全 文 ：　 Ｇｕｉｈａｉａ　 Ｊｕｎ. ２０１６ꎬ ３６(６):７５２－７５７
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ＤＯＩ: １０.１１９３１ / ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０１４０５０５０
娄华勇ꎬ刘亚洲ꎬ张文芳ꎬ等. 拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定[Ｊ]. 广西植物ꎬ ２０１６ꎬ ３６(６):７５２－７５７
ＬＯＵ ＨＹꎬＬＩＵ ＹＺꎬＺＨＡＮＧ ＷＦꎬｅｔ ａｌ. Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｉｎ Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｂｉｓｔｏｒｔａ[Ｊ]. Ｇｕｉｈａｉａꎬ ２０１６ꎬ ３６(６):７５２－７５７
拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定
娄华勇１ꎬ 刘亚洲１ꎬ２ꎬ 张文芳１ꎬ３ꎬ 潘卫东１∗
( １. 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室ꎬ 贵阳 ５５０００２ꎻ ２. 贵州大学
生命科学院ꎬ 贵阳 ５５００２５ꎻ ３. 贵阳中医学院ꎬ 贵阳 ５５０００２ )
摘　 要: 该研究采用高效液相色谱法和紫外分光光度法分别对拳参中的主要成份———没食子酸以及总鞣质
进行含量测定ꎮ 其中ꎬ用高效液相色谱法测定没食子酸的含量ꎬＨＰＬＣ 条件为 Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ Ｐｈｅｎｙｌ 柱 (２５０
ｍｍ × ４.６ ｍｍꎬ ５ μｍ)ꎬ甲醇－０.１％磷酸梯度洗脱ꎬ流速为 １.０ ｍＬ􀅰ｍｉｎ￣１ꎬ检测波长为 ２７６ ｎｍꎮ 用紫外分光光度
法测定总鞣质的含量ꎬ采用 ２０１０版«中国药典»一部附录 ＸＢ 中鞣质含量测定方法ꎬ用干酪素沉淀鞣质ꎬ通过
干酪素沉淀前后鞣质的变化来确定样品中总鞣质的含量ꎮ 结果表明:没食子酸在 ０.０５１~ １.０２ μｇ范围内呈现
良好的线性关系ꎬ平均加样回收率分别为 ９９.１％、１００.３％、１０１.９％ꎬＲＳＤ 分别为 ２.１％、０.８％、２.０％ꎻ总鞣质在
２.０９~１０.４８ μｇ范围内呈现良好线性关系ꎬ平均加样回收率分别为 １０２.２％、１００.２％、１０２.１％ꎬＲＳＤ分别为１.３％、
１.４％、１.０％ꎮ 利用上述方法ꎬ还测定了贵州贵阳和四川成都各 ３ 批样品中没食子酸和总鞣质的含量差异ꎬ发
现成都样品中的没食子酸与总鞣质均大于贵阳拳参中的含量ꎬ初步分析导致这一结果的原因可能与拳参的生
长海拔有关ꎬ而成都的海拔范围更适合拳参的生长ꎮ 上述两种方法快速、简单、重现性好ꎬ可以作为拳参中没
食子酸和总鞣质的含量测定方法ꎬ而该方法也是首次被用来同时测定拳参中没食子酸和总鞣质的含量ꎬ为今
后的地方药典标准甚至«中国药典»标准的补充和完善提供了重要依据ꎮ
关键词: 拳参ꎬ 没食子酸ꎬ 鞣质ꎬ 高效液相色谱
中图分类号: Ｑ９４６.８４　 　 文献标识码: Ａ　 　 文章编号: １０００￣３１４２(２０１６)０６￣０７５２￣０６
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｔｏｔａｌ
ｔａｎｎｉｎｓ ｉｎ Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｂｉｓｔｏｒｔａ
ＬＯＵ Ｈｕａ￣Ｙｏｎｇ１ꎬ ＬＩＵ Ｙａ￣Ｚｈｏｕ１ꎬ２ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｗｅｎ￣Ｆａｎｇ１ꎬ ３ꎬ ＰＡＮ Ｗｅｉ￣Ｄｏｎｇ１∗
( １. Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｆｏｒ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ａｎｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００２ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｃｏｌｌｅｇｅ
ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ３. Ｇｕｉｙａｎｇ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅꎬ Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００２ꎬ Ｃｈｉｎａ )
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｏ ｆｕｒｔｈｅｒ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｅｒｆｅｃｔ ａｂｏｕｔ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａꎬ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ￣ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ
ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｉｎ Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｂｉｓｔｏｒｔａ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ (ＨＰＬＣ) ａｎｄ ｕｌｔｒａｖｉｏ￣
ｌｅｔ (ＵＶ) ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｓｓａｙꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ｗｉｔｈ
Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ ｐｈｅｎｙｌ ｃｏｌｕｍｎ (２５０ ｍｍ × ４.６ ｍｍꎬ ５ μｍ) ａｎｄ ａ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ０.１％ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ
