全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 27(5)：808— 810 2007年 9月
黄花蒿中青蒿素含量的 RP—HPLC法测定
刘金磊，李典鹏 ，韦 霄，黄永林 ，卢凤来，蒋运生
( 薯 广西植物研究所，广西桂林54106)
摘 要 ：建立黄花蒿中青蒿素的高效液相色谱测定方法 ，采用柱前衍生 RP—HPLC法测定黄花蒿中青蒿素的
含量 ，采用 ZORBAxxDB-c18(4．6 mm×15O mm，5 m)色谱柱 ，甲醇一0．01 mol／L醋酸 钠一醋酸缓 冲液
(pH5．8，体积比62：38)为流动相；检测波长：260 nm；流速：0．8 mL／min；柱温：3O℃。对广西、沈阳、北京、郑
州、苏州和杭州等不同产地的野生黄花蒿样品、以及同一产地不同采集时间黄花蒿样品进行检测，结果表明不
同地区青蒿素含量差异很大，同一地区不同采集时间黄花蒿样品的青蒿素含量也有差异。该法准确可靠、重
现性好，能准确地反映青蒿素含量的检测。
关键词：RP-HPLC；黄花蒿；青蒿素；含量测定
中图分类号：Q946 文献标识码 ：A 文章编号：1000-3142(2007)05-0808-0：4
Determination of artemi simi n in Artemisia
annua with RP-HPLC
LIU Jin-Lei，LI Dian-Peng ，WEI Xiao，HUANG Yong-Lin，
LU Feng-Lai，J IANG Yun-Sheng
(Guangxi Institute of Botany，Guangxi Zhuangzu Autonomous Region and the Chinese Academy of Sciences，Guilin 541006，China)
Abstract：The content of artemisimin in Artemidia annua was determined with the method of pre-column reac—
tion to RP—HLPC． The COlumn was ZORBAXXDB—C18(4．6 mm × 150 mm，5 m)，with mobile phase
CHaOH—O．01 mol／L NaAC—HAC buffer(pH=5．8，62：38)，flow rate 0．8 mL／min，column temperature at 30
℃．The results showed that there are great diversity in the content of artemisimin in Artemidiae annua from
different places and different harvest time．The method iS accurate，sensible and repeatable，and can be used
for the quality control of this herbal medicine．
Key words：Rp-HPLC；Artemisia annua L．；artemisimin；determination
青蒿素是从 中草药 黄花蒿 (Artemisia
L )中提取的有效成 分，是我 国唯一得 到国际承认
的抗疟新药，也是我 国第一个以一类新药出 口的化
学药品。青蒿素是一种含有过氧基 团的倍半萜内
酯，对脑型及抗氯喹性疟疾有特殊疗效。目前，青蒿
素的研究已引起国际上的高度重视，原料药材的规
范化栽培，品种的选择，SOP的制定等问题已提上
议程 。因此青蒿素的含量测定及测定方法的可信度
对于黄花蒿引种栽培以及控制药材质量有重要意
义。黄花蒿中青蒿素的含量测定方法文献已报道的
有：重量法(中华人民共和国药典)，比色法(李典鹏
等，1995)，高效液相色谱法(赵世善等，1986；黄海滨
等，1994)。由于文献报道的色谱检测方法因为保留
时间过长，分离效果不明显，为此我们建立一种高压
收稿日期：2007—02—09 修回日期：2007—06—16
基金项目：国家自然科学基金(30660222)；广西科技攻关项目(0663003)；中国科学院农办项目[Supported bythe National Natural Science Foundation
of China(30660222)；Key Technologies Research and Development Program of Guang)d(O6630O3)；the Chinese Academy of Sciences]。
作者简介：刘金磊(1980一)，男，内蒙古赤峰市人，研究实习员 ，主要从事植物资源的开发利用研究 。
通讯作者(Author for correspondence，E—mail：[dp@gxib．cn)
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5期 刘金磊等 ：黄花蒿中青蒿素含量的 RP—HPLC法测定 809
液相色谱法，该方法原料提取方法简便，便于操作，
且测定准确 、快速、灵敏 ，重复性好 。通过此法对广
西、沈阳、北京、郑州、苏州和杭州等不同产地的野生
黄花蒿样品、以及同一产地不同采集时间黄花蒿样
品进行 了青蒿素的含量测定 。
1 仪器与材料
Agilent一1100分析型高效液相色谱仪，包括二
极管阵列多波长检测器 DAD、四元梯度泵、在线真
空脱气机、7725i手动进样器、HP化学工作站(美国
