全 文 ：广 西 植 物 Ｇｕｉｈａｉａ　Ｓｅｐｔ．２０１３，３３ （５）：６９９－７０２　　　　　　　 ｈｔｔｐ：／／ｊｏｕｒｎａｌ．ｇｘｚｗ．ｇｘｉｂ．ｃｎ
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－３１４２．２０１３．０５．０２１
杨正坤，龙施华，周菲菲，等．矮秆大豆突变体异黄酮含量变化的研究 ［Ｊ］．广西植物，２０１３，３３ （５）：６９９－７０２
Ｙａｎｇ　ＺＫ，Ｌｏｎｇ　ＳＨ，Ｚｈｏｕ　ＦＦ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　Ｄｗａｒｆ　ｍｕｔａｎｔ　ｓｏｙｂｅａｎ［Ｊ］．Ｇｕｉｈａｉａ，２０１３，３３ （５）：６９９－７０２
矮秆大豆突变体异黄酮含量变化的研究
杨正坤，龙施华，周菲菲，郝再彬，王秀丽＊
（桂林理工大学 化学与生物工程学院，广西 桂林５４１００６）
摘　要：以大豆品种东农４２及其两个矮秆突变体 （ＨＫ８和 ＨＫ１１）为原料，采用Ｌｕｍｉｎｏｌ－Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６ 化
学发光体系的流动注射化学发光法对茎、叶和种子中的异黄酮进行检测，同时与 ＨＰＬＣ检测方法相比较。
结果表明：该方法能较简便快速地检测异黄酮含量，相对标准偏差 （ＲＳＤ）为０．６９％～２．３０％，回收率
为９５．５％～１０４．５％。该实验准确地检测出三种大豆材料中异黄酮含量；异黄酮含量与株高成正比；种子
的异黄酮含量比茎、叶的均高。
关键词：大豆异黄酮；含量；流动注射化学发光；株高
中图分类号：Ｑ９４６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－３１４２（２０１３）０５－０６９９－０４
Ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｃｈａｎｇｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ
ｄｗａｒｆ　ｍｕｔａｎｔ　ｓｏｙｂｅａｎ
ＹＡＮＧ　Ｚｈｅｎｇ－Ｋｕｎ，ＬＯＮＧ　Ｓｈｉ－Ｈｕａ，ＺＨＯＵ　Ｆｅｉ－Ｆｅｉ，
ＨＡＯ　Ｚａｉ－Ｂｉｎ，ＷＡＮＧ　Ｘｉｕ－Ｌｉ＊
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｌｉｎ　５４１００６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　ｓｔｅｍｓ，ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｒｏｍ
ｔｈｅ　Ｄｏｎｇｎｏｎｇ　４２ａｎｄ　ｔｗｏ　ｄｗａｒｆ　ｍｕｔａｎｔｓ（ＨＫ８ａｎｄ　ＨＫ１１）；ａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｔｉｍｅ，ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓ－
ｃｅｎｃｅ　ａｎｄ　ＨＰＬＣ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ
ｍｏｒｅ　ｓｉｍｐｌｙ　ａｎｄ　ｆｌｅｅｔｌｙ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｅ，ｔｈｅ　ＲＳＤ　ｗａｓ　０．６９％－２．３０％，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅ－
ｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９５．５％－１０４．５％．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｃａｎ　ｂｅ　ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；ｔｈｅ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｉｓ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｐｌａｎｔ　ｈｅｉｇｈｔ；ｔｈｅ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｃｏｎ－