ａｃｉｄ ｂｙ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ ａｔ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １.０ ｍＬ􀅰ｍｉｎ￣１. Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２７６ ｎｍ ｂｙ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｆｒｏｍ
１９０－４００ ｎｍ. Ｏｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｓｉｄｅꎬ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｃａｓｅｉｎ Ｍｅｔｈｏｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ａｐｐｅｎｄｉｃｅｓ ＸＢ ｉｎ Ｐｈａｒ￣
ｍａｃｏｐｏｅｉａ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ｒｅｐｕｂｌｅｃ ｏｆ Ｃｈｉｎａ (２０１０ ｅｄ)ꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｃａｌｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｄ ｃｈａｎｇ
ｏｆ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃａｓｅｉｎ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｗａｓ ０.０５１－１.０２ μｇ ｆｏｒ
收稿日期: ２０１４￣０５￣２６　 　 修回日期: ２０１５￣０１￣２７
基金项目: 中国科学院“西部之光”人才培养计划项目[Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｗｅｓｔ Ｌｉｇｈｔ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ]ꎮ
作者简介: 娄华勇(１９８７￣)ꎬ男ꎬ贵州遵义人ꎬ硕士ꎬ研究方向为天然产物的研究ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｌｈｙ８７８２３＠ １６３.ｃｏｍꎮ
∗通讯作者: 潘卫东ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ硕士生导师ꎬ主要研究方向为天然产物的研究ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｗｄｐａｎ＠ １６３.ｃｏｍꎮ
ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄꎬ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ９９.１％ꎬ １００.３％ꎬ １０１.９％ꎬ ａｎｄ ＲＳＤｓ ｗｅｒｅ ２.１％ꎬ ０.８％ꎬ ２.０％ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｗａｓ ２.０９－１０.４８ μｇ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓꎬ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ １０２.２％ꎬ １００.２％ꎬ １０２.１％ꎬ ａｎｄ
ＲＳＤｓ ｗｅｒｅ １.３％ꎬ １.４％ꎬ １.０％ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｂｏｔｈ ｍｅｔｈｏｄｓ ｈａｄ ａ ｐｒｅｆｅｒａｂｌｅ ｒｅｓｕｌｔ ｆｏｒ ｍｅｔｈ￣
ｏｄｏｌｏｇｙ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ. Ｏｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｈａｎｄꎬ ｔｈｅ ｅｓｓａｙ ａｌｓｏ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｄ ｔｈｅ Ｐ. ｂｉｓｔｏｒｔａ ｆｒｏｍ Ｇｕｉｚｈｏｕ ａｎｄ Ｓｉｃｈｕａｎꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ
ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎ ｏｆ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｉｎ Ｐ. ｂｉｓｔｏｒｔａ ｈａｄ ａ ｇｒｅａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｏｔｈ Ｇｕｉｚｈｏｕ ａｎｄ
Ｓｉｃｈｕａｎꎬ ｔｈｅ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｉｎ Ｐ. ｂｉｓｔｏｒｔａ ｆｒｏｍ Ｇｕｉｙａｎｇ ｗｅｒｅ １.５３ꎬ １.３７ꎬ １.１２ ｍｇ􀅰ｇ￣１ ａｎｄ ５.０１ꎬ ４.８７ꎬ ５.２３ ｍｇ
􀅰ｇ￣１ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ａｎｄ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｉｎ Ｐ. ｂｉｓｔｏｒｔａ ｗｅｒｅ ２.７２ꎬ ３.３５ꎬ ２.４６ ｍｇ􀅰ｇ￣１ ａｎｄ ５.０１ꎬ ４.８７ꎬ ５.２３ ｍｇ
􀅰ｇ￣１ ｆｒｏｍ Ｃｈｅｎｇｄｕꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ａ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ ｔｈｉｓ ｉｓｓｕｅ ｗａｓ ｍａｄｅ ｗｉｔｈ ｍａｎｙ ｆａｃｔｏｒｓꎬ ａｓ ｆａｒ ａｓ ｗｅ ｋｎｏｗꎬ ｔｈｅ
ｄｅｃｉｄｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｔｈｅ ａｌｔｉｔｕｄｅ. Ｔｈｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐ. ｂｉｓｔｏｒｔａ ｗａｓ ａｎ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ８００
ｔｏ ３ ０００ ｍꎬ ｗｈｉｌｅꎬ ｔｈｅ ａｌｔｉｔｕｄｅ ｏｆ Ｇｕｉｙａｎｇ ａｔ ｒａｎｇｅ ｏｆ ８００ ｔｏ １ ６００ ｍ ａｎｄ ａｌｔｉｔｕｄｅ ａｔ ｒａｎｇｅ ｏｆ １ ０００ ｔｏ ３ ０００ ｍ ｆｏｒ Ｃｈｅｎｇｄｕ.