Agilent公司)；R一114型旋转蒸发仪(瑞士 Bichi公
司制造)。
青蒿素对照品(中国药 品与生物制品检定所
(0202—9501)，纯度 99．1 )；黄花蒿(A．annua)样品
采自不同地区(阴干干燥后，磨成粉过 4O目筛备
用)，并经广西植物研究所韦发南研究员鉴定。石油
醚(tg点 60～9O℃)、无水乙醇、醋酸、醋酸钠、氢氧
化钠均是分析纯，甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水。
2 色谱条件
色谱柱：zORBAx xDB—C18柱(4．6 mm×15O
mm，5 m)；柱温：3O℃；流动相 ：甲醇一0．01 mol／L
醋酸钠一醋酸缓冲液(pH5．8，体积比62：38)；流速：
0．8 mL／min；检测波长：260 nm；进样量 ：1O L。理
论塔板数按衍生后青蒿素计算应不低于 2 500。在
本条件下，对照品衍生前色谱图(C)与衍生后色谱
图(B)与供试品衍生后色谱图(A)如图 1。
3 溶液的制备
3．1对照品溶液
精密称取青蒿素对照品 25 mg于 25 mL的容
量瓶中，加人无水乙醇溶液定容，配制成 1．0 mg／
mL的溶液备用。
3．2供试品溶液
称取黄花蒿样品干品约 0．5 g(过 4O目筛)包于
滤纸纸袋中，置索氏提取器，精密量取石油醚(沸点
60~90℃)80 mL，加热 回流提取 5 h后 ，放冷，取 出
提取液挥干石油醚，再置于 25 mL容量瓶中，加人
无水乙醇定容备用。精密吸取样品溶液 1．0 mL置
于1O mL容量瓶中，加人 0．2 氢氧化钠溶液 5
mL，混合均匀后放人 5O℃的恒温水浴中加热 3O
min，取出冷却至室温，加人 0．08 mol／L的醋酸定
容至刻度混合均匀后，分别用 0．45 m微孔滤膜过
滤，滤液作为供试品溶液备用 。
O 1 2 3 4 5 min
图 1 青蒿素对照品和样品的 HPLC图谱
Fig．1 HPLC chromatogram of Artemisia annua
4 方法学考察
(1)线形关系的考察：分别精密量取 1．0 mg／
mL青蒿素对照品溶液配制成 0．05、0．1、0．2、0．4、
0．6、0．8 mg／mL的青蒿素对照品溶液。精密量取
上述不同浓度的青蒿素对照品溶液 1．0 mL置于 1O
mL容量瓶中，加人 0．2 氢氧化钠溶液 5 mL，混
合均匀后放人 5O℃的恒温水浴中加热 30 min，取
出冷却至室温，加人0．08 mol／L的醋酸定容至刻度
混合均匀后，分别用 0．45 m微孔滤膜过滤，各精
密吸取 10 L滤液，注人液相色谱仪，按上述色谱条
件测定峰面积，以进样时的溶液浓度为横坐标，色谱
峰面积数值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程如
下 ：Y一2849．5X+9．334(r===0．999 1)。结果表明
进样量在 0．009～10．00／lg范围内呈良好的线形关
系。
(2)仪器精密度实验：分别吸取对照品衍生溶液
1O L连续进样 5次 ，测定峰面积。测得青蒿素峰
面积的 RSD为 0．3 。
(3)稳定性实验：分别吸取青蒿素衍生液，分别
于 0、1、3、5、10、24 h进样 1O L，测定 ，结果峰面积
的 RSD值为 1．3％。
重复性实验：分别称取黄花蒿样 品 6份，按
“3．2”项 的 方 法 处 理，依 次 测定 平 均含 量 为
0．485％，RSD1．6 。
(4)加样回收率实验：取已知青蒿素含量的黄花
蒿样品 0．5 g，共 5份，提取、旋干，加人一定量无水
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乙醇后再分别精密加入青蒿素对照品溶液 (O．2
mg／mL)1 mL定容到 25 mL容量瓶中，按供试品溶
液的衍生方法操作，平行测定 ，进样 10．O L，结果
平均加样回收率是 96．14 ，RSD 2．1 (表 1)。
表 1 黄花蒿的加样回收率 (n一5)
Table 1 Recovery rate of Artemisia annua
样品量 样 品中青 测得量
Size of 蒿素含量 Content of
sample Artemisimin additived
(g) content(mg) (mg)
A verage ㈤RSD
rate( )
0．5020
0．5031
0．5032
0．5025
0．5033
O．348
0．351
0．352
0．349
0．358
0．546
0．540
0．543
0．538
0．553
5 样品测定
分别称取不同产地的黄花蒿样品，按照 3．2供
试品溶液的制备方法处理，在上述色谱条件下进行
含量测定，结果见表 2。
分别称取同一产地不同采集时间的黄花蒿样
品，按 3．2供试品溶液的制备方法处理，在上述色谱
条件下进行含量测定结果见表 3。
表 2 不同产地黄花蒿样品青蒿素
含量测定结果 ( ，n一4)
Table 2 Determination of artemisimin content in
Arternisia annua from different places
表 3 同一产地不同采集时间黄花蒿
样品含量测定结果 ( ，n=4)
Table 3 Determination of artemisimin content in
Artemisia annua harvested in different times
6 讨论
(1)关于青蒿素的检测，现多数以紫外～可见分
光光度法居多。本文用 HPLC法对青蒿素的衍生
