全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 28(6)：819— 822 2008年 11月
八角莲组织培养研究
唐凤鸾，李 锋，黄宁珍，付传明，赵志国
(； 薯 蒌广西植物研究所，广西桂林54106)
摘 要：以八角莲种子为外植体，MS为基本培养基，通过不同的激素种类和浓度配比，对八角莲进行组织培
养研究。结果表明：种子在 Ms+BA1．0 mg／L+IBA0．5 mg／L+GAs4．0 mg／L培养基上容易萌芽，发芽率为
72。4 ；培养基 MS+BA10．0 mg／L+GAs0。5 mg／L可诱导种子幼苗形成丛生芽；继代繁殖在 MS+BA(8．0
～ lo．o)mg／L+GA32．0 mg／L与低浓度 BA或无 BA的培养基上进行循环培养效果较好；MS+NAA1．0
mg／L+AC0．2 g／L适宜诱导生根获得再生植株，生根率 100 。带叶叶柄在 MS+BA1．0 mg／L+2-ip(0．5～
1．O)mg／L+NAA0．02 mg／L培养基上可诱导愈伤及根，直接形成再生植株。生根苗移栽成活率 9o 。
关键词：八角莲 ；组织培养；激素
中图分类号 ：Q943．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3142(2008)06-0819-04
Study on tissue culture of Dysosma versipellis
TANG Feng-Luan，LI Feng，HUANG Ning-Zhen，
FU Chuan-Ming，ZHAO Zhi-Guo
(Guangxi Institute of Botany，Guangxi Zhuang Autonomous Region and the Chinese Academy of Sciences，Guilin 541006，China)
Abstract：The seeds of Dysosma versipellis were used as explants for tissue culture in different culture media．
The results obtained from the present study were as folows：the seed germination rate could reach 72．4 on
MS+BA1．0 mg／L+IBA0．5 mg／L+GA34．0 mg／L；the medium which was good for the cluster buds induc—
tion in seed buds was MS+BA10．0 mg／L+GA30．5 mg／L：the medium of proliferation should be MS+BA
(8．O～10．O)mg／L+GA3 2．0 mg／L with low concentration of BA or no BA for circulation culture：the ideal
medium for root formation was MS+NAA1．0 mg／L+AC0．2 mg／L，and the rooting rate could reach 100 ；
tender leaves with stalk could be induced for callus and roots in MS+BA1．0 mg／L+2-ip(0．5～1．O)mg／L+
NAA0．02 mg／L．The survival rate of the seedlings was about 90％．
Key words：Dysosma versipellis；tissue culture；hormone
八角莲(Dysosma versipelis)为小檗科八角莲
属植物，是我国重要的药用植物。传统主治跌打损
伤、蛇伤及风湿关节痛。现代研究发现，其根茎中含
鬼臼毒素、槲皮素和山奈酚等多种有效化合物；其中
鬼臼毒素是一种具有抗癌活性的天然产物(徐仁生，