Ｓｏꎬ ｗｅ ｂｅｌｉｖｅｄ ｔｈａｔ ａｌｔｉｔｕｄｅ ｏｆ Ｃｈｅｎｇｄｕ ｗａｓ ｍｏｒｅ ａｍｅｎａｂｌｅ ｔｏ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｈｅ Ｐ. ｂｉｓｔｏｒｔａꎬ ｗｈｉｃｈ ｆｕｔｈｅｒ ｃａｕｓｅｄ
ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ Ｇｕｉｙａｎｇ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｔｈｅｏｒｙ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｐｈａｒｍａｃｅｕ￣
ｔｉｃａｌ ｃｏｍｐａｎｙ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ Ｐ. ｂｉｓｔｏｒｔａ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｄｒｕｇｓ. Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｏｓｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｒａｐｉｄꎬ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｒｅ￣
ｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｉｎ Ｐ. ｂｉｓｔｏｒｔａ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｔｏ ｂｅ
ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｉｎ Ｐ. ｂｉｓｔｏｒｔａ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙꎬ ｔｈｅｓｅ ｄａｔａ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｃｏｍ￣
ｐｌｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｅｒｆｅｃｔ ａｂｏｕｔ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｂｉｓｔｏｒｔａꎬ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄꎬ ｔａｎｎｉｎꎬ ＨＰＬＣ
　 　 拳参为蓼科蓼属(Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ) 植物拳参(Ｐｏ￣
ｌｙｇｏｎｕｍ ｂｉｓｔｏｒｔａ)的根茎ꎬ多年生草本ꎬ别名紫参、牡
蒙、山是、草河车、倒根草ꎬ一般春、秋季挖取根茎ꎬ除
去须根ꎬ洗净ꎬ晒干ꎮ 主产华北、西北及山东、江苏、
湖北等地ꎮ 含有鞣质、淀粉、糖及果胶等(刘晓秋
等ꎬ２００４)ꎬ其中主要含有的鞣质是没食子酸ꎬ并没
食子酸以及可水解鞣质和缩合鞣质(Ｄｕｗｉｅｇｕａ ｅｔ ａｌꎬ
１９９９)ꎮ 气味无臭ꎬ味干涩ꎬ性凉ꎬ具有清热解毒、止
泻、止血、镇惊息风等功效(曾靖等ꎬ２００３ꎻ黄玉珊
等ꎬ２００４)ꎬ常用治疗肠炎、痢疾、肝炎、热病肿痛、破
伤风、毒蛇咬伤、口腔炎、赤痢脓血、咽喉炎等病症ꎮ
现代抗菌实验表明拳参对金黄色葡萄球菌、绿脓杆
菌、枯草杆菌等均有抗菌作用(刘春棋等ꎬ２００６)ꎮ
其里面含有的大量鞣质也有收涩止泻的作用ꎬ因此ꎬ
对中药拳参的研究具有重要的意义和价值ꎮ
