全 文 ：大黄素和大黄多糖对小鼠脾淋巴细胞内
游离钙浓度的影响△
夭津医学院药理教研室 (30 。。07 )靳珠华. 林秀珍 马德禄
摘要 应用最新一代钙离子荧光指示剂F r ua 一2/ AM 测定小鼠脾淋巴细胞内游离钙浓 度 , 探讨大
黄有效成分蕙醒类中大黄素和大黄多搪对脾淋巴细胞内游离钙的影响 。 实验表 明 : 大黄 素 ( 终
浓度 18 . 5卜m o l/ L ) 对淋巴细胞外钙内流有明显促进作用 ( 尸 < 0 . 01 ) ; 大黄多糖则有抑制内钙
释放和外钙内流作用 ( 尸 < 。 . 01 ) , 且抑制程度与剂量相关 。 本文为大黄双向调节作用提供理论
依据 。
关健词 F u ar 一2 / A M 大黄素 大黄多糖 淋巴细胞 C a , +
大黄有多种有效成分 , 主要有葱酿类 、 多糖 、 蹂质等 。 这些成分除有各自独特的药理作
用外 , 彼此之间尚有许多相互协同和拮抗的药理作用〔1〕 , 其作用机理尚处研究中 。
钙离子对细胞有极其重要的生理作用 , 如肌肉收缩 、 细胞分泌 、 细胞增殖等 。 细胞内游
离钙浓度 ( 〔C a “ + 〕、 ) 的高低直接影响着细胞功能 〔 2〕 。 本实验应用 F ur a 一 2 / A M就 蕙 酿 类中
大黄素和大黄多糖对小鼠淋巴细胞内〔C a “ + 〕;的影响进行研究 , 探讨大黄素和多糖 对 机 体免
疫功能的作用 , 为大黄的双向调节作用提供理论依据 。
1 材料与方法
1
.
1 药 品与试剂 : F ur a 一2 / A M : 中国医学科学院药物研究所提供 。 用二甲基亚枫 ( D M S O )
配成 l m m ol / L 后 , 分装为20 妇 /只于 一 20 ℃存贮备用 。
大黄素 : is g m a公司出品 。 大黄多糖 : 天津药物研究院植化室提供 。
P R M I 16 4 0培养液 : 天津 医学院内科基础教研室配制 。
其它试剂均市售分析纯 。
1
.
2 动物 : 昆明种小 鼠雌雄不限 , 体重 20 士 2 . 29 , 一购 自天津药物研究院动物室 。
1
.
3 方法
1
.
3
.
1 淋巴细胞悬液的制备 : 将小鼠断脊髓处死 , 取 出脾脏放入含适量 冷 H a n k 尹 s液 的小
平皿内 , 将脾脏中间剪断 , 再用弯针头切赶脾细胞至 H an k 尹 s液中 。 用吸管反复轻轻 吹吸以
冲散细胞 , 经 2 0 目过筛后 , 将细胞悬液离心 ( 5 。。 r / m in x s ) 弃去上清液 , 沉淀用 H a n k ` s
液反复洗涤 2次 。
1
.
3
.
2 F ur a一 / A M 负载 : 将离心沉淀的淋巴细胞用 P R M I 1 64 0培 养液 制 成 l一 2 x l 。 一 7 /
m l细胞悬液 , 加入 F ur a 一 2 / A M ( 终浓度 5卜m ol / m l) 和牛血清蛋白 ( l m g / m l ) , 置三角
瓶内于超级恒温 ( 37 ℃ ) 水浴中迥旋振荡 , 温孵 30 m in 后离 心 ( 5 0 0 r / m in X S ) , 沉 淀用
H a n k 声 s液洗涤 2次 , 将脾淋 巴细胞悬浮在 2 m l H a n k 尹 : 液中待用 。
1
.
3
.