2004)，对抑制动物肿瘤和细胞癌变有明显效果(尚
明英等，2002)；槲皮素和山奈酚等有明显的抗病毒
活性(姚莉韵等，1999)，能治疗多种病毒性疾病；另
外山奈酚还对金黄色葡萄球菌及伤寒、绿脓、痢疾杆
菌等有抑制作用，可用于抗菌消炎。八角莲的花和
果实可治疗劳伤、气喘，叶则用于治疗哮喘、背痈溃
烂等疾病。目前，八角莲根茎提取物已有注射液生
产，可进行静脉注射，有消气化痰、解毒消肿、抗癌、
抗病毒、保肝、免疫调节、镇咳祛痰等功效，能治疗乳
腺癌、直肠癌、肝癌、鼻咽癌等多种癌症和流行性腮
腺炎、乙型脑炎、尖锐湿疣等病毒性疾病及流行性出
收稿El期 ：2007—02—12 修回Et期 ：2008一O1—20
基金项目：广西科技攻关项目(0322024—3B)[Supported by Key Science and Technology Program of Guangm(0322024～3B)]
作者简介：唐风鸾(1978一)，女，广西全州人，助理研究员，从事植物组织培养研究工作。
82O 广 西 植 物 28卷
血热等症(叶耀辉等，2005)。
自然条件下，八角莲生长缓慢，繁殖能力低下，
一 般生长数年才能人药。由于20世纪 6O年代过度
采挖，资源急剧减少，加上近年其根茎成为抗肿瘤中
成药的主要原料，需求量很大，每年的消耗量远远超
出年生产量，使八角莲种质资源濒临灭绝。因此，对
八角莲进行组织培养研究，对资源保护和中药生产
都有积极的意义。
I 材料与方法
1．1材料及消毒
实验用八角莲是从广西桂林六塘乡引回，种植
于广西植物研究所 中草药保存圃中的野生种。于 9
～ 1O月果实成熟季节，从苗圃中采集果大形正没有
病虫的完整果实，清洗干净后在无菌条件下进行整
果消毒，消毒时先用 7O％酒精擦试果实表面，后用
0．1 9／6的HgC1 浸泡 10 rain，无菌水浸洗 4～5遍。
1．2诱导种子发芽处理
将消毒好的果实切开，取出种子接种于培养基
MS、MS+BA0．5 mg／L+IBA0．1 mg／L+GA。2．0
mg／L、MS+ BA1．0 mg／L十 IBA0．5 mg／L十
GA。4．0 mg／L上。接种在 MS上的种子材料分别
进行3～7 d的暗培养处理，低温4℃处理24、48、72
h及在 培养室 中正常培养共 5个处理。MS+
BA0．5 mg／L+IBA0．1 mg／L+GA32．0 mg／L上
的材料一半正常培养，一半用蓝光培养。MS+
BA1．0 mg／L+IBA0．5 mg／L+GA。4．0 mg／L上
的材料只进行正常培养。
1．3培养基及培养条件
采用MS为基本培养基，根据不同培养阶段和
培养目的添加不同浓度及组合的 BA、GA 、2，4一D、
2一ip、IBA和NAA等。各培养基均附加 3．0 的蔗
糖和 0．5％的琼脂，pH为 5．8。培养条件：除在诱
导种子萌发时所做的培养处理外，其余均在温度(25
±3)℃，湿度 70 9／6，日光灯连续光 照 12～14 h／d，
光强 32．4～36／~mol·m ·s 的条件下培养。
1．4数据收集与统计分析
在培养的各个诱导阶段分别统计不同培养基上
的萌发率、增殖芽数、出愈率、生根率。通过观察其
生长情况，分析各个培养阶段八角莲的最佳诱导培
养基。统计方法为：萌发率 一出芽数／接种数 ×
100 9／5；增殖芽数为观测外植体增殖芽的平均个数；
出愈率：成愈数／接种数×100 9，6；生根率=生根数／
接种数x 100％；移栽成活率一移栽成活的苗数／移
栽苗的总数×100 。
表 l 不同培养基及不同培养处理对种子萌发诱导的影响
Table 1 Effects of different media and culture handling on induction of seeds germination
2 结果与分析
2．1不同培养基及培养处理对八角莲种子萌发的影响
从表 1可知：(1)不同培养基诱导种子萌发的结
果：培养基 MS上的种子萌发率最低，芽的生长也比
较差；培养基 MS+BA1．0 mg／L+IBA0．5 mg／L+
GA。4．0 mg／L的诱导效果最好，种子的萌发率高达
72．4 ，且芽色嫩绿，生长粗壮。培养基 MS+