近年来ꎬ国内对拳参中没食子酸的含量也有文
献报道(黄加宝等ꎬ２００７ꎻ刘瑞等ꎬ２００５)ꎮ 但中国药
典对其含量的测定方法却没有具体标准ꎬ而对拳参
中总鞣质的含量测定目前尚未见有文献报道ꎮ 因
此ꎬ本文将对拳参中没食子酸及总鞣质的含量测定
进行条件优化及探索ꎬ希望找到一条切实可行的测
定方法ꎬ为今后药典标准的提升提供一定依据ꎮ
１　 材料与方法
１.１ 仪器、试剂与材料
Ａｇｉｌｅｎｔ￣１１００ 高效液相色谱系统(Ｇ１３１１Ａ 泵、
Ｇ１３１５Ａ ＤＶＤ检测器、Ａｇｉｌｅｎｔ 色谱工作站)ꎬ紫外光
谱(ＵＶ)为惠普 ＨＰ￣１２００ 紫外分光光度测定仪ꎬ
ＳＧ５２００Ｈ超声波清洗仪(河南兄弟仪器设备有限公
司)ꎬ梅特勒￣托利多 ＡＬ２０４ 电子天平(上海速展计
量仪器有限公司)ꎬ旋转蒸发仪 ( Ｂ￣４８０ꎬ瑞士 Ｂｕ￣
ｃｈｉ)ꎬ磷钼钨酸试液 (按 «中华人民共和国药典»
２０１０版一部附录 ＸＶＢ配置)ꎻ干酪素(化学纯)ꎬ色谱
纯乙腈和甲醇为天津登科化学试剂有限公司产品ꎬ
水为重蒸水并经 ０.４５  ＳｙｍｂｏｌｍＡ＠ ＠ ｍ 水系滤膜
过滤ꎬ其他试剂均为分析纯ꎮ
没食子酸对照品(购自北京世纪奥科生物技术
有限公司)ꎬ纯度≥９８％ꎮ 拳参药材为贵阳和成都不
同批号产品ꎮ
１.２ 没食子酸的含量测定
１.２.１ 色谱条件　 色谱柱为 Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ Ｐｈｅｎｙｌ柱
(２５０ ｍｍ × ４.６ ｍｍꎬ ５ μｍ)ꎬ流动相 Ａ为甲醇ꎬＢ 为
０.１％磷酸溶液ꎻ梯度洗脱(０ ｍｉｎꎬ ５％ Ａꎻ １０ ｍｉｎꎬ
２０％ Ａꎻ ２０ ｍｉｎꎬ ６０％ Ａ)ꎻ柱温 ３０ ℃ꎬ检测波长为
２７６ ｎｍꎬ流速为 １ ｍＬ􀅰ｍｉｎ￣１ꎬ进样量 １０ μＬꎮ
１.２.２ 对照品溶液的配置　 精密称取没食子酸对照
品 １０.３ ｍｇ到 １００ ｍＬ容量瓶中ꎬ用甲醇溶解并定容
至刻度ꎬ再精密量取 ２５ ｍＬ到 ５０ ｍＬ容量瓶中ꎬ加甲
醇至刻度制成 ５１.５ μｇ􀅰ｍＬ￣１的对照品溶液ꎬ备用ꎮ
１.２.３ 供试品溶液的制备　 精密称取拳参粉末(均过
６０目筛)约 １ ｇꎬ置于 １００ ｍＬ具塞三角瓶中ꎬ加 ８５％
甲醇 ２５ ｍＬꎬ超声提取两次ꎬ每次 ３０ ｍｉｎꎬ过滤ꎬ用
３５７６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 娄华勇等: 拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定
８５％甲醇洗涤滤渣ꎬ合并滤液和洗涤液ꎬ５０ ℃旋转
蒸干ꎬ加甲醇溶解并转移至 ５０ ｍＬ容量瓶中ꎬ甲醇定
容ꎬ以 ０.４５ μｍ微孔滤膜滤过ꎬ滤液作为供试品溶液
(范晓红等ꎬ２０１１)ꎬ备用ꎮ
１.２.４ 标准曲线的制备　 按“１.２.１”的色谱条件ꎬ精
密吸取对照品溶液 １.０、２.０、５.０、１０.０、１５.０、２０.０ μＬ
进样ꎬ测定峰面积ꎬ并以色谱峰峰面积对对照品的量
回归(包括原点)制作回归方程ꎮ
１.２.５ 方法学考察　 没食子酸对照品溶液ꎬ重复进样
６次ꎬ以考察方法的精密度ꎻ分别取拳参样品溶液 ６
份ꎬ按供试品溶液的制备方法制备后进样ꎬ以考察方
法的重复性ꎻ将拳参样品溶液分别于 ０、３、６、９、１２、
２４ ｈ 后进样ꎬ以考察样品的稳定性ꎻ精密称取已知
没食子酸含量的拳参粉末 １ ｇꎬ加入没食子酸标准溶
液 １ ｍＬꎬ混合后按照“１.２. ３”项下方法处理ꎬ按照
“１.２.１”色谱条件进样ꎮ 用标准曲线法计算回收率ꎮ
１.２.６ 样品的含量测定　 分别取贵阳和成都不同批
号的拳参粉末 １ ｇꎬ各 ２ 份ꎬ精密称定ꎬ按照“１.２.３”
项下方法处理ꎬ按照“１.２.１”色谱条件测定ꎬ计算各