ｔｅｎｔ　ｏｆ　ｓｅｅｄｓ　ｉｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｓｔｅｍｓ　ｏｒ　ｌｅａｖｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｓｏｙｂｅａｎ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ；ｃｏｎｔｅｎｔ；ｆｌｏｗ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ；ｐｌａｎｔ　ｈｅｉｇｈｔ
　　大豆 （Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｍａｘ 或ｓｏｙｂｅａｎ），中国古称菽，
豆科一年生草本，双子叶植物，含有丰富油脂和蛋
白。大豆在我国四大作物 （玉米、水稻、小麦、大
豆）中单产最低，其原因之一是高秆易倒伏，而克服
倒伏的一般方法就是培育矮秆或半矮秆大豆品种，加
之相配套的是结合窄行密植高产栽培技术，达到提高
产量的目的。
大豆异黄酮 （ｓｏｙｂｅａｎ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ）是大豆生长中
形成的一类重要的次级代谢产物，其含量与植物株
高相 关 （Ｇａｒｄｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，２００９；Ｋｕｄｏｕ　ｅｔ　ａｌ．，
１９９１；杨丹等，２００６；姚开等，２００３）。异黄酮含量
的测定方法有比色法、流动注射化学发光法、高效
液相色谱法 （ＨＰＬＣ）等 （Ｋｒｉｔｚ－Ｓｉｌｖｅｒｓｔｅｉｄ　ｅｔ　ａｌ．，
２００２）。异黄酮与杂蛋白的紫外吸收峰较近，若用比
色法测定大豆异黄酮的含量，背景吸收较大，杂质
将严重干扰异黄酮的测定；ＨＰＬＣ的测定精确度虽
收稿日期：２０１２－１１－１０　　修回日期：２０１３－０１－１７
基金项目：国家自然科学基金 （３１０６０１９３）
作者简介：杨正坤 （１９８３－），男，安徽宿州人，硕士研究生，应用生物技术专业，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｚｈｅｎｇｋｙａｎｇ＠１６３．ｃｏｍ。
＊通讯作者：王秀丽，高级工程师，硕士生导师，研究方向为应用生物技术，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｗａｎｇｘｉｕｌｉ１１０９＠１６３．ｃｏｍ。
然高，但成本高，操作繁琐 （Ｓｕｎ　ｅｔ　ａｌ．，２０００；
Ｗａｎｇ　ｅｔ　ａｌ．，２０１０）。而流动注射化学发光法具有操
作简便，灵敏度高，线性范围宽，成本低，且具有
测定大批量异黄酮等优点 （杨丹等，２００６）。
在碱性介质中，Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６ 可以直接氧化大
豆异黄酮产生较强的化学发光，从而克服了杂质的
影响 （杨丹等，２００６）。该文采用了流动注射化学
发光法测定大豆异黄酮含量，从而比较矮秆大豆突
变体和原品种中茎、叶、种子中异黄酮含量的差异
性。该文通过对大豆茎叶种子中异黄酮含量的研
究，为以后研究矮秆大豆中的其他物质的含量以及
大豆的育种方面提供了一些理论性的依据。
１　试验材料与方法
１．１试验材料
原品种：东农 ４２；突变体：矮秆 ＨＫ８ 和
ＨＫ１１ （自有专利品种）；此三种大豆均采用盆栽，
且在众多盆中随机取３０盆大豆茎叶 （茎叶均取自
生长到第八周的三种大豆苗，且施肥、浇水等管理
均相同），而种子取自种植该批豆苗后的剩余籽粒
饱满的种子 （每个品种随机约取３０粒）。
１．２试验仪器及试剂
流动注射化学发光仪 （西安瑞迈电子有限公
司）；旋转蒸发仪 （上海亚荣生化仪器厂）；ＬＣ－
２０Ａ高效液相色谱仪 （日本岛津公司）；芦丁 （上
海阿拉丁）；大孔树脂 （上海研拓生物科技有限公
司），其余试剂均为国产分析纯。
１．３异黄酮的提取
大豆茎、叶和种子材料经过８０℃干燥２４ｈ，取
出后粉碎过４０目筛，粉末备用。用石油醚对一定量
上述粉末进行脱脂，脱脂后自然晾干，室温至恒重。
称取干燥后脱脂的粉末，加入６０％的乙醇溶液 （按料
液比为１∶２０），在一定温度下回流提取一段时间，同
法再提取一次，离心，合并两次上清液 （张雪茹等，
２０１０等）。
１．４异黄酮检测的前处理
将上述上清液过Ｄ－１０１Ｃ大孔树脂除去其中大
部分色素、糖类等，然后将得到的溶液加到旋转蒸
发仪中，旋转蒸发至溶液变为固体，然后将固体放
在８０℃烘箱中烘干２４ｈ，取出粉末，将粉末避光
保存在干燥器中，待用 （张博坤等，２００９）。
１．５试验方法与步骤
１．５．１试验方法　芦丁标准液的制备　称取芦丁
标准品 （纯度９７％）１０．００ｍｇ，先用少量０．１
ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＯＨ溶液溶解，再用去离子水定容至１０
ｍＬ，即得１ｍｇ／ｍＬ的芦丁标准液。
（１）流动注射化学发光体系配制：取一定量的铁
氰化钾、鲁米诺固体分别配制０．０５ｍｏｌ／Ｌ的铁氰化
钾储备液、０．０１ｍｏｌ／Ｌ鲁米诺储备液。试验测试前，
将两种储备液分别稀释至５×１０－４、１×１０－５　ｍｏｌ／Ｌ，并
作为工作液 （杨丹等，２００６；张雪茹等，２０１０）。
（２）ＨＰＬＣ测定大豆异黄酮的色谱条件：色
谱柱Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ　ＶＰ－ＯＤＳ　Ｃ１８柱 （２５０ｍｍ×４．６
ｍｍ，５μｍ），柱温４０℃，流动相为甲醇－乙酸溶
液流动相为甲醇∶１％乙酸＝３０∶７０，检测波长为
２５４ｎｍ，流速１０μＬ／ｍｉｎ （王松等，２００５；张岩
等，２０１１）。
１．５．２标准曲线的绘制　 （１）准确吸取１ｍｇ／ｍＬ
芦丁标准液０、０．２、０．４、０．６、０．８和１．０ｍＬ
分别置于６支１０ｍＬ容量瓶中，去离子水定容至刻
度，充分摇匀，静置１０ｍｉｎ。取上述溶液分别与５×
１０－４　ｍｏｌ／Ｌ　Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６ 溶液、１×１０－５　ｍｏｌ／Ｌ鲁米诺
（ｌｕｍｉｎｏｌ）溶液在流动注射化学发光仪上测试。以浓
度为横坐标，发光强度为纵坐标作图，绘制标准曲线
（杨丹等，２００６；张海军等，２０１１；等）。
（２）准确吸取１ｍｇ／ｍＬ芦丁标准液０、０．
０６２５、０．１２５、０．５０、１．００和２．００ｍＬ分别置
于６支１０ｍＬ容量瓶中，去离子水定容至刻度，
充分摇匀，静置１０ｍｉｎ。在上述色谱条件下进行
测定。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，绘
制标准曲线 （胡晓娟等，２００８；张岩等，２０１１）。
称取大豆异黄酮１０．００ｍｇ于１０ｍＬ的容量
瓶中，少许无水乙醇溶解，再用去离子水定容至刻
度，即为１ｍｇ／ｍＬ的样品待测溶液。同标准液测
定方法相同，测定发光强度和峰面积，根据标准曲
线计算出样品的异黄酮含量和回收率 （杨丹等，
２００５；杨张青等，２０１１；等）。
１．５．３回收率的测定　吸取一定量上述配制的芦
丁标准品溶液，加入到样品待检测溶液中，用流动
注射化学发光仪检测含量，并计算各个样品的回收
率 （徐文峰等，２００９；杨丹等，２００６；等）。
２　结果与分析
２．１建立标准曲线回归方程
用流动注射化学发光仪，以去离子水作空白对
照，测定芦丁标准溶液发光强度。芦丁浓度为横坐
００７ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３３卷
标，发光强度的抑光值为纵坐标，绘制曲线，得其
线性回归方程式Ｙ＝８１３．００　Ｘ＋２１．６４ （浓度区
间０．２～１．０ｍｇ／ｍＬ），相关系数ｒ＝０．９９９０。
通过使用 ＨＰＬＣ法以芦丁浓度为横坐标，峰面积
为纵坐标，绘制标准曲线，得其线性回归方程式Ｙ
＝８．１×１０５　Ｘ＋１．３×１０５ （浓度区间０．０６２５～
２．０ｍｇ／ｍＬ），相关系数ｒ＝０．９９９９。
２．２回收率的测定
为了验证试验的准确性，在样品中加入芦丁标
准液进行回收试验，其结果见表１。
表１　回收率试验结果 （ｎ＝３０）
Ｔａｂｌｅ　１　Ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ
样品
Ｓａｍｐｌｅ
初始量
Ｉｎｉｔｉａｌ
ａｍｏｕｎｔ
（ｍｇ）
加入量
Ａｄｄｅｄ
ｄｏｓａｇｅ
（ｍｇ）
测得量
Ｍｅａｓｕｒｅｄ
ｑｕａｎｔｉｔｙ
（ｍｇ）
回收率
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ
（％）
相对标
准偏差
ＲＳＤ
（％）
东农４２种子
Ｄｏｎｇｎｏｎｇ４２ｓｅｅｄｓ
０．４　 １　 １．４０８　 １０２．０　０．８３
ＨＫ１１种子
ＨＫ１１ｓｅｅｄｓ
０．４　 １　 １．３８２　 ９５．５　 １．７０
ＨＫ８种子
ＨＫ８ｓｅｅｄｓ
０．４　 １　 １．３９９　 ９９．８　 ２．０２
东农４２叶
Ｄｏｎｇｎｏｎｇ　４２ｌｅａｖｅｓ
０．２　 １　 １．２０９　 １０４．５　１．１６
ＨＫ１１叶
ＨＫ１１ｌｅａｖｅｓ
０．２　 １　 １．１９８　 ９９．０　 １．９１
ＨＫ８叶
ＨＫ８ｌｅａｖｅｓ
０．２　 １　 １．２０１　 １００．５　０．５４
东农４２茎
Ｄｏｎｇｎｏｎｇ　４２ｓｔｅｍｓ
