全 文 ：杜仲叶中氯原酸的提取分离研究
华中农业大学食品科技系 (武汉 4 3 0 0 70) 戚向阳 帝 张声华 陆彩玲 李 洁
摘 要 研究 了杜 仲叶中抓原酸的提取分离条件 。 结果表明 : 以水为溶剂 ,将杜仲 叶粉末于 40 ℃
下以 1 : 6 的料液比浸提 4 次 ,每次 3 0 m in ,抓原酸的浸 出率为 ( 94 . n 士 0 . 53) % (n 一 3) 。 水提液经
浓缩及分离纯化得抓原酸提取物 ,得率为 (4 . n 土 0 . 11) % (n ~ 3) ,纯度为 (2 3 . 73 士 0 . 55) % 。
关健词 杜 仲叶 提取 分离 氛原 酸
杜 仲 E u c o m m i a u lm o ide : O l i v . 传统 以
皮人药 ,近来研究证实杜仲皮与叶的化学成
分基本一致 , 具有同等功效 , 可 以 以 叶代皮 ,
尤其是杜仲叶中氯原酸的含量远远高于杜仲
皮 , 可达 5 %左右 .(1 幻 。
国内外对氯原酸的提取 、 分离进行了广
泛研究 ,多采用 甲醇 、 乙醇及酸性正丁醇等有
机 溶 剂 提 取 ; 利 用 柱 层 析 法 ; 纸 层 析 法 、
H P L C 制 备 法及 沉 淀 萃 取 法 进 行 分 离 纯
化 〔卜 ` 。〕 。 这些方法都存在一定不足 ,成本高 ,
工序复杂 ,柱填料不易再生等 ,且多以咖啡豆
及金银花为原料 。 而从杜仲叶中提取分离氯
原酸的方法还未见有关文献报道 。 因此 , 我们
研 究了杜仲叶氯原酸的提取分离条件 , 为杜
仲叶的开发利用提供依据 。
1 材料 、 仪器及主要试剂
杜仲叶 : 由湖北省郧西县提供 ; 日本岛津
S C L
一
6A 高效 液相 色谱 仪 ; 氯 原酸 : 德 国进
口 。
2 实验方法
2
.
1 杜仲叶中氯原酸的提取与分离 : 取一定
量杜仲叶粉末 , 加适量溶剂浸提数次 , 过滤 ,
合并滤液 ,经真空浓缩及柱层析分离 ,得棕黄
之粉末状杜仲叶氯原酸提取物 。
2
.
2 氯原酸含量的测定
2
.
2
.
1 浸提样 品的处理 : 称取一定量杜仲 叶
粉末 , 用溶剂浸提数次 , 过滤 ,合并滤液并减
压浓缩 , 再用 甲醇溶解 ,定容至一定体积 。
2
.
2
.
2 色谱 条件 : 色谱柱 : Y W G 一1C 8 4 . 6
m m l
·
D X 2 5 0 m m
,
1 0 拌m (中科 院大连化学
物理研究所 ) ; 流动相 : 甲醇 一水 一冰乙酸 ( 1 9 :
8 1 , 1
.
5 ) ; 流速 : 1 . 0 m L /m i n ;紫外 检测器 :
0
.
0 4 A U F S ;检测波长 : 2 4 0 n m 。
根据标样的保留时间进行定性 ,按 峰面
积计算组分的相对含量 。
3 结果与讨论
3
.
1 杜仲叶中氯原酸的提取工艺
3
.
1
.
1 浸提溶剂的选择 : 在其它条件一致的
情况下 ,研究不 同溶剂对氯原酸浸出量的影
响 。 发现 , 随着乙醇浓度的增加 ,氯原酸的浸
出量下降 。 低浓度及高浓度 甲醇溶液均不利
于氯原酸的浸提 , 以 6 0 %的 甲醇最佳 。 而水
的提 取效果最好 , 这是 由于绿原酸具 有竣基
及多经基结构 , 水溶性较好 , 且以水作溶剂浸
提 , 脂溶性成分溶出少 , 成本低 ,安全无毒 。
3
.