批号没食子酸的含量ꎮ
１.３ 总鞣质的含量测定
１.３.１ 对照品溶液的配置　 精密称取没食子酸对照
品 ５２.４２ ｍｇꎬ置 １００ ｍＬ 棕色量瓶中ꎬ加水溶解并稀
释至刻度ꎬ精密量取 ５ ｍＬ 至 ５０ ｍＬ 棕色量瓶中ꎬ用
水稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ即得没食子酸对照品溶液
５２.４２ μｇ􀅰ｍＬ￣１ꎬ备用ꎮ
１.３.２ 标准曲线的制备　 精密量取对照品溶液 １.０、
２.０、３.０、４.０、５.０ ｍＬ分别置于 ２５ ｍＬ棕色量瓶中ꎬ各
加入磷钼钨酸试液 １ ｍＬꎬ再分别加水 １１、１０、９、８、７
ｍＬꎬ用 ２９％碳酸钠溶液稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ以相应的
容积作为空白ꎬ照紫外￣可见分光光度法(中国药典
２０１０版ꎬ附录ⅤＡ)ꎬ３０ ｍｉｎ 后ꎬ在 ７６０ ｎｍ 波长下测
定吸光度ꎬ以吸光度为纵坐标( ｙ)ꎬ浓度为横坐标
(ｘ)ꎬ绘制标准曲线ꎮ
１.３.３ 供试品的制备　 分别取不同批号的拳参粉末
１ ｇꎬ至 ５０ ｍＬ棕色量瓶中ꎬ加蒸馏水 ２５ ｍＬꎬ放置过
夜ꎬ超声处理 ３０ ｍｉｎꎬ放冷ꎬ用蒸馏水稀释至刻度ꎬ摇
匀ꎬ静置ꎬ过滤ꎬ残渣再加 ２５ ｍＬ蒸馏水超声 ３０ ｍｉｎꎬ
过滤ꎬ合并滤液至 １００ ｍＬ 棕色量瓶中ꎬ用蒸馏水稀
释至刻度ꎬ摇匀ꎬ即得ꎮ
１.３.４ 总鞣质的计算　 (１)总酚测定:精密量取供试
品溶液 ２ ｍＬꎬ置 ２５ ｍＬ棕色量瓶中ꎬ照“１.３.２”项下
的方法ꎬ至“加入磷钼钨酸试液 １ ｍＬ”起ꎬ加水 １０
ｍＬꎬ依法测定吸光度ꎬ用标准曲线计算供试品溶液
中总酚的量ꎮ (２)不被吸附的多酚:取供试品溶液
２５ ｍＬꎬ加至已盛有干酪素 ０.６ ｇ的 １００ ｍＬ具塞锥形
瓶中ꎬ密塞ꎬ至 ３０ ℃水浴中保温 １ ｈꎬ时时振摇ꎬ取
出ꎬ放冷ꎬ摇匀ꎬ过滤ꎬ弃去初滤液ꎬ精密量取续滤液
２ ｍＬꎬ置 ２５ ｍＬ 棕色量瓶中ꎬ照标准曲线制备项下
的方法ꎬ自“加入磷钼钨酸试液 １ ｍＬ”起ꎬ加水 １０
ｍＬ依法测定吸收值ꎬ用标准曲线计算供试品溶液中
不被吸附的多酚含量ꎮ 按下式计算总鞣质的含量:
鞣质含量＝总酚量－不被吸附的多酚量(粟世婷等ꎬ
２００８ꎻ谢道刚等ꎬ２００６ꎻ胡小刚等ꎬ２００１)ꎮ
１.３.５ 方法学考察　 精密量取对照品溶液 ２ ｍＬꎬ置
于 ２５ ｍＬ棕色量瓶中ꎬ按“１.３.２”项下方法ꎬ至“加入
磷钼钨酸试液 １ ｍＬꎬ再加水 １０ ｍＬ”起ꎬ在 ７６０ ｎｍ下
连续 ６次测定吸光度ꎬ以考察方法的精密度ꎻ分别取
拳参粉末 ６份ꎬ精密称定ꎬ按“１.３.３”项下方法平行
制备供试品溶液ꎬ按“１.３.４”项下测定并计算样品中
总鞣质的含量ꎬ以考察方法的重复性ꎻ分别在 ０、３、
６、９、１２、２４ ｈ时间点精密量取供试品溶液 ２ ｍＬꎬ置
于 ２５ ｍＬ棕色量瓶中ꎬ按“１.３.２”项下方法ꎬ至“加入
磷钼钨酸试液 １ ｍＬꎬ再加水 １０ ｍＬ”起ꎬ在 ７６０ ｎｍ下
测定吸光度ꎬ以考察样品的稳定性ꎻ精密称取已知含
量的拳参粉末 ０.５ ｇꎬ加入没食子酸标准溶液适量ꎬ
按“１.３.３”项下方法处理ꎬ按“１.３.４”方法测定并计
算样品中总鞣质的加样回收率ꎮ
２　 结果与分析
２.１ 没食子酸标准图谱及方法学考察
由图 １ 可知ꎬ没食子酸在该色谱条件下可实现
较好的分离ꎬ根据没食子酸峰面积(Ａ)对对应的进
样量(ｍ)进行线性回归ꎬ得回归方程为 Ａ＝ ２ ３７６ ｍ＋
６.１４４(Ｒ２ ＝ ０.９９９)ꎬ由此可知ꎬ没食子酸在 ０.０５１ ~
１.０２ μｇ 范围内ꎬ线性关系良好ꎻ没食子酸对照品在
重复进样 ６次的情况下ꎬＲＳＤ 为 ０.５７％ (ｎ ＝ ６)ꎬ表
