全 文 :广 西 植 物 Guihaia 29(6):857—859 2009年 11月
加工方法对黄花蒿提取青蒿素含量的影响
冯世鑫 ,马小军 ,2*,闫志刚 ,刘无垢3,覃兴华0,苏世东4
(1.广西壮族 自治区药用植物园,南宁 530023;2.中国医学科学院 药用植物研究所,北京 100094;
3.广西仙草堂制药有限责任公司,融安 545400;4.融安县农业技术推广站,融安 545400)
摘 要:通过对采收后的黄花蒿植株进行适 当的处理及干燥温度和贮藏时间对 比试验 ,采用 HPLC法测定,
探讨提高青蒿素含量的加工新方法。结果表明:整株立式阴晾一定时问后晒干的处理随着阴晾时间的增加青
蒿素含量呈抛物线状变化 ,4~5 d最高,达显著水平,之后逐渐下降;随着干燥温度的升高青蒿素含量呈下降
趋势 ,4O℃时叶片青蒿素含量较高;随着贮藏时间的延长青蒿素含量逐渐下降 ,贮藏 100 d后下降明显。采收
后整株立式阴晾 4~5 d后再晒干方法能提高黄花蒿叶片的青蒿素含量。4O℃的干燥温度能使叶片中青蒿素
含量损耗较少 。黄花蒿叶片的保质贮藏时问约 90 d。
关键词 :黄花蒿;加工 ;青蒿素
中图分类号:Q946 文献标识码 :A 文章编号 :1OOO一3142(2OO9)06—0857—03
Study 0n the machining method 0f the
artemisinin content of Artemisia atltlua
FENG Shi—Xin1,MA Xiao—Jun1,2 ,YAN Zhi—Gang1,
LIU Wu-Gou0,TAN Xing-Hua0,SU Shi-Dong
(1.Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants,Nanning 530023,China;2.Institute of Medicinal Plant Development,
Chinese Academy of Medical Sciences.Beijing 100094,China;3.Rong an Productivity Promotion Center,Rongan 545400,
China;4.Center for Popularization of Agricultural Technical of Rongan County,Rongan 545400,China)
Abstract:The new method which may improve the artemesinin content were determined by HPLC through the con—
trast test on processing the post-harvest plant by suitable treatment and drying temperature and storage time.The re—
sult showed that:firstly,with increasing airing time in the shade,the artemesinin content showed parabolic change af—
ter the whole were dried and processed,4— 5 d highest,tO significant level,and then gradually decreased;Secondly,
with the drying temperature increased,artemesinin content showed a downward trend,artemesinin content of leaves
was higher at 40 ℃ ;Thirdly,with prolonging storage time,artemesinin content decreased gradualy,and decreased
significantly after 100 d.The result showed that:the whole plant were verticaly aired 4—5 d and then dried in sun af-
ter harvesting,which could increase the artemesinin content of leaves.The artemesinin content of leaves had less loss
under dry temperature of 40℃ .The quality preservation of leaves was about 90 d.