3 荧光测定 : 测定时或加药后均用吸管吹吸细胞悬液数次 , 以使细胞分布 均 匀 。 加药
后除大黄素需平衡 1 0m i n 外 ,其 它均至少平衡 3 05 。 本实验采用 日本岛津 R F 一 5 10 型荧光分光光
度计 (附岛津 T B一 85 恒温水浴 ) 。 发射波长为 4 9 0n m , 通过快速转换激发 波 长 ( 4一 s6 ) 记录
3 5 0 / 3 8 0 n m 的荧光比率 , 用公式 〔 3〕计算出细胞内游离钙水平 。
. A dd r e s s : J i n Z h u h u a
,
D o p a r t m e n t o f p h a r m a c o l o g y
,
T i a n j i n M
e
d i e a l c
o l l e g e
,
T i a n j i n
△国家自然科学基金资助课题
《中草药》 1 9 9 4年第2 5卷第 8 期 · 4 1 3 .
1
.
4 统计分析 : 各组数据以均值士标准差 ( 万 士 s D )表示 , 组间差异采用 t检验 。
2 结果
2
.
1 C a cl
Z 、 K CI 对脾淋巴细胞 〔C a 乞 十〕 ,的影响 : 在脾细胞悬液内预先 加入 l m m ol / L E G卜
T A 赘合细胞外钙 , 以排除细胞外微量钙的影响 , 此时测得静息状态淋 巴 细胞内〔C a , ` 〕 i为
e 3
.
3 5士 1 4 . 9 6 n m o l / L ( n = 8 ) 。 依次向细胞悬液内 加入 C a C I: ( 2 m m o l / L ) , K e l ( 1 2 0
m m o l/ L )
, 分别测得细胞内〔C a Z十 〕、均较静息时有显著增加 ( 尸 < 0 . 0 1 ) , 此 为对照 组值 ,
C a C I
: 和 K C I相比无统计学意义 ( 表 1 ) 。
2
.
2 大黄素对淋 巴细胞内 〔C a Z+ 〕的影响 : 大黄素 (终浓度 18 . 5卜m ol / L )使淋巴细胞在依次加
入与对照组相同剂量 C a 1C 2和 K C I时 , 细胞内游离钙水平均明显高于对照 组 (尸< 0 . 0 1 ) (表 1) 。
表 1 大黄家对小鼠淋巴细胞内游离钙浓度的影晌 ( 万 士 s D , n = 8 )
组别 静息状态
H
: O
( l m m o l / L E G T A )
淋巴细胞内游离钙浓度 i(l m o l/ L )
大黄素 C a C I :
了1 8 . 5林m o l / L ) , Zm m o l / L )
K C I
( 1 2 0 m m
o l / L )
对照组
给药组
6 3
。
3 8土 14 。 9 6 7 7 。 2 9 士 1 3 。 6 8 12 8。 7 6 士 1 7 。 5 7
6 7
。
6 7士 1 3 。 7 2 8 0 。 8 5士 3 9。 3 7
1 3 9
。
1 2 士 2 1。 4 6 . 今 *
2 1 1
。
0 1 士 4 1 。 3 9… 。吞。 2 1 3。 6 5士 3 7 。 2 8
. * .
. * . 乙心八
与静息状态比较 中尸> 0 . 05 . 今 . 尸 < 。。 01 , 与对照组比较 。` 。尸 < 0 . 01 ( 下同 )
2
.
3 不同剂量大黄多糖对淋巴细胞内〔C a , + 〕*影响 : 大黄多糖 ( 终浓 度 分别 为 0 . 1 , 0 . 2 ,
o
.
3m g /m l) 均使淋巴细胞在加入 C a 1C 2和 K C I时 , 游离钙水平较对照组有 显 著 降 低 ( 尸 <
0
.