明仪器精密度良好ꎻ取同一产地样品 ６ 份按“１.２.３”
项下方法进行制备后进样ꎬ测得没食子酸峰面积的
ＲＳＤ为 １.６８％(ｎ＝ ６)ꎬ表明该方法的重复性良好ꎻ稳
定性试验表明ꎬ拳参样品溶液的 ＲＳＤ 为 ０.６３％(ｎ ＝
６)ꎬ表明供试品溶液在 ２４ ｈ内稳定ꎻ由表 １可知ꎬ没
食子酸高、中、低浓度的平均回收率分别为 ９９.１％、
１００.３％、１０１.９％ꎬＲＳＤ 分别为 ２.１％、０.８％和 ２.０％ꎬ
表明方法的精密度好ꎮ
４５７ 广　 西　 植　 物　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ３６卷
图 １　 没食子酸对照品溶液(Ａ)和供试品(Ｂ)的 ＨＰＬＣ图谱
Ｆｉｇ. １　 ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ (Ａ) ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ (Ｂ)
表 １　 没食子酸回收率试验结果
Ｔａｂｌｅ １　 Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｆ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ
项目
Ｉｔｅｍ
理论含量
Ａｃａｄｅｍｉｃ ｃｏｎｔｅｎｔ
(ｍｇ)
加入量
Ａｄｄｅｄ ｃｏｎｔｅｎｔ
(ｍｇ)
测得量
Ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｒｅｓｕｌｔ
(ｍｇ)
回收率
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ
(％)
平均回收率
Ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ
(％)
ＲＳＤ
(％)
高浓度
Ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
１.２２７ １.４７６ ２.６８４ ９８.７
１.２２５ １.４７６ ２.６４９ ９６.５
１.２２７ １.４７６ ２.７３６ １０２.２
９９.１ ２.１
中浓度
Ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
１.２２８ １.２３ ２.４４７ ９９.１
１.２２５ １.２３ ２.４６８ １０１.１
１.２２５ １.２３ ２.４６３ １００.７
１００.３ ０.８
低浓度
Ｌｉｇｈｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
１.２２３ ０.９８４ ２.２３８ １０３.２
１.２２６ ０.９８４ ２.２４６ １０３.６
１.２２５ ０.９８４ ２.１９７ ９８.８
１０１.９ ２.０
表 ２　 总鞣质回收率试验结果
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎ
项目
Ｉｔｅｍ
理论含量
Ａｃａｄｅｍｉｃ ｃｏｎｔｅｎｔ
(ｍｇ)
加入量
Ａｄｄｅｄ ｃｏｎｔｅｎｔ
(ｍｇ)
测得量
Ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｒｅｓｕｌｔ
(ｍｇ)
回收率
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ
(％)
平均回收率
Ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ
(％)
ＲＳＤ
(％)
高浓度
Ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
０.０５１４ ０.０６２９ ０.１１６５ １０３.５
０.０５２１ ０.０６２９ ０.１１５２ １００.３
０.０５２６ ０.０６２９ ０.１１７３ １０２.９
１０２.２ １.３
中浓度
Ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
０.０５３２ ０.０５２４ ０.１０５１ ９９.０
０.０５２６ ０.０５２４ ０.１０４７ ９９.４
０.０５１９ ０.０５２４ ０.１０５５ １０２.３
１００.２ １.４
低浓度
Ｌｉｇｈｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
０.０５２９ ０.０４１９ ０.０９６３ １０３.６
０.０５２０ ０.０４１９ ０.０９４８ １０２.１
０.０５２５ ０.０４１９ ０.０９４６ １００.５
１０２.１ １.０
５５７６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 娄华勇等: 拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定
２.２ 总鞣质的标准曲线及方法学考察
按“１.３.２”项下方法ꎬ以吸光度为纵坐标(ｙ)ꎬ浓
度为横坐标(ｘ)ꎬ绘制标准曲线ꎮ 计算得回归方程
为 ｙ ＝ ０.１０７ｘ＋０.００７(Ｒ２ ＝ ０. ９９８５)ꎬ表明该方法在
２.０９~１０.４８ μｇ范围内线性关系良好ꎻ精密度实验结
果 ＲＳＤ为 １.５％ꎬ表明精密度良好ꎻ重复性实验 ＲＳＤ
值为 ２.７％ꎬ表明方法重复性良好ꎻ稳定性实验 ＲＳＤ
为 １.９％ꎬ表明稳定性良好ꎻ表 ２显示ꎬ总鞣质高、中、
低浓度的平均回收率分别为 １０２. ２％、 １００.２％、
１０２.１％ꎬＲＳＤ分别为 １.３％、１.４％和 １.０％ꎬ表明方法
的精密度好ꎮ
２.３ 没食子酸及总鞣质的含量测定
精密称取贵阳和成都不同批号的拳参粉末ꎬ分
别按照供试品的制备方法制备ꎬ再按照没食子酸和
总鞣质的含量测定方法分别测定ꎬ结果见表 ３ꎮ
表 ３　 拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定结果
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ
ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎ ｉｎ Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｂｉｓｔｏｒｔａ
产地(批号)
Ｐｌａｃｅ
(Ｎｕｍｂｅｒ)
没食子酸含量
Ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ
(ｍｇ􀅰ｇ￣１)
总鞣质的含量
Ｔｏｔａｌ ｔａｎｎｉｎｓ ｃｏｎｔｅｎｔ
(ｍｇ􀅰ｇ￣１)
贵阳 (１３０６０１)
Ｇｕｉｙａｎｇ (１３０６０１)
１.５３ ５.０１
贵阳 (１３０６０２)
Ｇｕｉｙａｎｇ (１３０６０２)
１.３７ ４.８７
贵阳 (１３０６０３)
Ｇｕｉｙａｎｇ (１３０６０３)
１.１２ ５.２３
成都 (１３０７０１)
Ｃｈｅｎｇｄｕ (１３０７０１)
２.７２ １０.２１
成都 (１３０７０２)
Ｃｈｅｎｇｄｕ (１３０７０２)
３.３５ １１.４６
成都 (１３０７０３)
Ｃｈｅｎｇｄｕ (１３０７０３)
２.４６ １１.２２
　 　 由表 ３结果可知ꎬ贵阳各批号拳参中没食子酸
和总鞣质的含量分别为 １. ５３、１. ３７、１. １２ 和 ５. ０１、
