全 文 ：A S t u d y o n R o o t i n g o f C u t i n g s o f M ia r e Y e w
( T a x u s c h i n e n s i s v a r
.
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l e 、 t r o o t in g r a t e w a s o b t a i n e d f r o m t h e a n n o t i n o u s t il l e r i n g s h o o t s o f 7 ,a x u s c h i n e n s i s v a r
.
m a i即 i , b u t t h i s k i n d o f s h o o t w a s t o o s e a n t y t o b e u s e d a s a s o u r e e o f e u t t i n g fo r r a P i d P r o p a g a t io n . ( ) n t h e
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, n u m e r o u s a n n o t i n o u s l a t e r a l s h o o t s w e r e e a s y t o o b t a i n
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r e g u l a t o r s o n t h e r o o t i n g o f a n n o t in o u s l a t e r a l s h o o t s w e r e s t u d ie d
.
I t w a s f o u n d t h a t m o r e t h a n
6 0%
o
f
r o o t in g e t l t t in g , e o ;」ld b e o b t a i n e d o n t h e lo a m , v e r e u l it e = 1 , 1 e u t t i n g b e d s u p p l e m e n t e d w i t h 5 0
m g /L N A A + 5 0 m g / I
J
I B A t
r e a t e d f
o r
8 h
o u r s
.
雪莲花组织培养的初步研究△
中国科学院植物研究所 (北京 1 0 0 0 9 3 ) 赵德修 牵
搞 要 雪莲花种子在 1/ 2M S 培养基上萌发出幼苗 。 以不同条件研究了雪莲花愈伤组织诱导及
培养 。 应用高压液相色谱法对培养物中的具有抗癌作用的黄酮 Jac eo is id n 进行了分析 。
关键词 雪莲花 组织培养 黄酮 抗癌活性
雪莲 花 S a u s s u er a i n v o l u c ar t a K a r . e t
iK
r
. , 又名雪莲 , 是我国三类珍稀植物 , 民间
用于治疗风湿性关节炎 ,妇科病等 。 经药理实
验证明 ,雪莲具有抗癌 、扩张血管 、 降血压 、 抗
疲劳等作用 。 其中雪莲中黄酮 jac eo s id n 对
治疗腹水型肿瘤具有显著疗效 〔 , · “ 〕 。 由于雪莲
生长环境特异 , 人工栽培困难 ,致使 目前雪莲
资源日益匾乏 ,雪莲物种濒临灭绝 。 因此 ,试
图通过雪莲组织细胞培养 ,来探索生产有效
成分的可能性 。 本实验室以不同条件研究了
雪莲愈伤组织诱导及培养 ,并以高压液相色
谱法测定培养物的有效成分 。
1 材料与方法
雪莲种子经 7 0 %酒精消毒 1 0 5 ~ 1 m i n ,
0
.
1%升汞消毒 4 一 1 5 m i n , 无菌水洗 3 ~ 4
次 ,每次 2一 3 m i n , 消毒后接种于 1 / ZM S 无
激素培养基上 , 一周后萌发出幼苗 。 用得到的
幼苗在 M S 附加不同浓度的激素 ,蔗糖 3 % 、
琼脂 0 . 6% 、 p H 值 5 . 8 的培养基上作愈伤组
织诱导 。 用 M S , A G 一 7 , B 。 3 种基本培养基作
愈伤组织培养比较实验 。培养条件 : 50 m I J 三
角瓶内含 20 m L 固体培养基 ,每瓶接种量为
0
.
2士 0 . 0 5 9 鲜重 , 温度 为 25 ℃ 士 1℃ , 每隔
Z o d 继代一次 。
2 结果与讨论
2
.
1 雪莲种子萌发及愈伤组织诱导 :雪莲种
子在 1 2/ M S 无激素培养基上萌发 ,酒精消毒
时间 4 0一 5 0 5 , 升汞消毒为 7一 8 m i n 为宜 。
雪莲幼苗作外植体 ,在 M S 附加 B A 0 . 2 m g /
L
,
N A A 2 m g / L 诱导率最高 。 结果 (表 1) 表
明 : 愈伤组织在 M S + B A 0 . 2 m g / L + N A A Z
m g L/ 的培养基上生长 良好 。
2
.
2 不同基本培养基及 N A A 浓度对愈伤
组织生长的影 响 : 愈伤组 织同上 , 分别选用
M S
,
A G
一
7 , B
5 3 种基本培养基 , 并各以 B A
0
.
2 与 N A A 0 . 5 , 1 . 0 , 1 . 5 , 2 ` o 组成 4 种组
, Ad d r e s s : Z h a o D e x i u
,
I n s t i t u t e (〕门污o t a n y , C h 一n o s o A e a d e m y o f S e ie n e e 、 , B e ij i n g
心国家 自然科学基金和国家教委回国留学 人员掸优支持草金 资助项日唐定台研究员参加 部分工作
.
6 8 2
·
合 , 每组接种 8 瓶 ,每瓶 (5 o m L 三角瓶内装
2 0 m L 培养基 )接种愈 伤组织鲜重 0 . 25 士
0
.