0 1 )
, 且抑制程度与多糖剂量相关 ( 表 2 ) 。
表 2 大黄多蛤对小鼠脾淋巴细胞内游离钙浓度的影响 ( 王士 S D , n = 8 )
淋巴细胞内游离钙浓度 ( n m o l/ L )
组别 静息状态
H t o
( l m m
o l / L E G T A )
大黄多糖 C a C I *
( Zm m o l / L )
K C I
、
12 0 m m
o l / L )
对照组 6 0 。 3 5士 11 . 2 6
给药组 6 4 。 2 1士 14 . 2通
6 7
。 9 6士 2 0 。 9 1
( 0
5 5
( 0
3 9
。
l m g / m D。
9 0 士 1 1 。 4 1
1 4 5
。
3 0士 1 9 . 0 7 . * * 1 37 . 5 4士 1 4 。 3 2 . , 今
1 0 4
。 6 6士 22 . 6 2中 卒 甲灿八 10 0 . 1 7 士 2 1 。 4 5 , 甲 中乃M
给药组 6 3 . 7 3 士一8 . 6 6
给药组 6 2。 10 士 1 7 . 37 髯
。
Zm g / m l)
。
3 0 士 1 9 。 6 9
.
3m g / m l)
。
2 4士 1 7 。 8 1
7 9
。
5 5 士 2 9 . 0 6M ` 7 5
.
9 1土 2 3 。 8 1乙合盛
* * .
5 1
.
9 6士 2 6 . 1 1。吞△ 5 1 . 2 4士 2 5 . 7 5劫八
3 讨论
大黄对机体的调节作用是一个复杂的问题 , 其作用因机体状况及药量多寡而异〔们 。 本实
验观察大黄的不同有效成分大黄素和多糖对同一组织 细胞— 脾淋巴细胞的作用完全不同 。结果显示 : 大黄素对静息状态 ( 1 m m ol / L EG T A存在 )脾淋巴细胞内〔C a , 斗〕;影响不明显 ,
而在加入 C a C 12和 K C I后 , 胞内游离钙水平均比对照组有明显增加 ( 尸 < 0 . 0 1 ) , 表 明大黄
素对淋巴细胞内钙释放影响不大 , 而对外钙内流有促进作用 。 大黄多 糖小 剂量 ( o . l m g /
m l ) 对静息期淋巴细胞内 〔C a Z勺 ,无 明显作用 , 增加剂量 ( 0 . 2 , 。 . 3 m g / m l ) 可 使 胞 内游
离钙随剂量增加而下降 ( 尸> 。 . 05 或尸< 0 . 01 ) , 提示大剂量多糖可能有抑 制 内钙 释 放作
用 。 当分别依次加入 C a C I :和 K C I后 , 细胞内游离钙浓度较对照组均有显著降低 , 表明多糖
还具有抑制外钙内流作用 , 且抑制效应与剂量相关 。
4 14
·
律草止了写作用的实验研究
开封医专药理教研室( 4 5 71 0 0) 巴单屏 许启 泰 雷玉河 杜钢军
茹草( 别名五爪龙 , 拉拉藤等 , 开封地区称之 药后 l h , 每只小鼠均灌甲墓橙溶液 o . Zm l , 2 0m i n
为涩泣秧 ) 为桑科植物 , 主要药理成分为律草酮 , 后取胃剪开 , 蒸馏水洗胃 , 分离上清液 , 用 72 型光
有抑菌 、 抗病毒作用 , 临床上主妥用于结核病 , 气 电分光光度计比色 , 记录各组小鼠胃液中甲基橙的
管炎等病的治疗 。 当地民间用其治疗性畜腹泻和水 吸 收度 , 计算各 组小鼠 胃 残留率分别为 ( 下士
煎剂饱脚治疗小儿腹泻 ,疗效甚住 , 目前临床未见报 s D ) : 空 白对照组 46 . 71 士 6 . 23 , 阳性对照组 63 . 7
道 ,因此 ,我们根据腹泻的发病机理作了动物实验 。 士 71 . 8 2, 药物组 67 . 8士 n . 2 , 经统计学处理 , 药
1 对小鼠腹闪的影响 物组与空白组比尸 < 0 . 05 , 差异显著 。
取健康昆明种小鼠禁食 12 h , 药物组 20 只灌胃 4 对家兔离休肠平滑肌的形晌
蓬草煎剂 Zg/ k g , 阳性对照组20 只灌 胃易蒙停 Zm g 常规法制备家兔离体十二指肠数段 , 洗净放入