Key words:Artemisia annua;machining artemesinin
黄花蒿(Artemisia anrlufz)为菊科蒿属植物,是
青蒿素的唯一来源植物,青蒿素及其衍生物是治疟
疾特效药(胡世林 ,2005)。黄花蒿 中青蒿素含量低、
不稳定,提取得率低是制约黄花蒿长期、大规模生产
发展的主要原因。不同的黄花蒿种质和生长地域性
及立地条件,直接影响黄花蒿中青蒿素含量(韦树根
等 ,2008;张荣沭等,2008;岑丽华等 ,2007;元 四辉,
2007);栽培中不 同的播种期 、给植株供氮量及不同
的采收期也会影响青蒿素含量 (蒋运生等,2008;王
满莲等,2009)。此外 ,加工方法及提取工艺也是影
响青蒿素含量和回收得率的重要技术环节。本文通
过对采收后的黄花蒿植株进行适当的处理及干燥温
收稿日期 :2009—06—17 修回Et期:2009—10—14
基金项目:广西科技攻关项目(桂科攻 0630002—3K)[Supported by Key Technologies Research and Development Program of Guangxi(063。oO2—3K)
作者简介:冯世鑫(1966一),男,广西横县人,管技师,从事药用植物繁育及栽培研究。
通讯作者(Author for correspondence,E—mail:xima@public.hta.net.cn)
858 广 西 植 物 29卷
度和贮藏时间对比试验,探讨提高青蒿素含量的加 法(熊春媚等,2007)进行。
工方法,为黄花蒿采收加工提供模式。
2 结果和分析
1 材料与方法
1.1材料
全自动恒温干燥箱、高效液相色谱仪、石油醚、粉
碎机、60目网筛及小型提取设备。供试品种为广西
药用植物园培育的黄花蒿新品种“桂蒿 l号”。实验
地点选在融安县长安镇黄花蒿规范化种植研究基地。
1.2方法
(1)采收后处理:将黄花蒿整株砍下 ,置于室内,
三株搭靠或靠栏 ,竖起、分散打开 ,立式如 自然生长
状,在常温下 阴晾,设 阴晾时间 0 d(当天采收当天
晒)、l d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d共 8个处理,然后
在太阳下晒 1-2 d至干,打落、筛 出叶片。(2)干燥
温度:将当天采收的黄花蒿 ,人工取下叶片,分别置
于 4O、5O、6O、7O℃ 的全 自动恒温干燥箱中烘 2 d。
另取一份置于室内常温阴干。分别测定它们的青蒿
素含量。(3)贮藏时间:取按传统加工处理(当天采
收当天晒)的黄花蒿叶片,用 洁净的布袋包装 ,在常
温下,置室内干燥通风处存放。分别在存放时间
3O、60、9O、l2O、150、180、2l0 d后采样 ,测定青蒿素
含量 。(4)青蒿素测定 :采用高效液相色谱(HPLC)
2.1整株立式阴晾时间对黄花蒿中青蒿素含量的影响
不同阴晾时间对黄花蒿叶片中青蒿素含量有不
同程度的影响 ,阴晾 0~4 d,青蒿素含量呈上升趋
势,4 d、5 d处理的最高,之后逐渐下降,阴晾 7 d处
理的青蒿素含量已低于0 d处理的。表 1方差分析
表明:处理 4和处理 5明显高于其它处理,达显著水
平(P
即:阴晾 4~5 d处理 ,能明显提高黄花蒿中青蒿素
含量 ,比当天采收当天进行暴晒的传统加工处理方
法提高 29.24 。
2.2干燥温度对叶片中青蒿素的影响
不同干燥温度对叶片青蒿素含量有不同程度的
影响,随着干燥温度的升高黄花蒿 中青蒿素含量逐
渐下 降,温度 达 70℃ 时 ,青 蒿 素 含 量 已下 降至
0.52 (表 2)。表 2方差分析表明,处理 1的青蒿素
含量最高,达极显著水平(P<0.01),各处理受温度影
响从小到大的排序为:处理 1>处理5>处理2>处理
3>处理 4,而区组间差异不显著(P>0.05),说 明不
同的温度处理影响黄花蒿 中青蒿素的含量。
表 1 不同的阴晾处理对青蒿素含量的影响
Table 1 Effects of different shade process on the content of artemesinin
注:各处理的多重比较采用 Duncan法;同列中不同小写和大写字母分别表示在5 和 1 的水平下差异显著。下同。
Note:Duncan’s multiple range test was used tO determine difference among treatments;Different small and capital letters in the same column
ndicate the significant difference at the 5 and 1 levels respectively.The same below.
