全 文 ：不同品种 、不同产地叶下珠属植物
在体外细胞培养中抗 作用的研究
广州中医药大学热带医学研究所 陈征途
辛
朱 宇同
李凤仙 邓文娣
郭兴伯 王新华
叶下珠属为大戟科 阮 中的一个大
属 , 在全球约有 种 , 而我国已发现有 余种 。
! 等曾对 种澳大利亚的叶下珠属植物抗乙型
肝炎病毒 作用进行过研究川 。 目前我国尚未
见到对不同品种叶下珠属植物的抗 作用进行
较系统的比较研究 。 本实验对 种不同品种 、不同产
地叶下珠属植物的水提物在体外 细胞培养中
进行抗 作用的观察 。
材料与方法
药物 苦味叶下珠 尸勺 ! , ”
海南采集 、黄珠子草 尸 塔 海南采
集 、珠子草延益亚种 尸 、‘
团 , , 海南采集 、广 东产
叶下珠 尸 广东采集 、广西产叶下珠
广西 采集 、余 甘子
云南采集 、云 泰叶下珠
云南采集 、云贵叶下珠 介二 ! 才 云
南采集 、无环鸟昔 ! 湖北潜江制药厂 , 批号
。 以上 种中药均取全草 , 洗净 、打碎 后 , 浸
泡于清水中 ,置 ℃水浴 , 间隔搅拌 次川 ,
离心后 , 上清于 拌 滤膜过滤 。实验时以培养液
稀释至所需浓度 。
试剂 ! ∀# 培养液 含 胎牛血
清 、 、
, 、 一谷氨酞胺 。
用 配成 。 二甲基亚矾 如
皋市化学试剂厂 。 、 放免试剂盒 北
方免疫试剂研究所 。
! 细胞系 北京 医院病毒室转赠 。
方法
细胞培养 将长满 细胞的培养瓶用
胰蛋白酶一 ! 消化 , 弃消化液 ,
加培养液轻轻吹打 , 将细胞配制成 万个 种
于细胞培养板中 , 孔板 孔 , 孔板
孔 , 于 ℃ 培养箱内培养 , 贴壁后
用于实验 。
药物对细胞的毒性试验 种中草药水提物
用培养液分别配成多种不同的浓度 , 加于 孔细胞
板中 ,每种浓度 孔 , 孔 。 并设无药细胞对
照及阳性对照药 , 做 种浓度 。 加药后培
养 , 换加药液 , 继续培养到第 天 , 用 染
色 , 每孔 , ℃ 孵育 , 弃上清后
加 孔溶解 ,然后以波长 比色
测定 值 。
药物对 抑制试验 将 种叶下珠属植
物水提物分别用培养基配成 种浓度 , 均取无毒或
接近无毒的浓度 ,分别加于 孔板 , 孔 , 每种
浓度 孔 , 另设无药对照及阳性对照药 , 培养
于 , 培养箱内 , 每 换加原浓度药液继
续培 养 , 第 天收集培 养液 , 即进 行 和
测定 , 用 一计数器测定每孔药液 印 值 。 实
验重复 次 。
计 算 各药 物 对细 胞 生 长的 半 数毒性 浓度
。。 、药物对抗原的抑制百分率 、药物抑制抗
原的半数有效浓度 。和药物的治疗指数 。
结果与讨论
药物对 细胞的毒性作用 用 染色
法观察 。 苦味叶下珠 、黄珠子草 、
珠子草延益亚种 9.0 、广东产叶下珠 8.6 、广西产叶
下珠 6.1 、余甘子 6.。、云泰叶下珠 97 .2 、云贵叶下珠
0.6 、 A c v 1 . 8 。 云泰叶下珠毒性最小 , 云贵叶下珠毒
性最大 ,其余 6种的半数毒性剂量差别不太大 。
2
.
2 不同叶下珠属植物水提物在 2215 细胞培养中
对 H B sA g 和 H BeA g 的抑制效果 :采用的 8 种叶下
珠属植物的水提物在体外细胞培养中 , 由于 品种不
同 , 产地不同表现出对 H Bs A g 和 H Be A g 的抑制作
班 陈征途 毕业于第一军 医大学 , 现任实验师 。 曾在军事医学科学院从事神经生物学 、 ’上物化学等方面工作 , 近年来主要的研究课题为《肝癌多指标诊断 》、《抗肝炎药物的评价》等 。 先后在国内杂志上发表文章 10等奖 2 项 , 三等奖 1项 , 总后科技四等奖 l 项 , 省级科技成果奖 2 项 。
.