液进 行 检测 ，通过 色 谱 图说 明，由于 未衍 生 的 1
mol／L青蒿素对照品色谱峰峰面积过小不在线性范
围内，未衍生青蒿素样 品峰面积几乎与基线相平，所
以说在二极管阵列多波长检测器 DAD的条件下青
蒿素的检测只能以衍生状态方为可行。对照品在上
述色谱条件下只有单一峰型，同时对照品色谱峰没
有出现在对照品衍生后所对应的位置，这说明衍生
后所测定的色谱峰为单纯的青蒿素衍生所产生的。
(2)衍生反应完成后加入醋酸，中和衍生后所多
出的无机碱 ；所产生 的化合物在 260 nm处有最大
吸收峰 。本文采用 甲醇一O．O1 mol／L醋酸钠一醋酸
缓冲液(pH5．8，体 积 比 62：38)为流动相，分离效
果好，保留时间适中，且无干扰。方法简便、快速，重
现性好，适用于黄花蒿中青蒿素含量的测定。
(3)本文用高压液相色谱法分析我国北方的沈
阳、北京 ；中部的郑州 、苏州等地的黄花蒿样 品以及
广西不同产地的野 生黄花蒿样 品结果显示 ：不同产
地野生黄花蒿样品之间青蒿素含量均有明显的差
异，广西野生黄花蒿中青蒿素含量在 O．334 ～
0．992 之间，而沈阳、北京、郑州、苏州和杭州等地
野生黄花蒿中青蒿素的含量则低于 O．147％。可见
我国北部和中部的野生黄花蒿样品的含量明显偏
低；而广西野生的黄花蒿样品青蒿素含量普遍较高。
(4)对青蒿素含量进行质量监控 ，可确定黄花蒿
(下转第 724页 Continue on page 724)
l
● 2
4
l
● 6
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O 5 2 5 5
● ● ， ● ■ 9 4 5 4 7
9 9 9 9 9
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面的研究具有重要意义，本研究旨在为长江源区的
生态环境保护与治理提供科学的参考价值。
参考文献：
王伯荪，李鸣光，彭少麟．1989．植物种群学[M1．广州：中山大
学出版社：115—120
Cao YH(曹永慧)， PM(赖培淼)．2003．Study on Manglietia
yuyuanensis natural forest community interspecifc association
(乳源木莲天然林群落种问联结的研究)[J]．J Fujian Coll
Fore(福建林学院学报)，23(2)：124—127
Greig-Smith P．1983．Quantitative Plant Ecology[M]．3rd edi—
dork Oxlord：Blaekwel Scientifc Publications：105—112
Guo XY(郭逍宇)，Zhang JT(张金屯)，Gao HW(高洪文)．2003．
A study on interspecifc association of dominant species in B0 一
riochloa ischaemum community(白羊草群落优势种种问联结性
的分析)[J]．Acta Prat Sin(草业学报)，12(2)：14—19
Huang SN(黄世能)，Li YD(李意德)，Luo TS(骆 土寿)．2000．
脚 lamic of associations between tree species in a secondary trop—
ical montane rain forest at Jiardengling on Hainan IBand(海南 岛
尖峰岭次生热带地雨林树种问联结动态)[J]．Acta Phytoecol
Sin(植物生态学报)，24(6)：569—574
Kershaw KA，Looney JH．1986．Quantitative and Dy~ rlic Plant
Ecolog~M]．London：Edward Arnold Publication：78—94
Li w(李伟)，Zhong Y(钟扬)．1995．Association and correlation
analyse of the shoreline wetland plants in Futouhu Lake(湖北斧
头湖湖滨湿地植物的联结与相关分析)[J]．J Wuhan Bot Res
(武汉植物学研究)，13(1)：65—69
Myster RW 。Pickett ST．1992．DyaDi c of association betw een
plantsinten oldfields during 31 years of succession[J]．JEcol，
80：291— 302
Schluter D．1984．A variance test for detecting species association
with some example application[：J]．Ecology，65：998—1 005
WangBS(王伯荪)，Peng SL(彭少麟)．1985．Studies on the
measuring techniques of interspecific assoClation of lower-sub—
tropical evergreen-broadhavedforests．I．The explorationandthe
revision on the measuring formulas of interspeciIic association(南
亚热带常绿阔叶林种问联结测定技术研究L种间联结测式的