2.3贮藏时间对黄花蒿中青蒿素含量的影响
贮藏时间对黄花蒿叶片中青蒿素含量有不同程
度的影响,随着贮藏时间的延长黄花蒿中青蒿素含
量逐渐下降,贮藏时间至 300 d时 ,青蒿素含量下降
至 0.59 (处理 10),已到了不能利用的临界值 。从
表 3方差分析得知 :处理 1、处理 2和处理 3的青蒿
素含量最高,达显著水平(P%0.01),三个处理间差
异不明显,其余处理受贮藏时间的影响,引起青蒿素
含量下降的幅度从小到大的顺序为:处理4>处理5
>处理 6>处理 7>处理 8>处理 9>处理 10。说明
黄花蒿叶片的贮藏时间在 9O d内青蒿素含量虽有
所下降 ,但差异不显著。
6期 冯世鑫等 :加工方法对黄花蒿提取青蒿素含量的影响 859
表 2 不同干燥温度对青蒿素含量的影响
Table 2 Effects of different drying temperatures
on the content of artemesinin
T
处
rea
鹏
tm en 。 。 雾誉
No. ,p era
、¨
I‘(%) Ⅱr(- ) lf‘(%) ‘ “
40 1.09
50 0.80
60 0.63
70 0.48
常温阴干 0.86
1.12 0.99 1.07aA
0.78 0.82 0.80bB
0.58 0.62 0.61cC
0.57 0.52 0.52De
0.83 0.88 0.86bB
表 3 不同的贮藏时间对青蒿素含量的影响
Table 3 Effects of different storage times on
the content of artemesinin
1 、
处理号 藏时问 重复 I 重复 I 重复Ⅲ 青
Co
蒿
nt
素
en
含
t o
量
f
n1 s a(gde)IRep(e ati)o RⅡep(e ati)o RⅢep(e ati)o av.ro nteltninUlNo time . (d) I ( ) Ⅱ ( ) Ⅲ ( ) ⋯ ⋯“
3 结论和讨论
(1)整株立式阴晾一定时间后晒干的处理能提
高黄花蒿 中青蒿素含量 ,阴晾 4~5 d后晒干达最
高,为 1.37 ,比当天采 收当天晒 的传统采 收法提
高 29.24 。其作用机理有待进 一步研究。(2)加
工干燥温度的高低直接影响黄花蒿中青蒿素含量,
随着干燥温度的升高青蒿素含量逐渐下降,4O℃时
含量较高,差异显著 ;70℃时最低 ,仅 0.52 。杨水
平等(1997)的研究认为 自然晒干的效果最好,青蒿
素含量比阴干的样品含量高 23.76 ,比6 0℃烘干
的高 101.7 。这与我们 的研究结果相一致。(3)
贮藏时间对叶片中青蒿素影响较大,随着贮藏时间
的延长青蒿素含量逐渐下降,常温条件下布袋存放
90 d青蒿素含量基本不变,之后便迅速下降。加工
生产中黄花蒿叶片不宜贮藏过长。(4)选择恰当的
检测方法,准确反映黄花蒿中青蒿素含量尤为重要,
目前青蒿素含量的测定有双波长薄层扫描法、紫外
分光光度法(李典鹏等,1995)、柱前衍生 RP—HPLC
法(刘金磊等,2007)、高效液相色谱法等,各种方法
有各 自的优缺点 。用高效液相色谱测定青蒿提取物
中青蒿素的含量 ,与柱前衍生测定方法进行比较,其
方法简单准确,分离效果好(熊春媚等,2007)。(5)
生产 中提取工艺的不同直接影响青蒿素提取得率 ,
郝金玉等(2002)的研究表明 ,微波辅助提取法 比用
传统的热提取、索 氏提取法需要的时间短,大大提高
提取速率。胡淼等(2006)应用超临界 CO。从黄花
蒿中萃取青蒿素,在其优化条件下萃取 4 h,萃取率
达 95 以上 ,萃 取物纯度在 15 以上。韦 国锋等
(2007)应用大孑L吸附树脂 法提取青蒿素时,选择对
青蒿素的吸附量大,解吸容易的 ADS一17树脂,用
90 乙醇作洗脱剂 ,青蒿素得率和提取率分别高达
0.3 和 75 以上 ,其含量大于 99 。
综上所述,黄花蒿的加工方法是影响黄花蒿青
蒿素提取得率、减少损耗的重要技术环节,在原料的
加工处理 、干燥温度、贮藏时间及提取工艺等方面均
为决定因素,处理得当将提高青蒿素产量。
参考文献 :
胡世林 ,许有玲.2005.纪念青蒿素 3o年[J].世界科学技术一
中医药现代化,7(2):l一2
Cen LH(岑丽华),XU L(徐 良),Huang ZG(黄茱岗),et a1.2007.
