全 文 ：TDZ对莴苣 (Lactuca sativa L．)器官发生及
9 7 c 乙烯形 的影响 < ， 2
徐华松 陆祖军 王永繁 黄学林
(中山大学生命科学学院生物学系，广州 510275)
}鸯 要 为了研究 TDZ在植物器官发生中的生理作用，用不同浓度的 TDZ替代 MS中的 BA，发
现仅用 I／50BA 浓度 (0．t nag／L)的 TDZ处理， 已相 当于用 BA处理所得芽数，可见它具有很
强的细胞分裂素活性；但是 TDZ又能显著促进乙烯形成．鞍低浓度时抑制莴芦的器官发生，可能
此时乙烯起着主导作用。
关键词 粤 建瞳；幽兰量尘；三
Effects of TDZ on organogenesis of lettuce(Lactuca
sativa L．1 and its ethylene production
Xu Huasong Lu Zhujun Wang Yongfan Huang Xuelin
(Department ofBiology，School 嘶 Scie~e．s埘 yD恤 H“Ⅲ e，女 Gu n挈hou 510275)
Abstract In order to study physiological function of TDZ in plant organogenesis
，
we used TDZ in
difemnt concentration as a substitute for BA jn M S．W e found that TDZ ls the nlOSt active
cytokinin．only 0．002 mg／L TDZ can get almost equal number of buds promotl~i in the medium
with 0．1 mg／L BA．But the formation of ethylene was found to be promoted greatly．The lower
concentration ofTDZ inhibited organogenesis ofLactuca a~tiva L．which might caused by ethylene．
Key words TDZ；Lactuca sat J~fl L．；organogenesis；ethylene
1980年，李鹏 飞等人 ⋯ 首次报道 了结球生菜莴苣品种 NewYork 515 的组织培养研究情
况，随后钟仲贤、刘选明等人 “。相继报道了莴苣其他品种的组织培养情况。从这些报道来看，多
以叶片为外植体，我们以下胚轴为外植体尚未见报道；而细胞分裂素多以 BA，KT为主，TDZ
(Thidiazuron)是人工台成的苯基尿衍生物之一，并具有很强的细胞分裂索活性 ¨，TDZ可诱导许
多植物芽的生成．如它可诱导烟草愈伤组织分化出芽 ¨，在以李予予叶、樱桃子叶及桃子子叶为外
植体也获得了成功 ，可在莴苣的组织培养中却未见有关这方面的报道。
通常组錾!培养是在密闭的容器中进行．瓶内所累积的气体包括乙烯。研究发现，乙烯对组织培养
物芽的诱导干¨ 形成有重要的作用、而 TDZ却能促进乙烯的产生 ¨，但是，TDZ促进乙烯的产生怎
样影响莴苣的器官发生仍未搞清楚，因此本文拟就这些问题进行初步J【l匀探讨
1997-09—08收稿
第 作者简介 棣华橙， ，t967~ 生、讲师，硕士，植物生理生化专业 现在华南农业大学生物技术学院工忭
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1期 棣华松等： TDZ对莴苣 (Lactuca saliva L．)器官发生及乙烯形成的影响 93
1材料与方法
1．1 外植体 试材用莴苣 (Lactuca sativa L．)万利包心生菜种子 (由广州市蔬菜研究所提供 )浸人
70％ 乙醇 0．5min，再用 0．2‰升汞浸泡5min、立即用无菌水清洗 4次、接种于已消毒的 0．6％琼脂
固化的基质上、培养至一定天数，在超净工作台上，切取下胚轴上段 (约O．5 cm)为外植体。
1．2 培养基 以 MS+NAA 0．88+BA 0．1(mg／L)为基本培养基、培养基中加 3％蔗糖和 0．62％琼
脂，pH 5．8，1．2kg／cm 压力下灭菌 15min
1．3 培养条件 培养室温度控制在 25±2℃、光强为 l 500-2 000Ix，每天照光 16 h，培养室湿度
保持为 7O％左右
1．4 TDZ的使用 以相当于 1／25、l／50、 l／100 BA 浓度 (0．1 mg／L)的 TDZ代替 MS中的
BA，加人 TDZ时用 DMFO (Dimethyl sulfoxide)溶解 TDZ直接加A 已消 毒的 MS培养基 中
(DMFO<50 L／500 mE)，趁琼脂未凝固前，在超净工作台上均匀分装于无菌的锥形瓶 中 【20