探讨与修正)[J]．Acta Phytoecol et Geobot Sin(植物生态学与
地植物学丛刊)，9(4)：274—285
Wen XQ(温秀卿)，Yang GH(杨改河)，Wang DX(王得祥)，eta1．
2004． Vegetation compartmentalization in source regions of
Yangtze River and Yellow River(江河源区植被分区)[J]．J
Northwest S ch UnivAgric Fore(NatSci Edi)(西北农林
科技大学学报(自))，32(2)：5-13
Wu YH (吴 玉 虎 )．2000．The flofistic characteristics in the
SOUlce~_r ofChangjiang(Yangtze)River(长江 源区植物 区系研
究)[J]．Acta Bot Boreal-Occident Sin(西北 植物学 报)，20
(6)：1 086—1 101
Wu H(吴豪)，Yu XG(虞孝感)．2001．Ecological environment in
the nature preserve of the source region of Changiiang River with
the deftneation of its ecological functioning zones(长江源自然保
护区生态环境状况及功 能区划分)[刀．Res Environ Yangtze
Basin(长江流域资源与环境)，10(3)：252—257
Xing F(邢 福)，Song R(宋 日)，QiBL(祁宝林)，et a1．2002．A-
nalysis to the interspecifc association of Stellera chamaejasme
population and other main plant species in Cleistogenes squarrosa
steppe(糙隐子草草原狼毒种群与其他主要植物的种间联结分
析)[J]．Acta Prat Sin(草业学报)，11(4)：64—51
Zhou XY(周先叶)，Wang Bs(王伯荪)，Li MG(李鸣光)．2000．
An analysis of interspecifc associations in secondary succession
forest communities in Heishiding Natural Reserve，Guangdong
Province(广东黑石顶自然保护区森林次生演替过程中群落的
种问联结性分析)[J]_Acta Phytoecol Sin(植物生态学报)，24
(3)：332—339
ZhuGL(朱桂林)，Yang HQ(杨洪琴)，Wd 7_J(卫智军)，et a1．
2004．Interspecitic associations in Stipa breviflora desert steppe
community(短花针茅草原群落种间联结研究)[J]．Acta Prat
Sin(草业学报)，13(6)：33—38
(上接第 810页 Continue from page 810)
最佳采收期。对于同一地点不同采收时间黄花蒿样
品进行检测，结果表明黄花蒿最佳采收期为八月初到
九月末，这与文献报道的相同(韦霄等，1999)。目前
对于不同产地黄花蒿中青蒿素的含量差异原因还有
待继续研究。
参考文献：
国家药典委员会．2005．中华人民共和国药典[M3．北京：化学
工业出版社：309
Huang HB(黄海滨)，Cen JM(岑家铭)．1994．Determination of
Qinghaosu in Artemisia口 RP-HPLC(RP-HPLC测定青蒿
中青蒿索的含量)[J]．．厂Guangxi Univ(广西大学学报)，19
(2)：194
u DP(李典鹏)，Liang XY(梁小燕)，Chen XZ(陈秀珍)．1995．
De termination of Qing haosu in Artemisia口” l‘口in various colin-
ties，Gnangxi by TLC-UV spectrophotometer(采用薄层层析一
紫外分光光度法测定 不同产地 黄花蒿 中青蒿素含量)[J]．
Gui~ (广西植物)，lS(3)：254
U F(李锋)，Wei X(韦胃)．1997．The investigation on the forms
ofArtemis／aa／l／~a in Guangxi(广西黄花蒿类型调查研究)
[J]．Guih~ (广西植物)，17(3)：231
Wei X(韦胃)，Li F(李锋)．1999．The effect of diferent cultiva-
tion measures on yield and artearmuin content of Artemisia an-
～ (不同措施对黄花蒿产量和青蒿紊含量的影响)[J]．．厂
Guangxi Acacl of Sci(广西科学院学报)，lS(3)：132
Zhao SS(赵世善)，Zeng MY(曾美怡)．1986．Determination of
Qinghaosu in Artemisia 口 ，n“z by High Performance Liquid
Chromatography(高效液相色谱法测定青蒿植物中的青蒿素)
[J]．Chin J Pharm Amz(药物分析杂志)，6(1)：3
维普资讯 http://www.cqvip.com