Effect of diferent latitude and different cultivation measures on
Arteannuin content of Artemisiaannua(不同纬区及不同栽培立
地条件对黄花蒿青蒿素含量的影响)I-J].AnhuiAgn Sci Bull
(安徽农学通报),13(13):46—47
Hao JY(郝金 玉 ),Han W(韩伟 ),SHi ChO(施超 欧),et a1.
2002. Microwave-assisted extraction of artemisinin from Arte—
misia~nnua(黄花蒿 中青蒿 素的微波辅助提 取)[J].Chin J
P m (中国医药工业杂志),33(8):385—387
Jiang YS(蒋 运生),Qi XX(漆 小雪 ),Wei JQ(韦记青),et a1.
2008.Effect of sowing date on growth,yield and A~emisimin of
Artemisia atz?lRcz(播种期对黄花蒿生长 、产量及青蒿素含量 的
影响)[J].Seed(种子)27(10):14—15
Li DP(李典鹏),Liang XY(梁小 燕),Chen XZ(陈秀珍).1995.
Determination of Qinghaosu in Artmisia an~ua in various colin-
ties,Gnangm by TLc_UV spectrophoto meter(采用薄层层析
紫外分光光度法测 定不 同产地黄花蒿 中青蒿素含量)[J].
Guihaia(广西植物),15(3):254
Lju JL(刘金磊),LI DP(李典鹏),Wei X(韦霄).2007.Determi—
nation of Artemisimin in Artemisia“ with RP-HPLC(黄花
蒿中青蒿素含量的 RP—HPLC法测定)[J].Guihaia(广西植
物),27(5):8O8—810
Wang ML(王满莲),Wei X(韦霄),Jiang YS(蒋运生),et a1.
2009.Effect of soil nitrogen levels on the growth,photosynt
hetic orooerties and artemisinin content of Artevnisia“ ““seed—
ling(氮对黄花蒿生长 、光合特性 和青蒿 素含量 的影响)[J].
Guihaia(广西植物),29(2):260—263
Wei GF(韦国锋 ),Huang ZL(黄祖 良),He YC(何有成).2007.
The extracion of Artemisinin by CRoPoRoUS resin(大 L吸附树
脂提取青蒿素的研究)[J].Ion Exchange and Adsorption(离
(下转第 801页 Continue on page 801)
6期 余丽莹等:两面针变种及类型间的小叶形态比较 801
类型一 弓曲羽 两侧
状脉 对称
类型二 弓曲羽 两侧
状脉 对称
类型三 弓曲羽 两侧
状脉 对称
毛两 弓曲羽 两侧不
面针 状脉 对称
直向行走,粗壮,占
叶宽 3.2
基部 和 叶尖 弯 曲,
粗壮 ,占叶宽 2.5%
基部 和 叶尖 弯 曲,
粗壮,占叶宽 2.2%
基部 和 叶尖 弯 曲,
细,占叶宽 1.7
每侧 9~1O条,以5O。~7O。从主脉开出,
二级脉环每侧 2~3个,脉环不规则
每侧 1O~11条 ,以 70。~85。从 主脉 开
出,二级脉环每侧 3~4个,脉环规则
每侧 8~9条,以 6O。~75。从 主脉开出,
二级脉环每侧 2~3个,脉环规则
每侧 9~10条,以6O。~75。从主脉开出,
二级脉环每侧 5~6个,脉环规则
不规
网状
规则
网状
则 脉岛发育不 1个分支 结环
完善
不规则
网状
不规则
网状
脉岛发育完 1个分支 结环
善
脉岛发育完 1个分支 结环
善
脉岛发育完 1个分支 结环
善
参考文献:
国家药典委员会.2005.中华人 民共和 国药典(一部)[M].北
京:化学工业出版社 :116一l17
黄成就.1997.中国植物志(第43卷第 2分册)[M].北京:科学
出版社 :13一l6
覃青云,杨卫豪.2003.两面针在 口腔护理用 品中的应用研究
[A].2003年中国牙膏工业学术研讨会(论文集),1—6
Huang ZX(黄治勋),Li ZH(李志和).1980.A study on the ac—
rive ingredient of anti-tumor of Zanthoxylum nitidum (两面针
抗肿瘤有效成分的研究 )EJ].Acta Ahimica Sin(化学学报),
38(6):535—542
Li DN(李丹妮),Liu HG(刘 华钢 ),Liu LM(刘丽 敏).2008.