k/ g
,空白对照组 20 只灌胃生理盐水即 m l / k g , l h后 50 m l 37 O C恒温台氏液浴槽中 , 用 L N s 一 ZA型二道
各种组小鼠均灌胃蓖麻油 20 m l / k g , 观察给蓖麻油 生理记录仪描记肠管活动情况。 观察加入1 0 肠捧
后 h8 内各组小鼠拉稀便只数和点数分为 : 空 白对照 草煎剂 o . l m l和 1 , 1 00 0 0。乙酞胆碱。 . l m l 后 肠管
组拉稀便 14 只 , 点数 ( 妥士 s D ) 8 . 08 * 3 . 26 , 阳性 活动情况 ( 加各药前用台氏液冲洗肠管 4次 ) ,结果
对照组拉稀便 4只 , 点数 3 . 40 士 0 . 21 , 药物 组 拉稀 表明蓬草对离体肠有明显的抑制作用 , 并能对抗乙
便 7只 , 点数 4 . 30 土 0 . 24 , 经统计学处理 , 药 物 组 酞胆碱引起的离体肠 自发活动亢进的作用 , 而且作
与空白对照组比较尸 < 0 . 05 , 差异显著 , 与阳性对照 用优于阿托品 。
组比较差异不明显 。 5 对家兔致热模型的影晌
2 对小鼠小肠炭末推进率的形晌 体重 2 . 0 一 2 . sk g健康家兔 36 只 , 均分 3组 , 各
取健康小鼠禁食12 h , 药物组 12 只小鼠灌 胃蓬 组家兔均在背部皮下注射 0 . 2肠 2 , 4一二硝 基酚溶
草煎剂 Zg/ k g , 空白对照组 12 只灌胃生理盐水 20 m l 液 30 m g/ k g , l h后药物组灌胃蓬草煎剂 Zg/ k g , 空
k/ g
, 阳性对照组 12 只灌胃阿托品 s m g / k g , 30 m in 白对服组灌胃生理盐水 10 m l/ k g , 阳性对照组灌胃
后各组小鼠均灌胃5纬炭末混悬液 20 m l/ k g ,幼 m in 复方氨墓比林0 . 08 9 k/ g , 30 m in 测体温 1次 , 连 续
后处死小鼠 , 测量炭末在肠管内移动距离 , 计算各 铡 3 h, 各组平均体温为 : 空白组 40 . 53 士 0 . 15 , 阳
组小鼠的肠推进率 ( 丁 士 s D ) 分别为 : 空 白对照沮 性对照组 39 . 71 士 0 . 05 , 药物组 40 . 71 士 0 . 15 。 由结
71
.
08
士 8 . 60 , 阳性对照组 4 . 17 上 7 . 82 , 药 物 组 呆看出蓬草对家兔用 2 , 4一二硝基酚所致的发热 ,
61
.
71
士 1 0 . 8 8 。 经统计学处理药物组与空白对照组 降温作用不明显 , 查原因发现蓬草酮有二硝基酚样
比较尸 < 。 . 05 , 差异显著 。 乡卜用 , 与致热源有协同作用 , 故此无效 。
3 对小鼠胃残留率的影晌 蓬草在我国大部分地区生长普遍 , 药源充足 ,
取健康小鼠30 只 , 随机平分 3组 , 禁食 12 h , 药 采采方便 , 有待于继续研究其疗效与作用机制 , 以
物组灌胃蓬草煎剂 2g k/ g , 阳性对照组灌胃阿 托品 便开发利用 。
s m g / k g
, 空白对照组灌胃生理盐水 20 m l/ k g , 给 ( 19 9 3一 07 一 07 收稿 )
C a
: 十在体内能够促细胞的生物活性并参与补体的激活 , 体外试验表明钙有增强淋巴细胞
转化率的效能〔“ 〕 。 大黄素和多糖是中药大黄的有效成分 , 实验证明大黄素有促进淋巴细胞外
钙内流作用 , 此作用与增强淋 巴细胞免疫功能有关 , 而多糖则因抑制淋巴细胞内钙释放和外
钙内流 , 故对淋 巴细胞免疫功能有抑制作用 , 这可能是大黄双向调节作用的理论依据之一 。
参 考 文 献
1 陈琼华 。 冶金医药情报 , 1 9 9 0 , 7 ( 3 ) . 8 8
2 金有豫 . 中国药学杂志 , 19 92 , 2 7 ( 1 ) : 38
5 G r y n k i e w i e z G
,
`
e t a l
.
