全 文 ：广 西 植 物 G u i ha ia s( 3 ) :2 6 9一 2 72 . 19色5 2 6 9
甜 茶 组 织 培 养 研 究
林 荣 王润珍 王秀琴
( 广西植物研究所》
摘耍 甜茶的茎段和实生苗培养在 MS基本培养基中. 研究植物激素对器官形成的影响 , 试验结果表明
B人。 . ` 一 2 . 。毫克 /升明显促进芽的形成和增殖 ; 而对照 ( 基本培养基 ) 无形成芽 . 细胞分裂 素对芽的起动
是必需的. B A O . 5 一 2 . 0毫克 /升和G A 。 1 . 。毫克 /升配合使用 , 对茎段形成芽和增殖反而减少 , 但形成的苗
较高和幼叶生长良好二 通过继代培养 . 可繁殖大量小苗 , 它揭示出同一块外植体生长出许多小植株的可能 ,
将无根苗转入含有BI A o . 25 一 。 . 50 毫克 /升的 1 / ZM S培养基中, 能诱导生根 , 发展完整植株 . 试管苗移 植
土壤中 . 获得成功 , 幼苗生长良好 .
关键词 甜茶 ; 组织培养; 植物激素; 器官形成
甜茶 R u b “ 5 us a vi s si m us 5 . L e 是高甜度 、 低热性的甜料植物。 甜茶叶含有甜茶素 、
多酚类了蛋白质 、 氨基酸 、 维生素C及矿物质等 。 其甜味成分比蔗搪甜 30 。倍 , 是一种低热值
的非搪甜味物质 I ` 1, 适宜于食品工业和医药工业应用 , 可供糖尿病 , 肥胖症患者长期使用 。
鉴于甜茶系野生植物 , 仅靠野生资源不能满足生产需要 , 必需进行人工栽培 , 但采用常规的分
株和分根繁殖 , 繁殖系数较低 , 而种子繁殖 , 发芽率又低 。 为此 , 我们进行甜茶组织培养研
究, 促使其大量增殖 , 为甜茶快速繁殖提供新的途径 。
材 料 和 方 法
_ 采用茎段 、 嫩梢和实生苗为外植体 。 当果实成熟时 , 采收种子分别在 3 一 4 ℃冰箱低温
贮藏和室温贮藏 , 每月用 T T C 法测定一次种子生活力。 种子经表面消毒后 , 分别以剪口和不
剪口的种子进行试管播种 , 培养无菌苗 。 或者采取大田栽培的植株 , 选取尚未萌动带顶芽或者
侧芽的枝条 , 去掉叶片 , 剪成长约 2 一 3 厘米的茎段 , 洗干净后 , 用 70 %酒精浸溃片刻 , 再
用。 . 1% H g C I : 溶液消毒 14 一16 分钟 , 用无菌水冲洗 4 一 5 次 , 吸干水分 , 切 成 长约 1 厘米
带芽的茎段进行接种 。
_ 以M S为基本培养基 [ 2 1 , 根据试验要求分别附加不同浓度和组合的 6节基氨基嗓吟 ( B A ) 、
呼噪丁酸 ( IBA ) 、 蔡乙酸 ( N A A ) 、 赤霉素 (G A : )等 。 白搪浓度 3 % , 琼脂 0 . 7一O 。 8% 。
p H 为5 。 8 , 以 1 公斤 /厘米 2高压蒸汽灭菌 20 分钟 , 接种后培养于 25 土 2 ℃ , 每 天 用日光灯照
光 9 一 1 0小时 , 约 2 , 0 0 0勒克司 。
结 一果 和 讨 论
一 、 种子贮旅及理化处理对培养无菌苗的形晌
甜茶种子细小 , 种皮坚硬 , 种子难于萌发, 在甜茶分布区的自然条件下 , 很少发现实生
异采裤同志参加部分工作
2 70 广 西 植 物 6 卷
苗 , 为了培养无菌苗作外植体 , 首先要了解种子发芽较难及发芽率低 的原因 。 当 5 一 7 月间
果实成熟时 , 将采收的种子分别用 3 一 4 ℃低温贮藏和室温贮藏 , 每月 用 1 % 的 2 , 3 , 6 一氯
