全 文 ：书广 西 植 物 Ｇｕｉｈａｉａ　Ｆｅｂ．２０１５，３５（１）：１１５－１１９　　　　　　　　　　 ｈｔｔｐ：／／ｊｏｕｒｎａｌ．ｇｘｚｗ．ｇｘｉｂ．ｃｎ　
ＤＯＩ：１０．１１９３１／ｇｕｉｈａｉａ．ｇｘｚｗ２０１３０７０１５
庞玉新，张新蕊，于福来，等．大飞扬总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性测定［Ｊ］．广西植物，２０１５，３５（１）：１１５－１１９
Ｐａｎｇ　ＹＸ，Ｚｈａｎｇ　ＸＲ，Ｙｕ　ＦＬ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＥｕｐｈｏｒｂｉａ　ｈｉｒｔａ［Ｊ］．Ｇｕｉｈａｉａ，
２０１５，３５（１）：１１５－１１９
大飞扬总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性测定
庞玉新＊，张新蕊，于福来，张影波，官玲亮，王　丹，胡雄飞
（中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所／农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室，海南 儋州５７１７３７）
摘　要：大飞扬为大戟科（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｃｅａｅ）大戟属（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ）植物飞扬草（Ｅ．ｈｉｒｔａ），主要化学成分为黄酮
类、丹宁类、三萜类、二萜类，具有清热解毒、利湿止痒、通乳等功效。目前对大飞扬的研究主要集中在化学成
分及药理活性的研究，对黄酮类成分提取工艺优化报道较少。为优化大飞扬总黄酮的提取工艺，该文以采自
海南儋州的野生大飞扬干燥全草为材料，以总黄酮产率为评价指标，在单因素试验的基础上，进一步通过正交
试验设计对大飞扬总黄酮的提取工艺进行优化，同时采用清除ＤＰＰＨ自由基及ＡＢＴＳ法对其抗氧化活性进
行测定。结果表明：大飞扬总黄酮最佳提取工艺为药材粉碎过４号筛（６５目），以８５％乙醇超声提取４次；大
飞扬总黄酮对ＤＰＰＨ和ＡＢＴＳ自由基均有较好的清除率作用，其ＩＣ５０值分别为５６．１和６０．７μｇ／ｍＬ。大飞扬
黄酮类成分大多具有酚羟基基团，如异鼠李素、槲皮素等，具有较好的抗氧化活性。该文结果为大飞扬中黄酮
类成分工业化生产提供了依据，也为进一步开发利用大飞扬药材奠定了基础。
关键词：大飞扬；总黄酮；正交试验；超声提取法；抗氧化活性
中图分类号：Ｑ９４６；Ｒ２８４．２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－３１４２（２０１５）０１－０１１５－０５
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＥｕｐｈｏｒｂｉａ　ｈｉｒｔａ
ＰＡＮＧ　Ｙｕ－Ｘｉｎ＊，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉｎ－Ｒｕｉ，ＹＵ　Ｆｕ－Ｌａｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｙｉｎｇ－Ｂｏ，
ＧＵＡＮ　Ｌｉｎｇ－Ｌｉａｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｄａｎ，ＨＵ　Ｘｉｏｎｇ－Ｆｅｉ
（Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｃｒｏｐｓ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ
Ｃｒｏｐ　Ｇｅｎｅ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ　ｉｎ　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｃｈｉｎａ，Ｄａｎｚｈｏｕ　５７１７３７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｈｉｒｔａ （Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ）ｗｈｉｃｈ　ｃｏｎｔａｉｎｓ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ，ｔａｎｎｉｎｓ，ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ，ｄｉｔｅｒｐｅｎｅｓ，ｐｏｓｓｅｓｓｅｓ　ｖａｒｉｏｕｓ
ｅｆｆｅｃｔｓ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｈｅａｔ－ｃｌｅａｒｉｎｇ　ａｎｄ　ｄｅｔｏｘｉｃａｔｉｎｇ，ｄａｍｐｉｎｇ　ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｌｉｅｖｉｎｇ　ｉｔｃｈ　ａｎｄ　ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ
ｃｕｒｒｅｎｔ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　Ｅ．ｈｉｒｔａｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｍａｉｎｌｙ　ｆｏｃｕｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉ－
ｔｉｅｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　ｌｉｔｔｌｅ　ｒｅｐｏｒｔ　ａｂｏｕｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ　ｄｒｙ
ｈｅｒｂ　ｏｆ　ｗｉｌｄ　Ｅ．ｈｉｒｔａａｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｗａｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｄａｎｚｈｏｕ，Ｈａｉｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｔｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃ－
ｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｅ．ｈｉｒｔａ，ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉ－
ｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｄｅｓｉｇｎ．Ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＥ．ｈｉｒｔａ　ｗａｓ　ｍｅａｓ－
ｕｒｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ＡＢＴＳ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｄｉｓｐｌａｙｅｄ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ａｓ
ｆｏｌｏｗｓ：ｔｈｅ　ｐｏｗｄｅｒ　ｏｆ　Ｅ．ｈｉｒｔａ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｏｒ　ｆｏｒ　４ｔｉｍｅｓ　ｗｉｔｈ　８５％ｅｔｈａｎｏｌ　ａｆｔｅｒ　ｂｅｉｎｇ　ｓｉｅｖｅｄ
ｂｙ　Ｎｏ．４ｓｉｅｖｅ（６５ｍｅｓｈｅｓ）．Ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ＡＢＴＳ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｇｒａｄｕａｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
收稿日期：２０１４－０２－２５　　修回日期：２０１４－０９－１３
基金项目：海南省中药现代化项目（２０１１ＺＹ００１）；海南省社会发展科技专项（２０１２ｓｆ０１５）。
作者简介：庞玉新（１９７５－），男，博士，副研究员，研究方向为南药的ＧＡＰ规范化栽培、质量控制及资源开发与利用，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｐｙｘｍａｒｘ＠１２６．ｃｏｍ。
＊通讯作者
ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＥ．ｈｉｒｔａｉｎｃｒｅａｓｅｄ，（ＩＣ５０ｗａｓ　５６．１ａｎｄ　６０．７μｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｅ．ｈｉｒｔａ　ｈａｓ
ａ　ｂｅｔｔｅｒ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｄｕｅ　ｔｏ　ｉｔｓ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｇｒｏｕｐｓ　ｌｉｋｅ　ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｗｏｕｌｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｂａｓｉｓ
ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｅ．ｈｉｒｔａ，ａｎｄ　ｌａｙ　ｔｈｅ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｕｔｉ－
ｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　Ｅ．ｈｉｒｔａ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｈｉｒｔａ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
　　大飞扬为大戟科（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｃｅａｅ）大戟属（Ｅｕ－
ｐｈｏｒｂｉａ）植物飞扬草（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｈｉｒｔａ）的干燥全
草，具有清热解毒、利湿止痒、通乳的功效，临床多用
于肺痈、乳痈、疔疮中毒、湿疹、皮肤瘙痒、产后少乳
等症（中国药典，２０１０）。其乙醇提取物被证明具有
抗过敏（Ｙｏｕｓｓｏｕｆ　ｅｔ　ａｌ．，２００７；Ｓｉｎｇｈ　ｅｔ　ａｌ．，２００６；
Ｐｒｅｔｏｒｉｕｓ　ｅｔ　ａｌ．，２００７）、镇静抗焦虑（Ａｎｕｒａｄｈａ　ｅｔ
ａｌ．，２００８；陈蕙芳等，２００８）、抗菌（Ｗａｎｇ　ｅｔ　ａｌ．，
２００５；Ｓｕｄｈａｋａｒ　ｅｔ　ａｌ．，２００６；刘国坤等，２００４）、抗疟
原虫（Ｔｏｎａ　ｅｔ　ａｌ．，２００４）、利尿（Ｊｏｈｎｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ．，
１９９９）等作用。目前已从飞扬草中分离得到萜类、黄
酮类、酚类、鞣酸类、糖类、烃类等多种化合物（陈玲，
１９９１；中华本草，１９９９；Ｍａｌａｖａｄｈａｎ　ｅｔａｌ．，２００９；武
毅等，２０１２）。黄酮类成分常用的方法有冷浸提取
（贤景春等，２０１２）、回流提取（张军武等，２０１２）、超声
辅助提取（宁德生等，２０１２）等。本研究为探索大飞
扬总黄酮的提取条件，以总黄酮产率为考察指标，在
比较了３种提取方法的基础上，运用正交试验优化
提取工艺，确定大飞扬总黄酮的最佳提取条件，同时
对其抗氧化活性进行了研究，以期为大飞扬总黄酮
的有效利用奠定基础。
１　材料与方法
１．１材料与试剂
１．１．１材料　大飞扬采自海南省儋州市，经中国热带
农业科学院庞玉新副研究员鉴定为大戟科（Ｅｕ－
ｐｈｏｒｂｉａｃｅａｅ）大戟属（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ）植物飞扬草（Ｅ．
ｈｉｒｔａ），标本保存于中国热带农业科学院热带作物
品种资源研究所标本馆。
１．１．２试剂与仪器　无水乙醇，广州化学试剂厂；
２，２－二苯基－１－苦肼基，ＤＰＰＨ 和２，２－联氮－二（３－乙
基－苯并噻唑－６－磺酸）二铵盐，ＡＢＴＳ，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ
公司；ＤＦＴ－２００手提式高速万能粉碎机，温岭林大
机械有限公司；ＫＱ－５００ＤＢ数控超声波清洗机，昆山
市超声仪器有限公司；ＵＶ－２１０２ＰＣ／ＰＣＳ型紫外可
见分光光度计，尤尼柯（上海）仪器有限公司。
１．２方法
１．２．１总黄酮的提取　精密称定约１０ｇ大飞扬药材
粉末，按照设定的条件进行提取制备提取液，备用。
１．２．２总黄酮含量的测定
１．２．２．１对照品溶液的制备　精密称取１２０℃干燥
至恒重的芦丁对照品１５．１４ｍｇ，置于１００ｍＬ容量
瓶中，加入适量甲醇，微热溶解后，加甲醇定容，摇匀
即得对照品溶液。
１．２．２．２标准曲线的绘制　分别精密量取１．００、２．００、
４．００、６．００、８．００ｍＬ对照品溶液，置于２５ｍＬ量瓶
中，各加水至１０ｍＬ左右，加５％ ＮａＮＯ２溶液１．００
ｍＬ，摇匀，放置５ｍｉｎ，加１０％ Ａｌ（ＮＯ３）３溶液１．００
ｍＬ，摇匀，放置５ｍｉｎ，加４％ ＮａＯＨ 溶液１０．００
ｍＬ，加水至刻度，摇匀，放置１５ｍｉｎ，以相应的试剂
溶液为空白对照，在最适吸收波长５０４ｎｍ 处测定
吸光度。以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，
绘制标准曲线，得线性回归方程：ｙ＝１３．８９３　ｘ－
０．０１９１（Ｒ２＝０．９９９　５），线性范围为０．００６　１～０．４８４　５
ｍｇ／ｍＬ。
１．２．２．３精密度试验 精密量取同一质量浓度对照品
溶液１．００ｍＬ，按照１．２．２．２项下的方法测定其吸光
度，结果ＲＳＤ 为０．５２％（ｎ ＝６），表明仪器精密度
良好。
１．２．２．４稳定性试验　取某一浓度供试品溶液，分别
在第０、２、６、８、１０、１２、２４ｈ测定吸光度，ＲＳＤ 为
１．２７％（ｎ＝７），表明在２４ｈ内供试品较为稳定。
１．２．２．５重复性试验 取同一批样品，平行制备６份供
试品溶液，测定吸光度，计算总黄酮产率，结果ＲＳＤ
为２．６３％（ｎ＝６）。
１．２．２．６加样回收试验　取同一批已知浓度的样品，
平行制备６份供试品溶液，加入相当于供试品溶液
总黄酮质量的对照品，按１．２．２．２项下操作，计算其
回收率，平均回收率为９５．５７％，ＲＳＤ 值为２．０３％