０．１　 １　 １．０９７　 ９７．８　 ０．９７
ＨＫ１１茎
ＨＫ１１ｓｔｅｍｓ
０．１　 １　 １．０９５　 ９５．６　 ０．３９
ＨＫ８茎
ＨＫ８ｓｔｅｍｓ
０．１　 １　 １．０９７　 ９７．０　 １．０３
表２　ＨＰＬＣ与ＦＩ－ＣＬ方法测定芦丁含量比较
Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｎｔｒａｓｔ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｒｕｔｉｎ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ａｎｄ　ＦＩ－ＣＬ
测定方法
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔｈｏｄ
百分含量
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
（％）
相对标准偏差
ＲＳＤ
（％）
芦丁标准品Ｒｕｔｉｎ　ｓｔａｎｄａｒｄ　 ９７．０ －
高效液相色谱法 ＨＰＬＣ　 ９５．１　 １．３９
流动注射化学发光法ＦＩ－ＣＬ　 ９４．２　 ２．０１
　　从表２可以看出，采用流动注射化学发光法测
定大豆异黄酮含量，其回收率在９５．５％～１０４．
５％之间，相对标准偏差在０．３９％～２．０２％之
间，结果理想，此方法可行。流动注射化学发光法
与高效液相色谱法测定芦丁中的黄酮含量的结果相
近，相对标准偏差为２．０１％和１．３９％，在误差
允许的范围内，两者的ＲＳＤ较接近。但流动注射
化学发光法操作方便简单、成本低，溶液易配制，
周期短等。
２．３样品中大豆异黄酮含量的测定和株高的调查
表３和图１表明：东农４２种子、ＨＫ８种子、
ＨＫ１１种 子 中 异 黄 酮 含 量 分 别 为１．８４２、１．
５０４、０．９４６ｇ；东农４２茎、ＨＫ８茎、ＨＫ１１茎
中异黄酮含量分别为０．１６２、０．１５３、０．１４３ｇ；
东农４２叶、ＨＫ８叶、ＨＫ１１叶中异黄酮含量分别
为０．３２７、０．２７２、０．２０９ｇ。表３和图２表明，
东农４２株高最高，ＨＫ８次之，ＨＫ１１最低。
表３　大豆茎、叶、种子中异黄酮含量
测定与株高调查 （ｎ＝３０）
Ｔａｂｌｅ　３　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｉｎ　ｓｏｙｂｅａｎｓ
ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｓ　ａｎｄ　ｈｅｉｇｈｔ　ｓｕｒｖｅｙ
材料
Ｍａｔｅｒｉａｌ
发光强度
Ｌｕｍｉｎｏｕｓ
ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ
含量
Ｃｏｎｔｅｎｔ
（ｍｇ／ｇ）
相对标准
偏差
ＲＳＤ（％）
株高
Ｐｌａｎｔ　ｈｅｉｇｈｔ
（ｃｍ）
东农４２
Ｄｏｎｇｎｏｎｇ　４２
种子 １５１８．８　 １．８４２　 ０．８５
茎 １５３．６　 ０．１６２　 １．０７
叶子 ２８７．４　 ０．３２７　 １．９６
５０±３
ＨＫ１１ 种子 ７９０．８　 ０．９４６　 １．３５
茎 １３８．２　 ０．１４３　 ０．６９
叶子 ２４３．０　 ０．２０９　 ２．１１
４２±２
ＨＫ８ 种子 １２４５．２　 １．５０４　 ２．３０
茎 １４６．０　 ０．１５３　 １．３３
叶子 １９１．６　 ０．２７２　 ０．９４
４６±２
图１　原品种和突变体的茎、叶、种子中异黄酮含量比较
Ｆｉｇ．１　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｉｎ　ｓｏｙｂｅａｎｓ
ｓｔｅｍｓ，ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｓ
２．４Ｆ检验分析整体品系差异
本实验用Ｆ检验即方差分析的方法测验多个
样本平均数差异是否显著。由表４可以看出 ＨＫ１１
突变体与东农４２和 ＨＫ８整体差异极显著，说明
这三种中大豆异黄酮含量相差很大。
１０７５期　　　　　　　　　　　杨正坤等：矮秆大豆突变体异黄酮含量变化的研究
图２　三种大豆材料的比较　ａ．东农４２；ｂ．ＨＫ８；ｃ．ＨＫ１１。
Ｆｉｇ．２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｓｏｙｂｅａｎｓ
ａ．Ｄｏｎｇｎｏｎｇ　４２；ｂ．ＨＫ８；ｃ．ＨＫ１１．
表４　不同大豆材料的异黄酮含量整体差异分析
Ｔａｂｌｅ　４　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ
ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｏｙｂｅａｎｓ
变异因素
Ｆａｃｔｏｒ　ｏｆ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ
自由度
ＤＯＦ
平方和
Ｓｕｍ　ｏｆ
ｓｑｕａｒｅｓ
方差
Ｖａｒｉａｎｃｅ
Ｆ值
Ｆ　ｖａｌｕｅ
Ｆ０．０５ Ｆ０．０１
组内
Ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ
３０　 ３４．７９　１．１６　 ４．８３　１．９６　２．５８
组间
Ｂｅｔｗｅｅｎ　ｇｒｏｕｐｓ
２　 ０．８３　 ０．４２
误差Ｅｒｒｏｒ　 ６０　 １４．４１　０．２４
３　结论与讨论
大豆叶茎中的异黄酮的含量明显比种子中异黄
酮含量低，且两突变体茎叶种子中的异黄酮均比东
农４２的含量低。
紫外分光光度法测定大豆异黄酮的含量，背景
吸收较大，杂质将严重干扰异黄酮的测定；ＨＰＬＣ
操作较为复杂，试剂的配制和试验条件的要求较为
严格，而流动注射化学发光法操作简单，试剂配制
和试验条件等要求也较为简便，而Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６ 在
碱性条件下可以直接氧化异黄酮产生发光，这说明
该化学发光体系的发光体为异黄酮氧化的产物。氧
化产物吸收了该反应所放出的化学能被激发，由激
发态降到基态的这部分能量以光子的形式释放。由
于大孔树脂除掉了一些色素和一些糖类等杂质，而
在碱性介质中，Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６ 可以直接氧化大豆异
黄酮产生较强的化学发光，从而可以克服了色素、
糖和醇溶性蛋白等杂质的影响 （杨丹等，２００５，
２００６；张雪茹等，２０１０）。以往的研究方法和内容方
面较为单一，没有方法之间的比较，且没有对茎叶
种子之间异黄酮含量的差异性及与株高之间关系的
研究，因而说服力不是很强，而本文采用流动注射
化学发光法与较为经典且准确的 ＨＰＬＣ方法进行了
比较，同时对矮秆大豆茎叶种子组内与组间的异黄
酮含量进行了比较研究，得出含量的差异性及与矮
秆大豆株高的关系。
从以上可知，本实验通过流动注射化学发光法
较为准确的测定了三种大豆茎叶种子中异黄酮含量
的差异性，且植株高的东农４２的异黄酮含量比其
两个突变体相应部位高；从本实验可知大豆异黄酮
含量与大豆株高成正比，同时还可知相应的种子中
异黄酮含量明显比茎、叶高。通过本实验的测定结
果，为以后研究赤霉素和甜菊糖苷对大豆植株和大
豆茎叶种子中的其他物质含量的影响以及大豆的育
种方面提供了一些理论性的根据。
参考文献：
姚开，潘廖明．２００３．大豆异黄酮提取分离技术及检测方法研
究 ［Ｄ］．成都四川大学
Ｇａｒｄｎｅｒ　ＣＤ，Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ　ＬＭ，Ｆｒａｎｋｅ　ＡＡ．２００９．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ
ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ　ｖｓ　ｓｏｙ　ｆｏｏｄｓ　ｏｎ　ｂｌｏｏｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｏｆ　ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｄａｉｄｚｅｉｎ　ｉｎ　ａｄｕｌｔｓ ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｕｔｒ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，
２０ （３）：２２７－２３４
Ｇｕｏ　Ｒ （郭睿），Ｙａｏ　ＺＪ（姚占静），Ｚｈａｎｇ　ＣＳ （张春生），ｅｔ　ａｌ．
２００８．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｆｒｏｍ　ｓｏｙｂｅａｎ（大豆异黄
酮提取工艺研究） ［Ｊ］．Ｊ　Ｓｈａａｎｘｉ　Ｕｎｉｖ　Ｓｃｉ　＆Ｔｅｃｈｎｏｌ：Ｎａｔ
Ｓｃｉ　Ｅｄｉｔ （陕西科技大学学报·自然科学版），２６（１）：６８－７１
Ｈｕ　ＸＪ（胡晓娟），Ｈｕａｎｇ　ＸＳ（黄晓书），Ｌｉ　ＷＨ （李卫华），ｅｔ
ａｌ．２００８．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈ　ｆｏｏｄ　ｂｙ
ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （高效液相色谱法测
定保健食品中的大豆异黄酮）［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ａｎａｌｙ　Ｌａｂ （分析
试验室），２７ （１）：１０３－１０６
Ｋｕｄｏｕ　Ｓ，Ｆｌｅｕｒｙ　Ｙ，Ｗｅｌｔ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．１９９１．Ｍａｌｏｎｙ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ
ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ　ｉｎ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｓｅｅｄｓ（Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｍａｘ　Ｍｅｒｒｉ．）［Ｊ］．Ａｇｒｉｃ
Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，５５ （９）：２　２２７－２　２３３
Ｍａｏ　ＨＬ （毛慧玲），Ｐｅｎｇ　Ｊ（彭娟），Ｓｕｎ　ＳＦ （孙少发），ｅｔ　ａｌ．
２００７．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ
（大豆异黄酮提取工艺条件的研究）［Ｊ］．Ｊ　Ａｎｈｕｉ　Ａｇｒｉｃ　Ｕｎｉｖ
（安徽农业大学学报），３４ （２）：２７４－２７８
Ｓｕｎ　ＪＭ，Ｄｉｎｇ　ＡＬ，Ｄｏｎｇ　ＨＲ．２０００．Ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｄｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｓｏｙｂ　ｔｅｓｔ
ｓａｍｐｌｅ［Ｊ］．Ｓｏｙｂ　Ｓｃｉ，１９ （１）：１５－２０
Ｗａｎｇ　ＣＥ，Ｚｈａｏ　ＴＪ，Ｇａｉ　ＪＹ．２０１０．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｒａｐｉｄ
ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｆｙｉｎｇ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｏｆｕ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ａｇｒｏｎ　Ｓｉｎ，３６
（１２）：２　０６２－２　０７２
（下转第５９０页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｏｎ　ｐａｇｅ　５９０）
２０７ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３３卷
（Ｐｒｏｃｔｏｒ　１９８５）．
Ｔｈｅ　ｃｏｌｅｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｐｅｎａｎｇ　ａｎｄ　Ｊｏｈｏｒ　ａｒｅ　ｏｆ　ｃｕｌ－
ｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｒｉｇｉｎ　ｏｒ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｗｉｌｄ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．
Ｓｅｌａｇｉｎｅｌａ　ｓｉａｍｅｎｓｉｓ　Ｈｉｅｒｏｎ．ｉｎ　Ｂｏｔ．Ｔｉｄｓｓｋｒ．２４：
１１３．１９０１；Ａｌｓｔｏｎ　ｉｎ　Ｌｅｃｏｍｔｅ，Ｆｌ．Ｇｅｎ．Ｉｎｄｏ－ｃｈｉｎｅ　７
（２）：５６０，ｆ．６５：６－１０．１９５１；Ｔａｇａｗａ　ｅｔ　Ｋ．Ｉｗａｔｓ．，
Ｆｌ．Ｔｈａｉｌａｎｄ　３（１）：１８．１９７９；Ｘ．Ｃ．Ｚｈａｎｇ，Ｆｌ．
Ｒｅｉｐｕｂ．Ｐｏｐｕｌ．Ｓｉｎ．６（３）：１４７，ｐｌ．３８，ｆ．１－７．
２００４．ＴＹＰＥ：Ｔｈａｉｌａｎｄ（Ｓｉａｍ），Ｋｏｈ－Ｃｈａｎｇ　Ｐｒｏｖ．，
Ｃｈａｎｔａｂｕｒｉ，Ｎｉｐｐｌｅ，Ｓｃｈｍｉｄｔ　６５０（Ｄａｎｉｓｈ　Ｅｘｐｅｄ．ｔｏ
Ｓｉａｍ　１８９９－１９００），２０００ｆｔ．，ｏｎ　ｒｏｃｋｓ　ｉｎ　ｏｐｅｎ　ｊｕｎｇｌｅ．
Ｓｅｌａｇｉｎｅｌａ　ｒｅｐｔａｎｓ　Ｒｉｄｌ．，Ｊ．Ｓｔｒ．Ｂｒ．Ｒｏｙ．Ａｓ．Ｓｏｃ．