化三苯基四氮哇溶展测定种子生活力 , 其结果 ( 见表 l ) 表明 , 甜茶种子寿命较短 , 在室温
条件下 , 贮藏一个月 , 仍保持种子的生活力 , 贮藏两个月 , 种子大部分丧失发芽力 , 贮藏三
个月. , 种子几乎全部丧失发芽力。 而采用 3 一 4 ℃低温贮藏 , 可延长种子的寿命 , 但只能保
持两个月 , 如低温贮藏三个月 , 有生活力的种子只有 15 % , 这说明在人工播种时 , 种子发芽
率低 , 甚至不发芽 , 可能因贮藏期间种子已丧失生活力所致 。 因此 , 培养甜茶无菌苗 , 当种
子采收后应及时进行试管播种 , 但播种后经历较长时间 , 培养基往往已变干 , 尚未见发芽 。
为此 , 我们进一步试验种子有否后熟期 , 当种子采收后用各种化学药剂处理及剪破种皮等处
理 , 以不处理的种子作对照 , 进行试管播种 , 在播种后约两周 剪破种皮的处理 , 种子开始萌
发 出苗 , 获得无菌苗 , 而其他各处理及对照均无种子发芽 , 这说明甜茶种子不需后熟期 , 种
子难萌发系种皮坚硬 , 透性差所致 , 因此在人工播种育苗时 , 种子用湿砂层积处理 , 可促进
种子萌发 。
甜茶果实成熟期不一致 , 不同成熟度的种子 , 其生活力有很 大 的 差 异 , 如果实呈红黄
色 , 成熟的种子 , 有生活力的种子 占72 % , 而果实呈红绿色 , 未成熟的种子 , 有生活 力的种
子只有 30 % , 一般种子具有生活力在 50 %左右 , 这也是造成种 子 发 芽 率低的因素之一 , 因
此 , 必需待果实充分成熟时分批采收 , 以提高发芽率 。
表 1 甜茶种子贮藏方法对种子生活力的影响 二 、 植物滋索对芽分化的形晌
种 子 测 定
贮 藏 方 法
二 }有生活力
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数卜, 一 , 1一一 .、
}数量 ! 。 z
1 1 , 山为 、 卜 2 .
l 、 仪 尸 I
日 期 (粒 ) 筋
}
测
{贡
5844121弘4541砧淞1采收后立即测定
室温贮藏
室温贮藏
室温贮藏
3 - 刁℃低温贮藏
3一 4℃低温贮藏
3一4 ℃低温贮藏
1 9 8 2
,
7
一
1 3
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,
8
一
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1 0 0
培养基中植物激素的状况 , 在诱导植物组织
形成器官起着重要的作用 [ 3 1 。 不同植物对 激 素
浓度及组合比例 的要求有很大的差异 。 试验结果
表明 ( 见表 2 一 3 ) , 细胞 分 裂素 B A O. 5一 2 . 0
毫克 /升明显促进甜茶茎段 、 实生苗 分 化丛生芽
和形成苗。 当B A 浓度从 0 . 5毫克 /升提高到 2 。 O毫
克 /升 , 分化芽 、 苗的数量也随着增多 , 而 无 激
素的对照组 ( 基本培养基 ) 无分化丛生芽 。 由此
可见 , 甜茶组织诱导芽分化需要依赖外源激素的
供给 。
B A 和 G A 3 配合使用 , 对茎段诱导分化芽 、 苗数反而比单独使用 B A 的各处理减少 , 但形
成的苗生长较好 , 表现苗较高且幼叶生长良好 , 因此 , 赤霉素对小苗长高和幼叶的伸展均有
二定的作用 。
