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Determination of total flavonoids,total phenols and antioxidant activity in aqueous extract of seven Callicarpa species

七种紫珠属植物水提物中总黄酮、总酚酸及其抗氧化活性的测定



全 文 :广西植物Guihaia32(6):845—848 2012年11月
DOI:10.3969/j.issn.1000一3142.2012.06.024
七种紫珠属植物水提物中总黄酮、总酚酸
及其抗氧化活性的测定
宁德生1,李典鹏1,黄 胜2,刘金磊1,谷陟欣2,颜小捷1,潘争红1*
(1;警薯掌i||广西植物研究所(广西植物功能物质研究与利用重点实验室),
广西桂林541006;2.九芝堂股份有限公司,长沙410008)
摘 要:采用紫外一可见分光光分度法测定裸花紫珠等7种紫珠属植物水提液中总黄酮、总酚酸的含量及清除
自由基的能力。结果表明:7种植物中的总黄酮、总酚酸含量差异很大,均以红紫珠含量最高,其黄酮、总酚酸
含量分别为3.75%和2.93%;清除自由基能力与总黄酮、总酚酸含量呈正相关性,亦以红紫珠清除自由基能
力最强。研究结果将为紫珠属植物资源的开发与利用提供理论基础。
关键词:紫珠属;总黄酮;总酚酸;抗氧化活性
中图分类号:Q946文献标识码:A 文章编号:1000一3142(2012)06一0845一04
andantioxidantactiVityinaqⅦe0鹏extract
ofseVenCaZ坛cnrpnspIecieS
NINGD}Shen91,LIDian_Pen91,HUANGShen92,LIUJin-Leil,
GUZhi-Xin2,YANXia旷Jiel,PANZhen舻Hon91。
(1.G眦疗舻i‰yL幽m£o删o,凡删io瑚zm∥砌踟i∞厶R∞∞砌n行d吮锇删io玎,(施n舭iJn豇砒Po,
B0缸”了,(讹”肛iZ^眦砣gA“f咖㈣螂RPgi册n蒯旃P函in酣eAm如了D,&i删硼,
Guilill541006,C11ina;2.,i“旃jf&7wC0.L以,C11a119s11a410008,C11llla)
Abstract:Thecontentoftotalf avonoids,totalphen01sndamio妇dantacti访tyinaqueouse】【tractof7国Z£imr抛species
weredetectedwithuv-、risiblesp ctmphotometric.Ther sllltsshoⅥ伦dthatnavonoidandphenolcontentsof hese(五Z既一
∞巾nspeciesw resignificantlydifferemand巳拢mr∞,.如已z缸pOssessedthe11ighestcontents,3.75%and2.93%,re—
spectively.M0reover,thesultsofcorrelationmlysisindicatedthattherewasapositivecorrelationbetweentheamiox—
idantcapacityandthecontentoftotalnavonoidsantotalphenoIs,and&垅∞r加例沈比a1SOshowedstro】唱estcaVen—
gingDPPH·radicalacti、rity.Thsresearchcouldpmvideth OreticalbasisforthedeVelopmentandutilizationof国垅一
fnr声nresources.
I(ey删s:[:aZfifnrp日;totalnavon ids;totalphenols;antio)(idantactivity
紫珠属(c口胁c口rp口)植物来源于马鞭草科,世
界上共有190余种,我国有46种,主要分布于长江
以南各省(中国科学院中国植物志编辑委员会,
1982),其中药用有30种(中国药材公司,1994),常
收稿日期:2012—05—05修回日期:2012一0807
基金项目:广西科技攻关项目(桂科攻11107010-3—1o);广西植物研究所基本业务费(桂植业10006和12010);与九芝堂股份有限公司横向合作项
目[supportedby heScientmcResearchandTechnologyDevelopmentProgramofGuang)d(111070l旷3—1o);ScienceResearchF0undationofGuang菇
InstituteofBotany(10006and12010);crosswiseRe earchP 。jectwithJiuz}litangC0.Ltd]
作者简介:宁德生(1982一),男,广西钦州人,助理研究员,主要从事天然产物研究与开发,(E—mail)ndshgxib@sina.com。