BA0．5 mg／L+IBA0．1 mg／L+GA 2．0 mg／L的
诱导效果居中，种子的萌发率均达 5O 9，6。(2)光照
条件及低温对种子萌发的影响：MS培养基上的 3
个处理中，以正常培养的效果较好；经暗培养的种子
萌发率虽比正常培养的稍高，但芽细弱质量差；经低
温处理的种子萌发率最低，且芽和根均存在严重的
质量问题。MS+BA0．5 mg／L十IBA0．1 mg／L+
GA。2．0 mg／L培养基中蓝光培养亦不如正常培养
的好，萌发率较低，质量偏差。可见暗培养、低温处
6期 唐凤鸾等：八角莲组织培养研究 821
理及蓝光培养均不利于八角莲种子的萌发和生长，
而以常温日光灯培养最好。因此，诱导八角莲种子
萌发的最佳 培养基应 为 MS+BA1．0 mg／L+
IBA0．5 mg／L+GA。4．0 mg／L，培养条件为温度
(25±3)℃，日光灯照射。
2．2不同培养基对继代培养的诱导效果
(1)对吐芽种子苗的诱导效果(表 2)：将已萌发
生长良好的种子苗转接于 1～6号培养基上诱导丛
生芽，培养 40 d的结果如表 2。从表中可知，不同培
养基对八角莲吐芽种子苗的生长分化影响较大，其
中6号培养基诱导丛芽效果最明显，平均每个外植
体有 4个芽分化且生长好，5号培养基上愈伤生长
最好。八角莲种子苗的培养受 BA浓度的影响较
大，只有浓度≥8．0 mg／L才能有效地诱导其分化形
成丛芽，10．0 mg／L的诱导效果最好。
表 2 不同培养基对种子苗愈伤及丛生芽的诱导效果
Table 2 Effects of different media on induction of
eftl1US find clUster bllds of seed bI1ds
编号 培养基 分化状况
No． Medium (mg／I ) Cluster differentiation
(2)对扩繁增殖培养的影响(表 3)：将生长良好
的丛芽切成带 1个芽的小块接人 1、2号培养基上继
续培养。50 d后材料生长分化结果为，BA浓度为
10．0 mg／L的1号培养基上的材料平均能形成 6个
丛生小芽，芽增殖速度最快，但叶色有些发白；BA
浓度为 12．0 mg／L的 2号培养基上的材料生长不
齐，质量差，增殖速度下降。再把 1、2号培养基上的
材料切割后接到 3～8号培养基上培养。在培养过
程中发现 BA浓度为(8．0～9．O)mg／L的培养基上
的材料均出现异常现象，而在低浓度 BA及元 BA
的培养基上的材料生长良好。
综上所述，继代培养应先在高浓度 BA(8．0～
10．0 rag／L)上培养诱导丛芽，后转人低浓度或无
BA的培养基上进行壮苗培养，然后又转到高浓度
上诱导增殖的循环培养。
2．3根的诱导及试管苗移栽
将高为 3～4 cm的丛生芽分成单芽，转接到含
1．0 mg／L NAA及附加 0．2 g／L AC的 MS培养基
上诱导生根。培养 7 d材料基部形成白色突起，2O
d后平均能诱导出5条白色粗壮根，统计生根率高达
100 。将已长成完整小植株的试管苗，选择温湿度
较高的天气，在室内打开瓶盖炼苗 3 d，洗净培养基
后，于大棚中移入经 5O 多菌灵或敌克松500倍液处
理过的含腐殖质丰富的疏松土壤中。前 1星期每天
向叶面喷洒少量的水，30 d后成活率达9O 。
2．4不同培养基诱导带叶叶柄形成愈伤及根的结果
在接种过程中，把生长嫩绿的叶从叶柄基部切
下接种在 1、2、3号培养基上，培养 45 d的结果见表
4。1、2号培养基上的叶柄基部均形成直径达 2．5
表 3 不同培养基对八角莲继代增殖培养的影响
Table 3 Effects of different media on proliferation culture of Dysosma versipellis
cm的大团质地紧密的愈伤，尤其是 2号上的材料从
愈伤上还长有 2～3条白色粗壮根，3号培养基上的
最差。可见，培养基 MS4-BA1．0 mg／L4-2一ip1．0
mg／L+NAAO．02 mg／L能有效地诱导叶柄分化出
愈伤和根。
把长有愈伤的材料再转入 2、4号培养基上继续
培养。结果 2号上的材料长出更多的根，但没有芽