1
.
2 浸提条件的选择 : 温度 : 由实验可知 ,
浸提温度为 4 0 ℃ 时 , 对氯原酸的提取效果最
好 。 随着温度的升高 , 由于氯原酸的邻苯二酚
结构不稳定 ,高温加热易氧化分解 ,浸提液 中
氯原酸的含量反而下降 。
浸提次数 : 用水浸提杜仲叶粉末 4 次后 ,
氯原酸的溶出量无明显增加 。
料液 比 : 氯原酸的浸提效果随溶剂用量
的增加而增强 。 当液料比大于 6 时 ,氯原酸的
浸出量增加不明显 。
浸提 时间 : 当浸提时 间为 50 m in 时 , 氯
A d d r e s s
:
Q i X i
a n g y a n g , D e p a r tm e n t o f F o o d S e i e n e e s
,
H u a z h o n g A g r i e u t u r a l U n i v e r s i t y
,
W u h a n
戚 向阳 博士学位 , 主要从事天然产物化学 与保健 功能的研究 ,主要参与 了农业部八 . 五重点课题 《茶儿茶素等有效成分分 离 、 应 用及新 型茶加工技术 》 、 省科技攻关项 目《杜仲有效成分研究及壮仲粉 产品开发 》、 市科委项 目《姜黄综合利 用生 产技术研究 》及省 自然 基金课题等多项研究 ,其 中一项获农业部科 技进步二等 奖 , 一项通过省科 委鉴定 , 已在核 心期刊上发表
多篇 系列 文章 。
《中草 药 》 1 9 9 8 年第 29 卷第 1 期 · 7 4 1 -
原酸的溶出量最高 , 若再延长浸提时间 , 浸提
液中氯原酸的含量下降 。
在以上单 因子试验 的基础 上 , 对水溶液
浸提 的 4 个参数 : 浸提温度 、 浸提时间 、 浸提
次数及料液 比进行 L 1 6 ( 4 5 ) 正交试验 , 结果可
知 : 浸提 时间对氯原酸提取效果 的影响达到
极显著水平 , 浸提时间的延长不利于氯原酸
的提取 。 浸提温度及浸提次数的影 响也达到
显著水平 ,随着浸提次数的增加 , 氯原酸的溶
出量增多 。高温加热不利于绿原酸的浸提 , 以
4 0 ℃最佳 。 料液 比各水平差异不大 , 对提取
没有显著性影响 。根据试验结果 , 可知最佳浸
提条件为 : 用 6 倍于杜仲叶量 的水 , 在 4 0 ` C
温度下浸提 4 次 , 每次 30 m in 。 按上述条件
重复 3 次试验 , 杜仲叶氯原酸的平均浸出率
为 ( 9 4 . 1 1士 0 . 5 3 ) % 。
3
.
2 杜仲叶氯原酸提取物 的分离 : 杜仲叶浸
提液 中除含氯原酸外 ,还含有大量的蛋 白质 、
揉质 、 多糖等多种杂质 ,需对其精制以获得高
含量的氯原酸提取物 。 本试验根据氯原酸的
结构特点及与杂质在极性上 的差异 , 采用吸
附树脂对样品进行分离纯化 。 选用 X 型树脂
对浸提液进行纯化 。 由于氯原酸具有邻苯二
酚及竣基结构 , 常 以盐的形式存在于植物体
中 ,不易被吸附树脂吸附 ,且氯原酸的稳定性
及存在状态同溶液的 p H 值有关 。 为此 ,研究
了 p H 值对树脂 吸附氯原酸效果 的影响 。 结
果表 明 ,树脂 对氯原酸的 吸附效果 随 p H 值
的 增 大 而 降 低 , p H I 时 树 脂 吸 附 率 为
9 7
.