2 9
,该愈伤组织在 M S , A G 一 7 , B 。 3 种基本
培养基上作培养比较实验 , 结果 (表 2) 表明 ,
M S + B A 0
.
2 m g / I
J
+ N A A 2 m g l/
J 的培养
基对雪莲愈伤组织生长少为有利 ,但与 N A A
1
·
0 m g / L 时相比其细胞增长量不明显 。
表 1 不同浓度的 B A 、 N A A 对雪莲愈伤组
织诱导率的影响
表 4 光 、暗培养对愈伤组织生长的影响 ( 20 d)
细胞增长量 ( g /瓶 ) 细胞增长率 (% )
鲜重 干重 鲜重 干重
光 3 . 6 7 0 . 1 8 1 7 3 5 1 7 3 6 . 7
暗 2 . 4 8 0 . 1 3 1 1 4 0 1 1 38
培养基 外植体数 (块 )成愈数 (块 )诱导率 ( % )
( m g八 ) 叶 茎 叶 茎 叶 茎
B A O
.
2 + N A A O
.
5 2 4 30 12 1 7 5 0 5 7
B A O
.
2十 N A A I . 0 2 0 25 1 1 2 0 5 5 8 0
M S B A o
.
2 + N A A z
.
5 2 0 2 5 1 0 2 2 5 0 8 8
B A O
.
2 + N A A 2
.
0 18 20 10 2 0 5 6 1 0 0
表 2 各荃本培养荃及 N A A 浓度对愈伤组
织生长的影响
激 素 浓 度 愈伤组摹鑫鉴霭蒙、 /瓶 )
( m g / L ) M S A G
一
7 B 。
N A A 0
.
5 3
,
4 2 2
.
3 2 2
.
7 0
N A A 1
.
0 3
.
6 8 2
.
6 8 3
.
1 4
3 A o
·
2 N A A 一 5 3 . 6 6 2 . 7 5 3 · 0 1
N A A 2
.
0 3
.
7 0 2
.
6 4 2
.
8 9
.2 .5 1 样品提取 : 10 9 干重细胞粉碎 ,按文
献〔3 〕方法提取总黄酮 。
2
.
5
.
Z H P L C 分 离 : 仪器 : W a t e r s 2 4 4 型 ,
柱 : B C C I 。 ( 0 . 4 x 3 0 。 m ) ; 流 动 相 : 9 0%
C H
3
O H
,
1 0% H
Z
O ;流速 : 0 . 7 m I J /m i n ;检测
器 : U V 3 6 5 n m x 0 . i A u F s ;标准样品 ; ja e e o -
s
id n( 4’ 5 , 7一三经基一 3 , 6一二甲氧基黄酮 。 以外
标法 ,用峰高计算含量 。
用 H P L C ( 图 1) 定量定性分析 ,其结果
表明 , 培养物中含有的抗癌有效成分 iac eo -
s id in 的含量为 .0 04 m g / g 干重细胞 ,是天然
雪莲原植物含量的 25 % 〔 3〕 。 不同的培养途径
不仅影响细胞生长 ,而且对代谢产物的生物
合成途径有直接的影响 〔 4〕 。 雪莲培养物中有
效成分黄酮的含量比原植物偏低 , 可能是培
养条件或其它因素所致 ,有待继续研究 。
2
.
3
.
2 不同浓度的蔗糖对愈伤组织生长 的
影响 : 用 M S 培养基 ,调查不同浓度的蔗糖对
愈伤组织生长 的影响 , 其结果从表 3 中可以
看出 , 2 ~ 4 9 / L 的蔗糖浓度对愈伤组织生长
较为有利 。
表 3 不同浓度的蔗箱对愈伤组织生长的影
响 ( 2 0 d )
蔗糖浓度 细胞增长量 ( g /瓶 ) 细胞增长率 (% )
(创L ) 鲜重 干重 鲜重 干重
1 1
.
4 1 0
.
0 6 2 6 0 8
.
2 了6 0
2 2
.
7 0
.
1 2 1 2 0 0 1 2 6 2
4 2
.
5 0
.
1 8 1 1 5 0 1 1 5 0
6 1
.
7 3 0
,
1 7 7 65 76 7
.
3
图 1 H P L C 测定图谱
A
一标准品 B一培养细胞样品
2
.
4 光 、 暗培养条件对愈伤组织生长的影
响 : 光对愈伤组织生长的影响是一个重要的
因子 ,通过我们的调查发现 (表 4 ) : 光照培养
对愈伤组织生长的影响大大有利于暗培养 。
2
,
5 培 养物 中抗癌黄酮 jac eo is id n 的含量
测定
《中草药》 1 9 9 7 年第 2 8 卷第 1 1 期
致谢 : 标 准品 4’ , 5 , 7一三狂基 一 3 , 6一二 甲
氧基黄酮 ( ja e e o s id i n ) 是兰 州大学贾忠建教
授提供 , H P L C 工作是 中国林业科学研 究院
王文芝所长代做 ,一并致谢 。
参 考 文 献
l 刘力生 ,等 . 兰州大学学报 ( 自然科学版 ) 19 85 , 21 (4 ) : 80
.