分化；4号上的材料在培养 35 d左右，可从叶柄基部
822 广 西 植 物 28卷
愈伤诱导出芽，但出芽率很低，仅为 2O 左右。
3 讨论
研究证明低温与 GA 处理均能有效地打破种
子休眠，提高发芽率(秦佳梅等，2006；杨慧玲等，
2005；李梅等，2005)。在本试验中经 GA 处理的八
角莲种子萌发早，发芽率高，而经低温处理的种子萌
发率极低，且芽生长慢质量差，这说明 GA。可有效
地打破八角莲种子的休眠，4℃的低温不但没能提
高萌发率，反而还影响了芽的生长。这可能是因为
八角莲是一种严格的适应亚热带山地森林环境条件
的植物(邱荷香等，2002)，它适应性差，受环境气候
等自然条件的约束较严重(叶耀辉等，2005)。4℃
的低温很可能已超出了种子所能承受的极限低温，
从而造成低温伤害，影响种子发芽。这与经 4℃低
温贮藏可提高典型热带植物三药槟榔种子发芽势而
发芽率保持不变的结果有一定差异 (杨期和等，
2005)。
在进行带柄嫩叶培养时发现：MS+BA1．0 mg／
L+ 2一ip0．5 mg／L+ NAA0．02 mg／L及 MS+
BA1．0 mg／L+2-ip1．0 mg／L+NAA0．02 mg／L均
能有效地诱导叶柄形成愈伤团，只需 45 d就能产生
直径达 2．5 cm的愈伤。这比潘琦等(2002)利用野
生八角莲幼叶，在含 2，4一D和 BA的 MS培养基上
培养 2个月才获得愈伤组织，所需时间至少短15 d。
培养基 MS+BA1．0 mg／L+ 2一ip1．0 mg／L+
NAA0．02 mg／L的诱导率达 75 9，6，此外，还可诱导
表 4 不 同培养基对叶柄的诱导效果
Table 4 Effects of diferent media on leaf stalk
叶柄愈伤分化生根。
八角莲在自然条件下只进行有性生殖，由种子
萌发到性成熟约需 5～6年，繁殖周期长。加之八角
莲为自花授粉植物，且花的结构不利于授粉及营养
竞争，从而限制结实率与结籽率(马绍宾，2000)。此
外，种子萌芽率低，种子幼苗需生长 2年才能移栽，
育苗周期长(邱荷香等，2002)。在人工条件下，虽能
进行营养繁殖，但繁殖材料十分有限。因此不论用
种子还是根茎繁殖，繁殖率均较低。而带叶叶柄培
养45 d就能分化愈伤生根形成再生植株，这比利用
种子、根茎育苗周期短，效率高，且不受地理气候等
自然条件的影响。此外，它是根茎培养过程中切下
的废弃物，不影响根茎的培养增殖，这在很大程度上
提高了材料的利用率。因此，培养带叶叶柄形成再
生植株，对提高八角莲的繁殖速度有重要作用。
经前人工作证明，八角莲愈伤及诱导根中均含
有鬼 臼毒素，可分别达到野生品根含量的 20 、
25 (潘琦等，2002，2006；刘蕾等，1997)。Toshio
等(1998)认为在培养基中添加鬼臼毒素的前体合成
物质如苯丙氨酸或诱导子如鬼臼类多糖物质等可提
高愈伤组织中鬼 臼毒素的含量，以及 Inomata等
(1993)认为利用发根农杆菌诱导药用植物的组织形
成毛状根，可成倍增加植物中次生代谢产物的含量。
因此，可以考虑使用相关技术提高八角莲愈伤及诱
导根中有效成分的含量，从试验室直接提供生产原
料，而克服八角莲野生或栽培状态下生长周期长繁
殖能力低的难题。这样即可降低成本也可保护资
源，从而满足生态及药用领域 的需要。
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6期 田蕾等：鄂尔多斯半日花提取物的杀线虫作用 855
的杀线虫活性，而石油醚及丙酮提取物的杀线活性
较弱。说明鄂尔多斯半日花的杀线虫活性成分主要
分布于这个极性范围内，而且以极性最强水溶性的
活性最强。(2)本文充分考虑了提取物种类(A)、浓
度(B)和处理时间(C)以及三因素的互作效应(AXB
×C)和双因素互作效应(A×B、AX C、B×C)对线虫
校正死亡率的显著影响，选出两个最佳的药液处理组
合：水提取物在 6 mg·L- 浓度时与 1 d的作用组合、
乙醇提取物在 3 mg·L- 浓度时与 5 d的组合。
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