8%
,而 p H 6 时吸附率为 0 。
根据 以上结果 , 将杜仲 叶水浸提液浓缩
后加酸酸化 , 用 X 一型 吸附树脂 吸附 , 依次用
水及不 同浓度的乙醇溶液进行洗 脱 , 收集各
部分洗脱液 。 由 H P L C 分析结果可知 , 抓原
酸存在于 10 % 乙醇洗脱液 中 。
按上述分离纯化的条件平行做 3 次 , 杜
仲叶氯原酸提取物的平均得率及纯度分别为
( 4
.
1 1士 0 . 1 1 ) % , ( 2 3 . 7 3士 0 . 5 5 ) % 。
4 结论
杜仲叶户 氯原酸 的最佳提取条件为 : 用
6 倍于杜仲叶重量的水于 40 C温度下浸提 4
次 , 每次 30 m in , 其平 均浸出率为 ( 9或 n 士
0
.
5 3 ) %
。 由于氯原酸的邻苯二酚结构不稳
定 , 易氧化分解 ,高温及长时间加热不利于氯
原酸的提取 。
杜 仲叶水 浸提 液采用 p H 一 1 的酸性 吸
附 , 水及不同浓度的乙醇溶液进行洗脱 ,收集
含氯原酸的洗脱液 , 减压浓缩并冷冻干燥 ,得
棕黄色粉末状杜仲叶氯原 酸提取物 ,其得率
及 纯 度 分 别 为 ( 4 . 1 1 士 0 . 1 1 ) % ( n = 3 ) ,
( 2 3
.
7 3士 0 . 5 5 )% ( n = 3 ) 。
参 考 文 献
1 张康健 ,等 . 西北林学院学报 , 1 9 9 6 ; 1 1 ( 2 ) : 4 2
2 肖宗厚主编 . 中药化学 . 上海 : 上海科学 出版社 , 19 87 :
3 9 6
3 阎东海 . 中国中药杂志 , 1 9 9 4 ; 1 9 ( 9 ) : 5 4 5
4 李 定 ,等 . 中药通报 , 1 9 8 5 ; 1 0 ( 5 ) : 2 2 3
5 高文 岚 . 沈 阳药学 院学报 , 1 98 9 ; 7 6 ( 2 ) : 9 9
6 H e r n a n d e z
,
T
, e t a l
.
J A g r i e F o o d C h e m
,
1 9 9 1 ; 3 9 ( 6 )
:
1 1 2 0
7 S o d in i
,
G
, e t a l
.
J A g
r i e F o o d C h e m
, 19 77 ; 2 5 ( 4 )
:
8 2
8 W i
n t e r , M
.
J C h
r o m a t o g r
, 1 98 4 ; 3 15 : 2 4 3
9 L y o n
,
G D
,
P o t a t o R e
s , 1 9 84 ; 2 7 ( 3 )
: 2 9 1
1 0 林启 寿编 . 中草药成 分化学 (第一 版 ) . 北京 : 科 学出
版社 , 1 9 7 7 : 1 4 5
( 1 9 9 7
一
0 9
一
1 8 收稿 )
中国科学技术发展基金会药学发展基金委员会
药学发展基金设立地奥药学科技奖
一九九八年 六月二十三 日 ,药学发展基金委员 会在北 京人民大会堂举行 了由地奥 制药公 司捐赠人 民币
10 万元 的仪式 ,政协副主度卢嘉锡院士 、 国家药 品监 督管理局郑筱英局长 、 总后卫生 部李超林副部长 、 中国
科协常委 、 中国科学技术发展基金会高潮 理事长等领导参加 捐赠仪式并讲话 。 马剑文主任委员代表药学发展
基金委员会接受捐赠 。 (奖励办法 略 )欢迎推荐候选人 , 推荐函寄 :北京 丰台西路 17 号中国科学技术发展 基金
会药学发展基金委员会 吕国持 、 刘方 。 邮编 : 1 0 0 0 7 1 电话 : 0 1 0一 6 3 8 4 5 4 1 9 , 6 3 8 4 1 2 0 1
一
7 4 2
.