’通讯作者:潘争红,男,博士,主要从事天然药物研究与利用,(E—mail)pan9418@yahoo.com.cn。
万方数据
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用的有大叶紫珠、裸花紫珠、广东紫珠、杜虹花等。
紫珠属植物具有止血、抗炎、抗脂质氧化、抑菌及抗
肿瘤等活性(HayashiK,1997;卢素琳,1999;王立
明,1994;黄夏琴,1998;谢彬,1995),而抗菌消炎、抗
氧化、抗癌等活性与其含有丰富的黄酮和多酚类化
合物有关。目前市场上有关紫珠属的产品均是以水
提物为原料。因此,对紫珠属植物水提物中总黄酮、
总酚酸及其抗氧化活性分析具有重要的研究意义,
可为紫珠属植物的研究与利用提供科学的依据。
1 材料与仪器
1.1材料
紫珠属植物材料,除广东紫珠采自广东省外,其
余均采自广西壮族自治区境内,全部样品均由广西
植物研究所韦发南研究员鉴定并保存于广西植物研
究所标本馆。取紫珠属植物的叶子,阴干粉碎,过
40目筛备用。
1.2仪器和试剂
T6新世纪紫外可见光光度计(北京普析通用仪
器有限责任公司);BSllos赛多利斯电子天平(北京
赛多利斯天平有限公司);HH—S数显恒温水浴锅
(郑州长城科工贸有限公司)。木犀草素对照品(自
制,纯度97%以上,波谱数据与文献(董琳,2009)一
致);没食子酸(浙江省温州市瓯海精细化工公司);
Vc(湖南娄底市南化化学品有限公司);福林酚试剂
(上海荔达生物科技有限公司);DPPH·试剂(Sig—
ma—Fluka公司);氢氧化钠、亚硝酸钠、三氯化铝、碳
酸钠均为分析纯(汕头市西陇化工厂有限公司)。
2 结果与分析
2.1水提液样品的制备
分别精确称取各植物样品粉末两份,每份1g,
加入纯水25mL,超声提取1h,提取温度50℃,提
取液4OOor/min离心6min;滤渣再加入20mL纯
水超声提取1h,提取液4000r/min离心6min,合
并上清液,定容至50mL容量瓶中,即得样品水提
测试液。
2.2总黄酮含量测定
参照谌乐刚(2005)的方法进行。精确称取木犀
草素对照品10mg于25mL的容量瓶中,加入95%
乙醇溶解并定容于25mL,分别准确吸取此溶液
o.02、o.05、o.1、o.2、o.3、o.4mL于10mL的试管
中,各加入5%亚硝酸钠o.2mL,摇匀、放置6min;
加入10%的三氯化铝O.1mL,摇匀、放置6min后,
加入1m01/L氢氧化钠2mL,再加入纯水至总体积
为5mL,摇匀、放置15min,于510nm测定吸光
值。绘制标准曲线,得回归方程:y一4.6528z一
0.0281,R2一O.9976。
样品含量测定:精密吸取各样品测试液0.1mL
于10mL试管中,每份测试液各取两份,从“分别加
入5%亚硝酸钠O.2mL”起,按上述标准曲线方法
操作,分别测定各样品的吸光值(A),结果见表1。
表1 7种紫珠属植物中总黄酮含量
Table1 Totalf avonoidc ntentsof7CnZZic乜rp口species
2.3总酚酸含量测定
采用福林酚法(F—C法),测定总酚酸的含量
(Zhang,2011)。精确称取没食子酸15mg置于 0
mL的容量瓶中,用纯净水定容至50mL,准确吸取
此溶液o.005、o.01、o.02、O.04、o.06、o.08mL于
10mL试管中,分别加入O.05mL福林酚试剂,振
摇10s后放置2min,加入5%碳酸钠溶液o.5mL,
再加入纯水至总体积为5mL,摇匀,45℃水浴30
min后,冰水迅速冷却,于760nm测定吸光值。绘
制标准曲线,得回归方程:y—o.0058z+o.0335,R2
一O.9929。
样品含量测定:精密吸取各样品测试液O.02
mL于10mL试管中,以下步骤从“加入o.05mL
福林酚试剂”起,按上述标准曲线方法操作,分别测
定各样品的吸光值(A),结果见表2。
2.4抗氧化能力测定
参照Singh(2002)的方法,稍作修改。DPPH·
溶液的制备:精密称取DPPH·o.1971g,用无水
乙醇溶解,转移至500mL的容量瓶中,用无水乙醇
定容,摇匀后,取5mL置于50mL容量瓶,无水乙
醇定容,制得o.1mm01/L的储备液。
分别精确吸取一系列梯度的样品溶液于10mL
万方数据
6期 宁德生等:七种紫珠属植物水提物中总黄酮、总酚酸及其抗氧化活性的测定 847
的试管中,加纯水至2mL,再分别加入DPPH·储
备液2mL,混匀后,在室温下避光反应20min,在
517nm下测其吸光度,样品对DPPH·的清除率
(K)按下式计算:K一[1一(A。一A。)/A。]×100%,
式中:A:为样品溶液与无水乙醇混合后的吸光度;
A。为无水乙醇与DPPH·溶液混合后的吸光度。
根据上述清除率计算公式,建立不同浓度样品对自
由基清除率的量效关系曲线,通过量效关系曲线算
出自由基清除率为50%时样品的浓度值(JC;。)。以