Study of nitidine chloride inducing apoptosis in SMMG7721 cels
and its mechanism(氯化两 面针 碱诱 导人 肝癌 细胞 SMMD
7721凋亡及机制研究)[J].Pharmacologyand Clinics ofChi—
ngsg Matgria Medica(中药药理与临床),24(5):23—25
Liu HG(刘华钢),Wang BL(王博龙),Qin SH(秦三海),et a1.
2007a.Study on G2/M phase arrest and apoptosis of human
carcinoma of mouth floor KB cels in vitro induced by nitidine
chloride(氯化两面针碱体外诱导人 口腔鳞癌 KB细胞 G2/M
期阻滞及凋亡的研究)[J].LishizhenIVied Mat Med Res(时珍
国医国药),18(9):2 1O4—2 106
Liu HG(刘华钢),Qin SH(秦三海),Wang BL(王博 龙),el aI.
2007b.Effect of Nitidine chloride induced apoptosis in two naso—
pharyngeal carcinoma cell lines in vitro(氯化两面针碱体外诱导
两种鼻咽癌株的细胞凋亡)[J].w C J ·P S(华西药学杂
志),22(5):514—516
Liu HG(刘华钢),“u LM(刘丽敏),Luo D(罗丹),et a1.2009.
Antitumor efect and mechanism of nitidine chloride(氯化两面
针碱的体内抗肿瘤作用及其机制)[J].w c J·P s(华西药
学杂志),24(1):030—031
Liu SH(刘绍华),Qin QY(覃青云),Fang K(方垄 ),et a1.2005.
The determination of nitidine chloride and L-sesamin of Zan-
thoxylum nitidum growing in ten areas of Guang~(广西十个不
同产地的两面针 中活性 成分 的分析)[J].Guihaia(广西植
物),25(6):591—595
Wang BL(王 博龙 ),Liu HG(刘 华 钢),Yang B(杨斌 ),et a1.
2007.Anticancer activity of nitidine chloride from Zanthoxylum
nitidum on multidrug resistant KBV200 cels in vitro(氯化两面
针碱体外对人 口腔鳞癌多药耐药细胞 KBV200的抗癌活性)
_J].Chin J Pharm Toxicol(中国药理学与毒理学杂志),21
(6):512—515
Yu LY(余丽莹),Huang BY(黄宝优),Ihn XM(谭小明),et a1.
2009.The survey of wild germplasm of Zanthoxylum nitidum
in Guangxi(广西两面针野生种质资源调查研究)[J].Guihaia
(广西植物),29(2):231—235,284
(上接第 859页 Continue from page 859)
子交换与吸附)23(4):373—377
Wei SO(韦树 根),Ma XJ(马小军),Feng SX(冯 世 鑫),et a1.
2008.Evaluation on germpiasm resources of main production ar—
ea ofArtemisiaannu~inChina(中国黄花蒿主产区种质资源评
价)[J].Chink J ChinMatM (中国中药杂志),33(3):241—
243
XiongCM(熊春媚),Guo YD(郭亚东),Ma YH(马银海),et a1.
2007.Determination of Arteminine in Artemisia annua by
HPLC(高效液相色谱测定黄花蒿中青蒿素的含量)[J].Nat
Prod Res Dev(天然产物研究与开发),19:271—273
Yuan SH(元四辉).2007.Determination of Artemisinin in Arte—
misia annla by the ultraviolet spectrophotometric(不同产地栽
培青蒿中青蒿素的含量测定)[J].J Ch in Med Mat(中药材),
30(10):1 257—1 259
Zhang RS(张荣沐),ZHao M(赵敏),Han S(韩颂).2008.Study
on contents of Artemisinin in Artemisia~nnua introduced from
diferent provenances(引种的不同种源黄花蒿青蒿素含量的研
究)[J].Chem Industry Fore Products(林产化学与工业),28
(6):83—87
Zhong FL(杨水平),Chen HR,Chen M.1997.Effects of harvest
time,eompone ntparts of plant and drying methods on artemisi—
nin content[J,].Chin JChin Met Med,22(7):405—407