6 8 3
·
韩书亮 , 等 . 癌变 、 崎变 , 突变 , 1 9 9 5 , 7 ( 2 ) : 5 0
贾忠建 , 等 . 高等学校化学学报 , 1 9 83 , 4( 5) : 5 81
胡之欲 , 等 . 植物学报 , 19 9 5 , 3 7 ( 6 ) : 4 1 7
( 1 9 9 6
一 10
一
0 8 收稿
1 9 9 7
一
0 3 一 2 0 修 回 )
I n i t i a l S t u d i e s o n T i s s u e C u l t u r e o f S n o w L o t u s ( S a u s s u r 眼a in v o l u c r a t a )
Z h a o D e x u
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e d lin g s w e r e g e r m i n a t e d f r o m s e e d s o f S a u s u er a i 凡vo l u
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fo r t h e in d u e e m e n t o f e a l li a n d t is , u e e u l t u r e i n 5
. ￡n v o l u c ar t a w e r e i n v e s t ig a t e d . A s e n s i t iv e a n d r a p i d h i g h -
p e r f o r m a n e e li q u id e h r o m a t o g r a p h i e m e t h o d h a s b e e n u s e d fo r d e t e e t in g t h e j
a e e o s id i
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a n t i e a n e e r 几e t iv i-
t y
·
斓和柿对灵芝菌丝生长的影响
中南民族学院 (武汉 43 0 0 74) 何冬兰 修 温川蓉
摘 耍 L a( N O : ) 3和 C e( N O 3儿在浓度不同时对灵芝菌丝的生长及其培养液中的残糖量的影响
不同 。 2 m m ol I/ , L a a + 和 C ae + 能抑制灵芝菌丝的生长 , 抑制率分别为 32 . 58 写和 42 . 76 % ;低浓度
( ( 1 m m ol I/
碑
)的 L a 十和 C e 。十能促进菌丝生长 , 以 。 . 5 m m ol / L L a 3十和 C e抖的促进率最高 ,分别达
到 35 . 21 %和 57 . 01 % , 且随浓度的降低这种促进作用逐渐降低 。 菌丝生长量与培养液中的残糖量
没有明显的相关 , 只有生长量最大的 0 . 5 m m ol / L 的 aL 3+ 和 C e 3十的培养液中的残糖量比对照低 ,
其余皆比对照高 。
关性词 斓 钵 灵芝 生长量 残糖量
稀土元素由于其特殊的物理化学性质 ,
在农业 、工业 、 医药等行业应用广泛 。 稀土元
素对动植物影响的研究较多 〔, 一 3〕 , 在食用菌
生产中的应用也日趋广泛〔`一 ” 。 灵芝作为一
种名贵的中草药 , 除了其子实体供药用外 , 目
前已开始探索深层发酵法培养菌丝 〔幻 。 为此 ,
本实验拟 添 加 不 同浓度的 L a ( N O , ) , 、 C e
( N O
,
)
3 培养灵芝菌丝 ,寻求最佳培养条件 。
1 材料和方法
1
.
1 菌 种 : 红 芝 G an od e , a l cu id u m
( L e y s s
.
e x F r
.
) K a r s t
. 由湖北省农科院食用
菌种中心提供 。
1
.
2 培养条件
1
.
2
.
1 菌种培养基成分 ( g /L ) : 去皮马铃薯
2 0 0 (水 煮 3 0 m i n 后 取 滤 液 ) , 蛋 白陈 i ,
K H
Z
P O
; 1
,
M g SO
4 · 7 H ZO 0
.
5
,
V B
, 0
.
0 1 , 自
然 p H , 6 8 . 6一 7 8 . 4 k P a 压力下灭菌 3 0 m i n 。
1
.
2
.
2
. 发酵培养液成分 ( g / L :) 蔗糖 40 , 豆
饼粉 2 0 , K H ZP O ; 1 . 5 , ( N H 4 ) 2 5 0 ; 0 . 7 5 , M g -
5 0
; · 7H
Z
O 0
.
5
,
C a C O
3 1
, 灭菌前调 p H 至
6
.
5
,
6 8
.
6一 7 8 . 4 k P a 压力下灭菌 3 0 m i n ,分
别加入经滤除菌的 0 . 1 m ol / L 稀土元素溶液
使稀土元素浓度 ( m m ol / L )分别为 2 、 1 、 .0 5 、
0
.
2 5
、
o
,
2 2 5
、
0
.
0 6 2 5 ,不加稀土者为对照 。
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冬二
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n g la n
,
S o u t h
一
C
e n t r a l
事务委员会资助项目 ) 、 固酶法生产 L 一氨基!用味精度液生产酵母单细胞蛋白 ( 本院自然冬篇已被有关刊物录用待发表 。
C
o ll e g e o f N a t io n a li t i e s
,
W
u h a n
。 近几年来 , 作者在 人绒毛膜 促性肠工艺研究 ( 与企业联合攻关项目 ) 、稀土对生物的生理生化效应及其机理 、利资助后两项课题 )等项 目行 r 一些探索性研究 。 已发表学术论文 n 篇 , 另有
6 8 4