6 1 6
-
余篇 , 曾获得军内科技进步二
用不同 。 在浓度为 3.13 9/L 时 , 黄珠子草和广东产
叶下珠对 H BsA g 和 H Be A g 均有很好的抑制作用 ,
抑 制 率 分 别 为 67.67% 和 75 .90 % 、 6 3 . 0 3 % 和
68 .40 % ;珠子草 延益亚种对 H Bs A g 的抑制率为
57 · 17 % , 而对 H Be A g 抑制作用差 ;苦味叶下珠 、广
西产叶下珠 、余 甘子对 H Be A g 的抑制率分 别为
63 · 7 5 % 、 6 9 · l % 和 64.20% , 而对 H B sA g 的抑制率
仅为 20 % ~ 30 % 左右 。 云泰叶下珠对 H B eA g 的抑
制作用很强 ,浓度为 1.25 9 /L 时就表现出抑制率为
60 · 82 % , 对 H Bs A g 则几乎无抑制作用 。 云贵叶下珠
在 。. 5 9 /I J 时对 H B sA g 的抑制率为 70 .87 % 。
一般用 T l来评价药物临床应用前景 , T l > 2 为
有效低毒 , T l > 1 、 T l < 2 为低效有毒 , T I < l 为毒性
作 用[’] 。 黄珠子草和广东产叶下珠对 H BS A g 和
H Be A g 的 T l 均> 2 ;苦味叶下珠 、余甘子 、 广西产叶
下珠和云泰叶下珠对 H Be A g 以及珠子草延益亚种
和云贵叶下珠对 H B sA g 的 T l> 2 。 A c v 为实验的
阳性对照药 ,对两种抗原的 T l 均< 2 。
国内外已对叶下珠属植物的成分做了许多分析
研究 , 并有报道证实不同品种 、不同产地则所含成分
有许多差别 ,所表现的结果也各有差异[5, 幻 。 如本文
中云贵叶下珠和云泰叶下珠均采自于 云南元江峡谷
海拨 60o m 处 ,但在 2215 细胞培养中 , 云贵叶下珠
表现出毒性较大 , 对 H BsA g 的抑制作用好 ;而 云泰
叶下珠的毒性很小 , 对 H Be A g 抑制作用强 ,可见两
种草药虽产于一地 , 但品种不同表现也明 显不同 。
致谢 :本研究承郑孙文淑基金会赞助 , 特
止匕谢忱 。
参 考 文 献
z 金存礼 . 植物分类学报 , 1 9 5 1 , 1 9 ( 3 ) : 3 4 5
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1 9 8 7
,
8 4 ( l )
:
2 7 4
4 范 涛 , 等 . 中华实验和临床病毒学杂志 , 1 9 96 , l 0( 1 ) :
2 7
5 方 雷 , 等 . 国外医药一植物药分册 , 19 92 , 7 ( 6) : 2 49
6 陈压西 , 等 . 巾国巾西医结合杂志 , 19 95 , 1 5 ( 4 ) : 2 25
( 1 9 9 7
一
0 5
一
2 3 收稿)
(上接第 60 3 页)
的色谱图 , 以峰面积为纵坐标 , 浓度为横坐标进行线
性回归 。 得回归方程 :A 一 4 .06 x 10 6C 一 2 .83 X I护 , r
一 0 .99 99 。
4 加样回收实验
精密吸取上述各稀释标准液 5 m lJ与等量的样
品注射液混合均匀 , 依次按样品液 、标准液及混合液
直接进样分析测定 ,进样量为 10 m L , 计算回收率为
99.08% , R S D 为 1.43% (n一 5 ) 。
5 样品测定
取川芍嚓的标准对照液 (0.06 m g/m l )与样品
液各 10 m L ,依上述测定方法进样标定 , 测得样品血
立通注射液中川芍嗓含量 , 测 3 次 , 得平均含量为
7.71 拌g / m L , R S D 为 0.69% 。
6 小结
6.1 本法一次色谱分析在 10 m in 内完成 , 测得峰
保留时间在 8.5 m in 左右 。 本品甲醇水溶液比较稳
定 , 一周内测定含量几乎无变化 。
6
.
2 采用此法进行含量测定 , 结果表明操作方法较
简单 , 灵敏度高 , 结果准确 ,适于该制剂的质量控制 。
( 1 9 9 6
一
2 1
一
2 2 收稿 )
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《中草药 》1 9 9 7 年第 28 卷第 10 期 · 6 1 7 ·