（ｎ＝６）。
１．２．２．７样品的测定　直接吸取或适当稀释后吸取
大飞扬提取液１０．００ｍＬ，按１．２．２．２项下操作测定
提取液吸光度，计算其总黄酮产率。
１．２．３单因素试验　总黄酮的提取方法主要有冷浸、
６１１ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３５卷
回流、超声辅助提取，本研究比较了３种提取方法对
大飞扬总黄酮的提取率，在此基础上，研究了乙醇浓
度、提取次数、粉碎度对总黄酮产率的影响，每个因
素的不同水平重复３次测定，取平均值。
１．２．３．１提取方法的选择　精密称取１０ｇ大飞扬药
材，加入８０ｍＬ　７５％的乙醇，分别采用冷浸８ｈ、回
流３ｈ、超声提取３０ｍｉｎ，测定其吸光度，计算总黄
酮的产率。
１．２．３．２提取次数的选择　精密称取１０ｇ大飞扬药
材，加入８０ｍＬ　７５％的乙醇，提取６次，测定吸光
度，计算总黄酮产率。
１．２．３．３粉碎度的选择　分别称取不同粉碎度（分别
过１、２、３和４号筛）的大飞扬药材１０ｇ，加入８０ｍＬ
７５％的乙醇，按照样品制备的方法制备样品，测定吸
光度，计算总黄酮产率。
１．２．３．４乙醇浓度的选择　精密称取１０ｇ大飞扬药
材，分别加入３５％、５５％、６５％、７５％、８５％、９５％乙
醇８０ｍＬ，按照样品制备的方法制备样品，测定吸光
度，计算总黄酮产率。
１．２．４正交试验　在单因素试验的基础上，以乙醇浓
度、粉碎度、提取次数为因素，运用正交试验优化大
飞扬中总黄酮的提取工艺，正交试验设计见表１。
表１　正交试验因素水平
Ｔａｂｌｅ　１　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｆｏｒ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ
水平Ｌｅｖｅｌ
因素Ｆａｃｔｏｒ
Ａ乙醇浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　ａｌｃｏｈｏｌ
（％）
Ｂ粉碎度
（药筛号数）
Ｃｏｍｍｉｎｕｔｉｎｇ
ｄｅｇｒｅｅ
Ｃ提取次数
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅｓ
１　 ７５　 ２　 ２
２　 ８５　 ３　 ３
３　 ９５　 ４　 ４
１．２．５抗氧化活性的测定
１．２．５．１ 清除 ＤＰＰＨ 能力测定　参照刘德胜等
（２０１２）的方法，分别取０．５ｍＬ不同浓度的试样溶
液（无水乙醇），加入２．５ｍＬ的 ＤＰＰＨ（６．５×１０－５
ｍｏｌ／Ｌ）溶液，混匀，室温下静置３０ｍｉｎ，测定其在
５１７ｎｍ波长处的吸光度值Ａｉ，同时测定ＤＰＰＨ溶
液与无水乙醇混合液的吸光度值Ａ０，以及试样溶液
与无水乙醇混合液的吸光度值Ａｊ。按以下公式计
算清除率：
清除率＝ １－（Ａ
－
ｉ－Ａ
－
ｊ）／Ａ
－
０［ ］×１００％
以样品浓度为横坐标，以清除率为纵坐标作图，
求出清除率为５０％时样品的浓度（ＩＣ５０），样品活性
结果以半数清除浓度（ＩＣ５０）表示。
１．２．５．２ 清除 ＡＢＴＳ能力测定　参照袁王俊等
（２００９）的方法，取不同浓度的样品溶液，加入０．０８７
５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＴＳ溶液，混匀，静置１０ｍｉｎ，测定其
７３４ｎｍ波长处的吸光度值Ａｉ，对照管以无水乙醇
替代样品，测定其吸光度值Ａ０。按以下公式计算清
除率：
清除率＝ １－Ａ
－
ｉ／Ａ
－
０［ ］×１００％
２　结果与分析
２．１单因素试验结果
２．１．１提取方法的选择　冷浸、回流、超声提取３种
提取方法中，乙醇超声提取总黄酮提取率最高（表
２）。因此，后续试验采用超声方法提取大飞扬浸膏。
２．１．２提取次数对总黄酮产率的影响　随着提取次
数的增加，总黄酮的提取率呈增加趋势，但提取３次
和提取４次总黄酮产率变化不大（图１）。从节省时
间及试剂方面考虑，优先考虑提取３次。
表２　不同提取方法总黄酮产率
Ｔａｂｌｅ　２　Ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｏｒ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ
提取方法
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ
药材质量
Ｓａｍｐｌｅ　ｗｅｉｇｈｔ
（ｇ）
总黄酮产率
Ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
（ｍｇ／ｇ）
冷浸提取
Ｃｏｌｄ　ｓｏａｋ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
１０．０３　 １１．２３
回流提取
Ｒｅｆｌｕｘ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
１０．０４　 １９．５２
超声提取
Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
１０．０２　 ２８．３９
图１　提取次数对总黄酮产率的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｉｏｄｓ
７１１１期　　　　　　　　　庞玉新等：大飞扬总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性测定
２．１．３粉碎度对总黄酮产率的影响　在采用的４种
粉碎度中，药材过４号筛（６５目），其总黄酮产率最
高（图２）。
２．１．４乙醇浓度对总黄酮含量的影响　图３结果表
明，采用８５％乙醇提取，大飞扬总黄酮产率最高
（图３）。
图２　粉碎度对总黄酮产率的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｏｍｍｉｎｕｔｉｎｇ　ｄｅｇｒｅｅ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｉｏｄｓ
图３　乙醇浓度对总黄酮产率的影响
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｉｏｄｓ
２．２正交试验结果
依据单因素试验结果，选择对总黄酮产率影响
较大的乙醇浓度、粉碎度、料液比为考察因素，以表
１的设计方案进行试验，以总黄酮产率为考察指标，
结果见表３和４。
直观分析可知，３个因素对总黄酮产率的影响
为Ａ（乙醇浓度）＞Ｂ（粉碎度）＞Ｃ（提取次数），最佳
组合是 Ａ２Ｂ３Ｃ３（表３）。方差分析结果可知乙醇浓
度对总黄酮的产率具有显著影响，而粉碎度和提取
次数影响不显著（见表４）。综合以上分析，大飞扬
总黄酮最佳提取工艺为大飞扬药材粉碎过４号筛
（６５目），８５％乙醇提取４次。
表３　正交试验结果与分析
Ｔａｂｌｅ　３　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｆｏｒ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ
序号
Ｃｏｄｅ
因素Ｆａｃｔｏｒ
Ａ　 Ｂ　 Ｃ
总黄酮产率
Ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
（ｍｇ／ｍＬ）
１　 １　 １　 １　 １９．９１
２　 １　 ２　 ２　 １８．５９
３　 １　 ３　 ３　 ２６．２５
４　 ２　 １　 ２　 ２６．９０
５　 ２　 ２　 ３　 ３１．０６
６　 ２　 ３　 １　 ３０．５６
７　 ３　 １　 ３　 １７．８８
８　 ３　 ２　 １　 １９．９５
９　 ３　 ３　 ２　 ２０．４５
Ｋ１　 ２１．５８３　 ２１．５６３　 ２３．４７３
Ｋ２　 ２９．５０７　 ２３．２００　 ２１．９８０
Ｋ３　 １９．４２７　 ２５．７５３　 ２５．０６３
Ｒ　 １０．０８０　 ４．１９０　 ３．０８３
表４　正交试验方差分析结果
Ｔａｂｌｅ　４　ＡＮＯＶＡ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｆｏｒ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ
因素
Ｆａｃｔｏｒ
偏差平方和
ＳＳ
自由度
ＤＦ
Ｆ 值
Ｆ－ｖａｌｕｅ
Ｆ临界值
Ｃｒｉｔｉｃａｌ　ｖａｌｕｅ
Ｐ 值
Ｐ－ｖａｌｕｅ
Ａ　 １６９．０３７　 ２　 ２５．８１１　 １９ ＜０．０５
Ｂ　 ２６．７５４　 ２　 ４．０８５　 １９
Ｃ　 １４．２６５　 ２　 ２．１７８　 １９
误差Ｅｒｒｏｒ　 ６．５５　 ２
２．３验证试验
按照优选出的最佳提取工艺，重复３次验证试
验，测定大飞扬总黄酮平均产率为３８．６２ｍｇ／ｍＬ。
２．４抗氧化活性的测定结果
２．４．１大飞扬总黄酮对ＤＰＰＨ的清除作用　抗氧化
活性测试结果显示，随着浓度的增加，大飞扬总黄酮
对ＤＰＰＨ 自由基的清除率逐渐增加，且浓度在
０．１２５～１．０００ｍｇ／ｍＬ之间，增加缓慢；其半数清除
率（ＩＣ５０）为５６．１μｇ／ｍＬ。在浓度为１．０００ｍｇ／ｍＬ
时，清除率达到最高值，为９０．３８％（图４）。
２．４．２大飞扬总黄酮对ＡＢＴＳ的清除作用　抗氧化
活性测试结果显示，大飞扬总黄酮可有效抑制
ＡＢＴＳ自由基的产生，其半数清除率（ＩＣ５０）为６０．７
μｇ／ｍＬ。在浓度为０．１２５ｍｇ／ｍＬ时，清除率达到最
高值，为８７．５４％（图５）。
３　讨论与结论
本研究采用超声波方法提取大飞扬中的总黄
酮，与之前采用的回流方法（熊萍等，２０１０）相比，总
８１１ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３５卷
图４　大飞扬总黄酮对ＤＰＰＨ自由基的清除率
Ｆｉｇ．４　Ｒａｔｅ　ｏｆ　ＤＰＰＨ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｂｙ
ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＥ．ｈｉｒｔａ