T h e J
, u r n a l o f
B i o l o g i c a l C h e m i
s t r y
, 19 8 5
, 2 匕O ( 6 ) : 3 4 4 0
从中草药 》 1 9 9 4年第 2叮卷第 8 期
4 张启元 。 冶金医 药情报 , 2 9 , o , 7 ( 3 ) : 10 3
5 啤清丰 , 小儿宫养及营养性疾病 . 天津 : 天津科
学技术 出版社 , 1 9 9 0 . 3 5 8
( 19 9 4
一 0 1一 0 7收稿 )
·
4 1 5
.
E f f e e t so fE m o di n an dRh u ba r bPo l y sa ceh a ri d e s
o n th e Cy to l Pa sm i eF r e e Cal ei um i n th e
S Pl e en Lym h Po cy te so f Mi e e
J i n Z h uh a u
,
L i n X i u z h e n
,
M a D e l u
E f f
e e t s o f e m
o d i n a n d
r h u b a r b p o l y s a c c h a r i d e s o n t h e e y t o p l a s m i c f r e e c a l e i u 址 i n l y m p h -
o c y t e o f m i c e w e r e s t u d i e d w i t h t h e l a t e s t g o n e r a t i o n f l u o r e s e e n t i n d i e a t o r F u r a
· 2 . R
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s h o w e d t h a t e m
o
d i n
a t a f i n
a l c o n c e n t r a t i o n o f 1 8
.
5 卜 m o l / L P r o m o t e s t h e i n f l u x o f e x t r a c e l l
-
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“ 于 o f l y 功 P h o c y t e s 。 P o l y s a e c h a r i d e s i n h i b i t t h e i n f l u x o f C a 卜 a n d t h e r e l e a s e o f C a : +
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r a e e l l u l a r s t o r e s a n d t h
e i r e f f e c t s a r e d o s o d e P e n d e n t
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.
T h i s m a y b o o ” e o f t h e t h e o r e t i c a l e v i d e n e e s o f t h o b i P h a s i e r e g u l a t i o n
e f f e c t s o f r h u b a r b
。
( o
r i g i n a l a r t i e l e o n P a g e 4 1 3 )
S t u d y o n C y t o t o x i e i t y t o M o u s e 3 C L一 8 C e l l o f F r i e n d E r y t h r o e y t e
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S h a n F e n g P i n g
,
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.
( o r i g i n a l a r t i c l e o n p a g e 4 1 7 )
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r a n s f u s i o n o f t h e a l k a l o i d s
.
C o n t r a c t i o n s o f i s o l a t e d i
n t e s t i n e s w e r e i u h i b i t e d b y
f l a v o n o i d s
。
E s s e n t i a l 0 11 5 s i g n i f i c a n t l y d e e r e a s e d t h e r a t e a n d f r e q u e n e y o f w r i t h i n g s y n d r o m e
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d b y i P a e e t i e a c i d a n d s P o n t a n e o u s l o c o m o t o r a o t i v i t i e s i n t h e m i c e w i t h t h e e x c e P t i o n
f e x c i t i n g a t l i r s t f o l lo w e d b y i n h i b i t i n g t h e i s o l a t e d i n t e s t i n e s
,
w h i c h d i
s P l a y e d
a n a l g e s i a a n d
o c e n t r a l i n h ib i t i o n t o a e e r t a i n e x t e n t
。
( o
r i g i n a l a r t i e l e o n p a g e ` 1 9 )
S t u d ie s o n In d i v id u a l B i o m a s s a n d
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e f f e c t i v e e o m P o s i t i o n o f t h e t w o w i l d s P e e i e s w e r e r e v e a l e d
.
( o
r i g i n a l a r t i e l e o n p a g e 4 2 5 )
《 中草药 》 19 9 4年第 25 卷第 8 期 · 4 4 7 ·