４.８７、５.２３ ｍｇ􀅰ｇ￣１ꎻ成都各批号拳参中没食子酸和
总鞣质的含量分别为 ２. ７２、３. ３５、２. ４６ 和 １０. ２１、
１１.４６、１１.２２ ｍｇ􀅰ｇ￣１ꎮ 初步分析ꎬ导致两地中没食
子酸和总鞣质含量差异的原因估计与海拔有一定的
关系ꎮ 拳参生长海拔一般为 ８００ ~ ３ ０００ ｍꎬ贵阳海
拔范围为 ８００~１ ６００ ｍꎬ而成都海拔大多为 １ ０００ ~
３ ０００ ｍꎮ 相比之下ꎬ成都地理地貌更适合拳参的生
长ꎬ这极有可能导致没食子酸和总鞣质的含量相对
于贵阳拳参较高ꎮ
３　 讨论与结论
３.１ 最佳波长的选择
对没食子酸对照品甲醇溶液的紫外可见光
(１９０~６００ ｎｍ)扫描发现ꎬ没食子酸在 ２７６ ｎｍ 处有
最大吸收波长ꎬ故选择 ２７６ ｎｍ为其检测波长ꎮ
总鞣质的测定采用磷钼钨酸一碳酸钠比色法ꎮ
分别精密吸取没食子酸对照品溶液和供试品溶液
２.０ ｍＬ置于 ２５ ｍＬ棕色量瓶中ꎬ加 １.０ ｍＬ磷钼钨酸
试液ꎬ再分别加水 １０ ｍＬꎬ用 ２９％碳酸钠溶液定容ꎬ
摇匀ꎬ放置 ３０ ｍｉｎꎬ以试剂空白为参比ꎬ在 ４００ ~ ９００
ｎｍ间进行波长扫描ꎬ结果显示没食子酸对照品溶液
和供试品溶液在 ７６０ ｎｍ处均有最大吸光度ꎬ故选择
７６０ ｎｍ为测定波长ꎮ
３.２ 色谱柱的选择
分别选择 ＳｉｎｏＣｈｒｏｍ Ｃ８、ＢＤＳ ＨＹＰＥＲＳＩＬ Ｃｙａｎｏ
和 ＢＤＳ ＨＹＰＥＲＳＩＬ Ｃ１８ꎬ均发现峰形拖尾严重ꎬ且分
离度不好ꎮ 因考虑到苯基柱的填料对酚羟基有较好
的保护作用ꎬ适合用来分离多酚类化合物ꎬ后改用
Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ Ｐｈｅｎｙｌ后ꎬ峰形和分离度均较好ꎮ
３.３ 流动相的选择
流动相分别考察了甲醇￣０.１％醋酸、甲醇￣０.４％
醋酸、甲醇￣０.１％磷酸、甲醇￣０.４％磷酸、乙腈￣０.１％醋
酸、乙腈￣０.４％醋酸、乙腈￣０.１％磷酸ꎬ发现流动相为
甲醇￣０.１％磷酸时ꎬ峰形较好ꎬ其他条件下ꎬ色谱峰较
拖尾ꎬ故选用甲醇￣０.１％磷酸为流动相ꎮ
３.４ 提取溶剂的选择
分别用 １００％、８５％、５０％甲醇以及纯水对拳参
进行小试提取ꎬ结果发现 ８０％的甲醇提取时ꎬ没食
子酸的含量最大ꎬ故选用 ８５％的甲醇作为提取溶
剂ꎻ用丙酮、５０％丙酮以及纯水对拳参进行提取ꎬ结
果发现纯水提取物中总鞣质的含量最大ꎬ故选用纯
水作为提取溶剂ꎮ
鞣质在 ２０世纪的研究中常作为杂质除去ꎬ随着
研究的深入ꎬ因其具有广泛的药理活性而越来越受
到研究者的关注ꎮ 没食子酸以及鞣质是拳参中的有
效成分之一ꎬ本研究分别用 ＨＰＬＣ 和 ＵＶ 等方法对
两者进行含量测定ꎬ有效地避免了其他成分对测定
的干扰ꎬ其精密度高、方法稳定可靠ꎬ可作为药材质
量控制的方法ꎮ
６５７ 广　 西　 植　 物　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ３６卷
本研究分别测定了贵阳和成都各批号拳参ꎬ从
结果可知ꎬ成都拳参中的没食子酸和总鞣质的含量
均大于贵阳拳参ꎬ这为今后对拳参药材的选定提供
了一定的理论依据ꎮ
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( 上接第 ７４０页 Ｃｏｎｔｉｎｕｅ ｆｒｏｍ ｐａｇｅ ７４０ )
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７５７６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 娄华勇等: 拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定