mL／每瓶)，待琼脂冷却凝固后，每瓶接 3块外植体，每种浓度的处理平行做 l2瓶，且重复一次。
1．5 乙烯的测定 将已标定体积的 50 mL锥形瓶 (内含 20 mL培养基 ／瓶)用于愈伤组织培养及芽
的诱导，培养至 27 d时，把三角瓶用医用橡胶密塞 24 h，然后抽取瓶中气样 l mL，用岛津 GC--9A
气相色谱仪测定乙烯，乙烯测定条件为：层析柱为 GDX-101填充玻璃柱、柱温 9O℃、进样 口温度
120℃，N2为载气，流速为60 mL／min。每种浓度处理做 4个平行样品，且重复一次实验
1．6 器官发生的观测 外植体接种在基本培养
基上，几天后即可见有愈伤组织从外植体切 口
处产 生 、2～3 d对实 验 的情况 进行 一 次详 细
观察，并认真记录每一次的详情。培养至 28
d时，对愈伤组织的发生率及重量、再生芽数
目进行统计。
2 结 果
经 TDZ处理后，5 d左右有愈伤组织产生
表 1IDZ
Table 1 EfectofTDZ on o rganogenesis orLaclttco．~ttivaL．
10咒 of TDZ‘ is with0I BA． ’⋯ tm 0n ∞ml r⋯ mg／L
且是从外植体切 口处开始膨胀、 15 d即可见愈伤组
织上有绿色芽点，随后芽长高 从表 l可知，TDZ有利于愈伤组织形成，即使 0．001 mg／LTDZ
(相当于 l／100BA 的浓度 )产生的愈伤组织量也比对照组多，浓度越大，产生的愈伤组织量也越
多，TDZ对愈伤组织的发生率均为 100％ 而且 O．002、0．004mg／LTDZ (相当于 l／25、l／50
BA 的浓度 )诱导所得芽数均高于对照组．可见，TDZ具有很强的细胞分裂素活性，从实验可知，
TDZ活性甚至是 BA的 100倍。
2．2 TDZ对愈伤组织生长及乙烯生成的影响
TDZ处理所得愈伤组织量高于对照组，且 TDZ处理组所产生的乙烯均高于对照。0．001 mg／L
TDZ浓度的再生芽数从表 l可知最少，此时乙烯释放量 比对照组多 l倍多 增加 TDZ浓度、 乙烯
释放量逐渐增大 (图 1)，再生芽数却不随乙烯增加而呈递减趋势。
3 讨 沦
莴苣的组织培养已有报道 。- ¨，万利包 tL生菜是广卅l市蔬菜研究所新培育 出的一个优 良品
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94 广 西 植 物 1 9卷
种，在华南地 广为舭培，本文首次报道 r芒的器官发生：从已报道过的莴苣组织培养 看，大多以
叶片为外植体，奉研究以下胚轴为外植体成功地获得丁再生芽，这不仅在理论上 在生产实践上 电有
应用价值
TDZ在芽的再生方i直『表现出重要的作用，实
验表哦：0．002、0．004mg／LTDZ处理所得芽数
均多于 0．I mg／L BA 的 显然，TDZ能促进植
物芽的再生 但存在一个浓度的选择问题 有报
道，低浓度 TDZ仅促进腋芽的增殖，而高浓度即
促进腋芽的增殖又提高芽的再生能力 ， 而且
从实验中可知 TDZ与生 J圭索娄酉 合使 效果更
好。 TDZ 可 促 进 植 物 纽 织 乙 烯 的 生 成 ” ，
Yip等人 分别用 TDZ和 BA 处理Ⅱ[豆lJ王轴耵l
小麦 萎蔫 l TDZ 的 乙烯释 放量 远 大于 BA 的 ，
正 因为 乙烯 的增 加导 致这些 生理效应。 为何 TDZ
浓度低时对万利包心生菜芽的再生有抑制作用?我
们的解释是：TDZ即使在低浓度时，其乙烯释放
的量大大高于 BA的 (图 1) 因此，此时己烯可
能起着丰导作用 导致再生芽数减少 例如黄学林
等人 。。 报道，用 TDZ替代 H 中的 KT时愈伤
组织变 绿变硬 ， 体胚 发生能力丧失， 且其乙烯生
戚羽l PAL活性 升高， 而 乙烯形 成 酶抑 制剂氯 化钴
(
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图 J TDZ对立伤组织生 K晟乙烯释放茄的影响
Fig．1 Efects ofTDZ On callus growth and ethylnene
ptoduction ofculture tissue ol Lactuca sativa L．
+ calI g~wth _1_一 Ethylene production
可抑制 TDZ的上述作H{，音l；分恢复其体胚发生能力。TDZ浓度高时，虽然乙烯释放量增大，但很
可能 TDZ具有很强的 胞分裂索活性，从而在 TDZ浓度增加时，乙烯的释放箭递增，再生芽数却
不随乙烯释放量的增大而递减。至 TDZ为什么能促进乙烯的产生?有待进一步研究
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