８０：１５５．１９１９，ｎｏｎ　Ｓｏｄｉｒｏ　１８９３；Ｓｅｌａｇｉｎｅｌａ　ｒｉｄｌｅｙａｎａ
Ｋｕｍｍ．，Ｍａｇｙａｒ　Ｂｏｔ．Ｌａｐｏｋ　２６：１００．１９２８．ＴＹＰＥ：Ｔｈａｉ－
ｌａｎｄ（Ｓｉａｍ），Ｐｕｌａｎ　Ｒａｗｅｉ，Ｌａｕｋａｗｉ　Ｉｓｌ．，Ｒｉｄｄｌｅｙ　１５９３０．
Ｐｌａｎｔｓ　ｔｅｒｒｅｓｔｒｉａｌ，ｅｖｅｒｇｒｅｅｎ　ｏｒ　ｓｅａｓｏｎａｌｙ　ｇｒｅｅｎ，
ｂｒｏｗｎ　ｗｈｅｎ　ｄｒｙ，ｃｒｅｅｐｉｎｇ　ｏｒ　ｓｕｂｅｒｅｃｔ．Ｒｈｉｚｏｐｈｏｒｅｓ　ｕｐ
ｔｏ　ｍｉｄｄｌｅ　ｐａｒｔ　ｏｆ　ｍａｉｎ　ｓｔｅｍ，ｅｍａｎａｔｉｎｇ　ａｘｉｌａｒｙ　ｆｒｏｍ
ｔｈｅ　ａｂａｘｉａｌ　ｓｉｄｅ（ｌｏｗｅｒ　ｓｕｒｆａｃｅ）ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｏｒｋｉｎｇ　ｐｏｉｎｔ　ｏｆ
ｓｔｅｍ．Ｍａｉｎ　ｓｔｅｍ　１．５－２ｍｍ　ｄｉａｍ．ｉｎ　ｌｏｗｅｒ　ｐａｒｔ，ｇｌａ－
ｂｒｏｕｓ．Ｌｅａｆｙ　ｂｒａｎｃｈｅｓ　ｇｌａｂｒｏｕｓ，ｄｏｒｓｉｖｅｎｔｒａｌｙ　ｆｌａｔ－
ｔｅｎｅｄ．Ｌａｔｅｒａｌ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｖａｔｅ－ｏｂｌｏｎｇ，ａｃｕｔｅ　ｔｏ　ｍｕｃｒｏｎａｔｅ
ｗｉｔｈ　ｌｏｎｇ　ａｒｉｓｔａｅ　ａｔ　ａｐｅｘ，ｃｏｒｄａｔｅ　ａｔ　ｂａｓｅ，ｔｏ　３ｍｍ
ｌｏｎｇ，１．５ ｍｍ　ｂｒｏａｄ；ｅｄｇｅｓ　ｃｉｌｉａｔｅ　ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ　ｗｉｔｈ
ｗｈｉｔｅ　ｓｅｔａｅ　ｏｆ　ａｂｏｕｔ　０．１ｍｍ　ｉｎ　ｌｅｎｇｔｈ，ｔｅｘｔｕｒｅ　ｓｏｆｔｌｙ
ｐａｐｙｒａｃｅｏｕｓ，ｇｒｅｅｎ，ｏｒ　ｓｏｍｅｔｉｍｅｓ　ｒｅｄｄｉｓｈ．Ｍｅｄｉａｎ
ｌｅａｖｅｓ　ｎｅａｒｌｙ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｏｒ　ｓｍａｌｅｒ　ｔｈａｎｌａｔｅｒａｌ　ｏｎｅｓ　ｉｎ
ｓｉｚｅ，ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃａｌｙ　ｏｂｌｏｎｇ　ｔｏ　ｓｕｂｏｒｉｂｉｃｕｌａｒ　ｗｉｔｈ　ｌｏｎｇ
ｐａｌｅ　ｔａｉｌｓ　ａｔ　ａｐｅｘ，ｃｉｌｉａｔｅ　ａｔ　ｍａｒｇｉｎ．Ｓｔｒｏｂｉｌｉ　ｕｓｕａｌｙ（５
－８）ｍｍ×１．２ｍｍ；ｓｐｏｒｏｐｈｙｌｓ　ｕｎｉｆｏｒｍ，ｏｖａｔｅ－ｓｕｂ－
ｔｒｉａｎｇｕｌａｒ　ｗｉｔｈ　ｌｏｎｇ　ｔａｉｌ．
Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ　ｓｐｅｃｉｍｅｎ：Ｍａｌａｙａ　Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ，Ｋｅ－
ｄａｈ，ｐｅａｋ，２５００ｆｔ，４－ＶＩＩＩ－１９１９，Ｍ．Ｈａｎｉｆ　＆ Ｍ．
Ｎｏｒ　４７４１（ＳＩＮＧ）．
Ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ　Ｒａｎｇｅ：Ｔｈａｉｌａｎｄ，Ｌａｏｓ，Ｃａｍｂｏｄｉａ，
Ｖｉｅｔｎａｍ，Ｃｈｉｎａ（Ｙｕｎｎａｎ），Ｍａｌａｙａ　Ｐｅｎｉｎｓｕｌａｒ．
Ｅｃｏｌｏｇｙ：Ｔｅｒｒｅｓｔｒｉａｌ　ｏｎ　ｒａｔｈｅｒ　ｄｒｙ　ｇｒｏｕｎｄ　ｏｒ　ｏｎ
ｒｏｃｋｓ　ｉｎ　ｌｉｇｈｔ　ｓｈａｄｅ　ｏｒ　ｉｎ　ｏｐｅｎ　ａｒｅａｓ　ａｔ　１　０００－１　８００ｍ
ａｌｔ．
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｉｓ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｓ　ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｉｎ　ｉｔｓ　ｃｒｅｅｐｉｎｇ　ｓｔｅｍｓ，
ｗｉｔｈ　ｄｏｒｓａｌ　ａｎｄ　ｖｅｎｔｒａｌ　ｌｅａｖｅｓ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　ｅａｃｈ　ｏｔｈｅｒ．
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ：
Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇｈ　Ｖａｎ．１９１５． Ｍａｌａｙａｎ　Ｆｅｒｎ　Ａｌｉｅｓ．Ｂａｔａｖｉａ：
Ｌａｎｄｓｄｒ　ｕｋｋｅｒｊ