Vc作为阳性对照,结果见表3。
表2 7种紫珠属植物总酚酸的含量
Table2 Totalphenolcontentsof7CoZZicnr夕nspecies
表3 7种紫珠属植物清除DPPH·的JGo
Table3 IC50ofscavengingDPPH·radical
红紫珠 y—O.9307z+o.0498,R2一O.9980
裸花紫珠 _).一O.7854z+o.0221,R2一o.9954
大叶紫珠 y—o.4589z+o.0083,R2一o.9950
杜虹花 y—O.4078z+O.0279,R2一O.9870
珍珠枫 了一O.3596z+o.0229,R2一o.9937
广东紫珠 y—O.286z+o.0152,R2一O.9987
枇杷叶紫珠y—o.1864z+o.0791,R2一O.9966
Vc v一61.643z—O.0246,R2一O.9975
2.5黄酮含量与抗氧化的相关性
为进一步了解各植物中总黄酮含量与抗氧化抑
制率大小的相关性,以各植物中总黄酮含量为横坐
标,抗氧化抑制率为纵坐标作图,结果见图1。
由图1可以得知,7种植物中总黄酮含量与
DPPH·抑制率呈正相关,相关系数为o.9915(P<
o.01),表明紫珠属植物中的黄酮成分与抗氧化活性
密切相关,是抗氧化活性的主要作用物质。
2.6酚酸类含量与抗氧化的相关性
酚酸类化合物也是天然的抗氧化物质,常与黄
酮类成分一起组成一个抗氧化体系,协同发挥抗氧
化作用,具有增效作用(熊皓平,2001),因此有必要
对酚酸类成分与抗氧化抑制率的相关性进行分析,
以总酚酸含量为横坐标,抗氧化抑制率为纵坐标作
图,结果见图2。
总黄酮含量TotaIf avonoidcontents(%)
7种植物中总黄酮含量与DPPH·抑制率的相关性
F培1Correlationbetweentotalf avonoid
contentsandDPPH·scaven百ngacti、7ity
总酚含量Totaphenocontents(%)
图2 7种植物中总酚酸含量与DPPH·抑制率的相关性
Fig.2Correlationbetweentotalphen01
contentsandDPPH·scavengingactivity
由图2可以看出,总酚酸含量与其抗氧化活性
之间有着显著线性关系,相关系数为o.9824(P<
o.01),表明紫珠属植物中的酚酸类成分也是其抗氧
化活性物质。
3 结论与讨论
(1)由表1和表2可知,紫珠属不同植物间的总
黄酮含量差异性显著,以红紫珠的含量最高,在粗提
液中总黄酮含量高达3.75%,裸花紫珠次之,枇杷
叶紫珠最低;7种植物中的总酚酸含量差异也显著,
也是以红紫珠的含量最高。同时,通过相关性分析
发现,7种紫珠属植物的总黄酮和总酚酸含量与其
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万方数据
848 广西植物 32卷
抗氧化活性呈正相关,说明黄酮类和酚酸类成分是
紫珠属植物的主要抗氧化物质。
(2)黄酮类成分的抗氧化能力与其苯环上的
3’,4,-邻二羟基结构有关,其它位上的羟基也起一定
作用(张红雨,1999)。紫珠属植物富含黄酮成分,且
大部分都具有酚羟基基团,如木犀草素及其配糖体、
芹菜素、槲皮素等多羟基黄酮化合物,因此具有较强
的清除自由基的能力。紫珠属植物常作为抗炎药物
进行研发,其显著的抗炎效果与抗氧化活性密切相
关。目前该属植物中的裸花紫珠、广东紫珠在I|缶床
抗炎消炎治疗上已取得较好的应用,相继开发出各
类产品,如裸花紫珠片、裸花紫珠胶囊、抗宫炎片等,
并且广东紫珠已收载于2010版中国药典中,而对于
同属其它植物,如红紫珠,其所含的黄酮均高于裸花
紫珠和广东紫珠,且目前研究和利用较少,因此作为
后备植物资源开发有着巨大的潜力。
(3)通过对7种常见紫珠属植物中总黄酮、总酚
酸含量以及抗氧化能力分析比较,可为该属植物的
开发与利用奠定基础,为今后的研发提供合理科学
依据,扩大可利用植物资源的储备。
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七种紫珠属植物水提物中总黄酮、总酚酸及其抗氧化活性的测定
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刊名: 广西植物
英文刊名: Guihaia
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引用本文格式:宁德生.李典鹏.黄胜.刘金磊.谷陟欣.颜小捷.潘争红.NING De-Sheng.LI Dian-Peng.HUANG Sheng.LIU Jin-Lei.
GU Zhi-Xin.YAN Xiao-Jie.PAN Zheng-Hong 七种紫珠属植物水提物中总黄酮、总酚酸及其抗氧化活性的测定[期刊论文]-广西植
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