , 具有诱导周期短 、 再
生苗频率高 、 无玻璃化苗 、 苗具有健状的根等优点 。 为粗茎秦苏的人工繁殖 , 选育药用成分
含量高的突变系提供可靠的实验基础 。
1 材料和方法
粗茎秦芜种子经 70 % 乙醇浸泡 30 5 , 0 . 1% 升汞浸泡 8 ~ 10 m in , 无菌水冲洗 3一 4 次 , 接
入无激素M S培养基 中 , 生长至子叶完全展开 , 苗高约 cZ m , 将子叶及下胚轴切成段 , 然 后
分别接入各种诱导培养基 ( 表 1 ) 上诱导形成愈伤组织 ( 图 , 1 、 2 ) 3周后统计形成愈伤组织
的外植体数 , 并计算出愈率 。 出愈率% 二 形成愈伤组织的外植体数 /接入外植体数 x 1 0 % 。
形成的愈伤组织继代保存于 M S + o . s m g / L Z , 4一 D + o . s m g / L B A + o . s m g / L N A A +
5 0 m g / L L H
+ 3倍M S有机物和维生素的培养基上 。 将形成的白色松软愈伤组织切割为直径
3 ~ 4 m m 的小块 , 分别放在不 同培养基 ( 表 2 , 3 ) 上进行对比实验 。 3周后统计在愈伤组织上
形成体细胞胚的情况 。 体细胞胚诱导率% = 形成体细胞胚的愈伤组 织 块数 /接种的愈伤组 织
块数 x 1 0 % 。 体细胞胚在实体显微镜 O P T O N 上观察并照相 ( 图 , 4 ) 。 形成体细胞的愈伤组
织块转入无激素 M S培养基上 , 在光照 15 0 0~ Z o 0 lx 下培养 , 2周 后 就 形成具有根的健壮 苗
( 图 , 5 ) 。 培养基均以 M S为基本培养基 , 用 l m o l / L N a 0 H调 p H S . 8~ 6 . 2 , 0 . 8% 琼 脂 固
化 。 在昼夜温 度 25 ℃ / 18 ℃ , 光强 8 0 ~ 1 0 0 lx , 光暗交替 1 4 / 1 h0 的条件下培养 。 所有统计
数据是 3次重复的平均值 。
2 结果和讨论
2
.
1 粗茎秦芜愈伤乡_ 织的诱写 : 子叶及下胚轴诱导形成愈伤组织的实验 结果 见 表 1 。 在 含
Z m g/ L Z
, 4一 D 和。 . s m g / L B A 的培养基上 , 下胚轴经大约 7 d培养后在其切口处形成 白色
松软愈伤组织 , 相比较 , 子叶切块形成愈伤组织较迟缓 , 形成的愈伤组织稍带黑色而且具粘
性 , 生长缓慢 。 无 2 , 4一 D 时 , 出愈率为零 , 只加 l m g / L Z , 4一 D 出愈率上升到 30 % ~ 4 % 。
. 人 d d r o s s : M e u g Y u l i n g , D e P a r t m e n t o f B i o l o g y , L a n 乞 h o u U n i v e r s i t y , L a n 落h o u
《中草药》 1 9 9 5年第 2 6卷第 1 0斯 . 5 3 7 -

可能与供试的植物种类和诱导材料有关 。 细胞分裂素对体细胞的诱导有较为显著的 促进 作
用 , l m g / L B A 与 l m g / L Z T配合 , 诱导率为 5% ~ 6% 这与 红豆草〔的体细胞胚的诱导结果
相一致 。 l m g / L N A A + 会m g / L B A + 3m g / L Z T + 3 m盯 L G A 3配合使用 , 可将诱导率
提高到 12 % ~ 20 % ,达到最佳诱导效果 。在体细胞胚的发生中激素起着非常重要的作用 , 这一
点已由大量的报道所证实 。 但对于不同的植物种类及不同的诱导材料来说 , 诱导体细胞胚所
要求的激素种类 、 组合和用量都不相同 。
2
.
3
.
2 蔗糖、 水解乳蛋白 ( L H ) 、 M s有机物和维生素及 F e s o ` ( N a Z一 E D T A ) 对体细胞
胚发生的影响 : 以下胚轴来源的愈伤组织为材料 , 选用诱导效果最好的激素组合 , 然后分别
加入蔗糖等 4类物质 , 结果见表 3 。 蔗搪浓度从 3%提高到 6% , 可使休细胞胚诱导率从 20 %提
高到 42 % 。 效果汲为显著 。 已有报道阐明高浓度蔗搪对体细胞胚的发生有显著的 促 进 作 用
〔9〕。 5 0 0琪 g / L L H , 3倍M S有机物和维生素和 3倍 F e S O ` ( N a : 一 E D T A ) 的加入刘体细胞
胚的发生有明显的促进作用 。 4种物质配合使用 , 可使诱导率提高到 5 ,% 。 复合添加物 质 对
体细胞胚发生的促进作用 已在许多实验中得到证实〔的 。 培养基中常常加入各种 生 长辅助物
质如肌醇 、 烟酸 、 V B : 、 V B。等 , 对培养未分化的幼胚是必须的〔7 〕。
2
.
3
.
3
、 体细胞胚植株的形成 : 将形成体细胞胚的愈伤组织转入无激素的M s培养基中 , 2周后
成形 cI m左右的具根小苗 ( 图 , 5 ) 。 外源激素的加入对体细胞胚的进一步发 育 不 利。 A l-
A b at 等〔功〕认为从细胞决定到球形胚阶段依赖于外源激素的存在 , 但球形胚以后的发育受到
外源激素的抑制 。 粗茎秦大的体细胞胚的发育符合上述规律 , 形成的体 细胞 胚 在无激素的
M S培养基上分化成苗率可达 9 0% 以上 。
致谢 ; 扭茎秦尤种于由西 书高原生物研究所刘建 全同志咭送 , 在此深表谢意 。
, 考 文 献
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(上接 第5 2 3页 )
5
. 谁 紫外吸收光谱图一致 , 层析图谱 , 除了冷浸 正丁醇萃取 、 硅胶柱层 析 外 , 其余层析图
谱一致 。 因此 , 用甲醇冷浸法一步提取趁可作为葛根 总黄酮的提取工艺 。
5
.
5 通过对葛根总黄酮薄异层析巾 , 5神展开溶媒的比较说明 , 以氯仿一甲醇一水 ( 7 · 2 ` 5 :
0
.
2 5 ) 为最佳呢开挤媒 。 因此 , 可作为葛根总黄酮分离时的 哎开溶媒 。
参 考 文 献
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《中草药 》 1 9 9 5年第 26 卷第 10 期 5 3 9
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( 0 r i g i n a l a r l i e l e P a g e 5 2 9 )
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( 0 r i g i n a l a r t i e l e o n p a g e 5 3 2 )
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, t h r e o t i m o M S o r g a n i e s a n d y 圣t a m i n s , 6落 s u c r o s e a n d s q o m g / L L H a n d t h r e e t i m e
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