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ｍａｔｒａ　Ｂｕｌｌ　Ｊａｒｄ　Ｂｏｔ　Ｂｕｉｔｅｎｚｏｒｇ，１４（３）：１７５－１８６
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Ｗｏｎｇ　ＫＭ．２０１０．Ｓｅｌａｇｉｎｅｌａｃｅａｅ［Ｍ］／／Ｆｌｏｒａ　ｏｆ　Ｐｅｎｉｎｓｕｌａｒ　Ｍａｌａｙ－
ｓｉａ．Ｋｕａｌａ　Ｌｕｍｐｕｒ：Ｆｏｒｅｓｔ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｍａｌａｙｓｉａ，１：４９－
８６
櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝櫝
（上接第７０２页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｆｒｏｍ　ｐａｇｅ　７０２）
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Ｙａｎｇ　Ｄ（杨丹），Ｈａｏ　ＺＢ（郝再彬）．２００５．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ
ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（流动注射化学发光法测定
甜叶菊糖苷）［Ｊ］．Ｃｈｅｍ　Ｅｎｇ（化学工程师），４：２３，２４，４１
Ｙａｎｇ　Ｄ（杨丹），Ｃａｎｇ　Ｊ（苍晶），Ｈａｏ　ＺＢ（郝再彬），ｅｔ　ａｌ．２００６．
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ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ（流动注射化学发光法测定大豆异黄酮）［Ｊ］．Ｃｈｉｎ
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Ｙａｎｇ　ＺＱ（张青），Ｈｕ　ＢＮ（胡小宁），Ｌｉ　ＧＱ（李国全），ｅｔ　ａｌ．２０１１．
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（大豆异黄酮提取新工艺的研究）［Ｊ］．Ｓｏｙｂ　Ｓｃｉ　＆ Ｔｅｃｈｎｏｌ
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Ｚｈａｎｇ　ＨＪ（张海军），Ｗａｎｇ　Ｙ（王英），Ｗａｎｇ　ＱＹ（王庆钰）．２０１１．
Ｓｕｒｖｅｙ　ｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ（大豆异
黄酮检测方法研究概述）［Ｊ］．Ｃｅｒｅａｌｓ　＆Ｏｉｌｓ（粮食与油脂），
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Ｚｈａｎｇ　ＸＲ（张雪茹），Ｚｈｏｕ　ＳＷ（周绍文）．２０１０．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｓｏｙｂｅａｎ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ　ｂｙ　ｓｔａｔｉｃ　ｉｎｓｔａｎｔａｎｅｏｕｓ　ｓｔｅａｄｙ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（静态瞬稳注射化学发光法检测大豆异黄
酮）［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｌａｂ　Ｔｅｃｈｎｏｌ（中国卫生检验杂志），２０
（３）：５３８－５４０
Ｚｈａｎｇ　Ｙ（张岩），Ｗａｎｇ　ＬＮ（王莉娜）．２０１１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｙ－
ｂｅａｎ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ　ｉｎ　Ｎａｔｔｏ　ａｎｄ　Ｎａｔｔｏ　ｃａｐｓｕｌｅ　ｂｙ　ＨＰＬＣ（高效液
相色谱法测定纳豆及纳豆胶囊中的大豆异黄酮含量）［Ｊ］．Ｊ
Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌ　Ｂｕｓｉｎ　Ｕｎｉｖ：Ｎａｔ　Ｓｃｉ　Ｅｄｉｔ（北京工商大学学
报·自然科学版），２９（１）：３８－４１
０９５ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３３卷