图５　大飞扬总黄酮对ＡＢＴＳ自由基的清除率
Ｆｉｇ．５　Ｒａｔｅ　ｏｆ　ＡＢＴＳ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｂｙ
ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＥ．ｈｉｒｔａ
黄酮产率相差不大，而超声提取的方法具有提取时
间短、无需高温加热的优点，节约了时间，提高了提
取效率，又降低了大飞扬中某些对热不稳定成分的
损失，因此超声提取方法可以作为大飞扬总黄酮的
一种简便、高效的提取方法。
目前对大飞扬的研究主要集中在化学成分及药
理活性方面，对黄酮类成分提取工艺优化报道较少。
武毅等（２０１２）从大飞扬中分离出的黄酮类成分大多
具有酚羟基基团，如异鼠李素、槲皮素等，这些类成
分具有较好的抗氧化活性。本试验建立了大飞扬总
黄酮的提取工艺，并进行清除自由基抗氧化活性测
定。这为大飞扬中黄酮类成分工业化生产提供了依
据，也为进一步开发利用大飞扬药材奠定基础。
本研究通过比较冷浸、超声、回流提取３种提取
方法对大飞扬总黄酮产率的影响，并采用正交试验
优化了总黄酮提取条件，得到了最佳提取工艺为大
飞扬药材粉碎过４号筛（６５目），８５％乙醇提取４
次。同时，抗氧化活性测试结果显示，大飞扬总黄酮
对ＤＰＰＨ和ＡＢＴＳ自由基均具有较好的清除作用，
其ＩＣ５０值分别为５６．１和６０．７μｇ／ｍＬ。
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（下转第１２５页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｏｎ　ｐａｇｅ　１２５）
９１１１期　　　　　　　　　庞玉新等：大飞扬总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性测定
加０．０７５ｇ　ＮａＯＨ），提取次数２次，最高含量为０．５４
ｍｇ·ｍＬ－１，得率为２１．３５％。
致谢　感谢导师肖瑜教授、高级实验师梁美娜
老师、师妹刘以清和师弟黄浦在实验及文字写作过
程中给予的指导和帮助。
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櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊
（上接第１１９页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｆｒｏｍ　ｐａｇｅ　１１９）
　ｇａｎｇｅｔｉｃｕｍ［Ｊ］．Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，７７（５）：３７８－３８０
Ｔｏｎａ　Ｌ，Ｃｉｍａｎｇａ　ＲＫ，Ｍｅｓｉａ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．２００４．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｐｌａｓｍｏｄｉａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｎｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｓｅｖｅｎ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｐｌａｎｔｓ　ｕｓｅｄ
ｉｎ　ｔｈｅ　Ｄｅｍｏｃｒａｔｉｃ　Ｒｅｐｕｂｌｉｃ　ｏｆ　Ｃｏｎｇｏ［Ｊ］．Ｊ　Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，９３
（１）：２７－３２
Ｗａｎｇ　ＹＣ，Ｈｕａｎｇ　ＴＬ．２００５．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ａｎｔｉ－ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ
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Ｗｕ　Ｙ（武毅），Ｑｕ　Ｗ（曲玮），Ｇｅｎｇ　Ｄ（耿頔），ｅｔ　ａｌ．２０１２．Ｐｈｅｎｏｌｓ
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活性研究）［Ｊ］．Ｇｕｉｈａｉａ（广西植物），２９（５）：６９４－６９７
Ｚｈａｎｇ　ＪＷ（张军武），Ｚｈａｏ　Ｑ（赵琦）．２０１２．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｒｅｆｌｕｘ
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Ｊ　Ｔｒａｄ　Ｃｈｉｎ　Ｍｅｄ（辽宁中医杂志），３９（４）：１　１３３－１　１３４
５２１１期　　　　　　　　　　龚秋实等：油茶茶枯中茶皂素的提取工艺研究