取材不同对培养效果有明显的影响 , 采用 茎 段 和 实生苗作外植体 , 培养在适宜的培养
基 , 均能诱导芽的分化 , 分化率达 8 0%以上 , 在茎段幼芽的周 围和实生苗的基部分化许多不
定芽 , 通过继 代培养 , 增殖速度快 , 而采用嫩梢作外植体 , 不仅分化率低 , 仅 2 0%左右 , 且
增殖速度慢 , 在培养过程嫩梢往往干枯死亡 。 因此 , 甜茶茎段和实生苗作为无性系快速繁殖
是较好的培养料材 。
茎段和实生苗培养在适宜的培养基 , 培养约一周外植体开始长大 , 培养约三周在苗的基
部或茎段的腋芽周围开始分化丛生芽 , 随后形成许多无根苗 , 培养四至五周培养瓶已长满小
落一期 林荣等 :甜茶组织培养研究
表 2激素对茎段分化芽的影响 表 3激素对实生苗分化队注井的邢响
激 素 浓 度 }外植休 形成苗数 橄 素 浓 度 外植
数
形成苗数化芽生
分丛
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.…二`ùOóbo口甲.月心8s舫950B.`O臼甘砚O丹0嘴孟`五,三,且吸孟,已八甘`n甘ē比口.几ó而,自勺山.`月`2心+ BA O。 5+ B人1 。 0
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苗必需进行转管 , 将健壮的无根苗转生根培养基诱导生根 , 一般转管后约两周开始形成根 ,
获得完整植株 。 将丛生幼芽和小苗转入新鲜培养基进行继代培养 , 增殖速度快 , 每个培养瓶
可分化几十株甚至一百多株小苗 (见图 1 一 3 ) 。 为了培养较健壮的小苗 , 控制增殖苗数不宜
过多 , 在继代培养时降低 BA 浓度 , 以M S + B A o . 2一 0 . 5毫克 /升 十 G A : 1 . 。毫克 /升为宜 。 每
30 一40 天继代一次 , 以 10 倍速度增殖 , 一年内一块外植体可繁殖几十万株小苗 。 因此 , 甜茶
组织培养可作为快速繁殖的有效途经。
三叼尽晌小苗生报的. 魏 , 一 _ 一 _ _ _ ,
甜茶组织培养诱导芽的分化较容易 , 而诱导生根较困难 。 试脸结果表明生长素 、 苗长势
及培养基的湿度等因素对小苗生根均起重要的作用 。 我们采用 N A A o . 2一 2 . 。毫克 /升及 I B A
。 . 25 一 5 . 。毫克 /升等不同浓度的试验结果表明以女M导垮养基 , 附加 IBA o . 25 一。 . 50 毫克 / 升
效果较好 , 但生根率仍较低 , 均在 3。%以下 , 这可能由于甜茶组织培养诱导芽的增殖较多 , 往
往一个培养瓶形成许多小苗 , 苗长势较弱 , 转入生根培养基尚未形成根 , 培养基开始变干 ,
致使苗千枯死亡而影响生根率 。 为此 , 我们采用不同长势苗和瓶口 包扎物等试验 , 其生根串
有明显的差异 ( 见表 4 ) , 以于M s + I BA o . 2瘾克 /升 , 采用壮苗 , 同时用硫酸纸及塑料薄膜
包扎瓶 口 , 生根率可达 91 . 7 % , 而采用细苗 , 用棉花塞封 口 , 生根率仅 20 % 。 由此可见培养
壮苗是健进小苗生根的基础 , 供给外源激素是促进生根的关键 , 改善培养基的湿度状况是促
进生根的因素。
表 4 苗长势及瓶口包扎物对小苗生根的影响
生 长 素 苗长势 瓶 口 包 扎 物 无根苗 诱导生根《毫克 / 开 ) 数 目 株 %
(株 )
粤M s ; IBA 。 . 2 5 壮 苗 硫酸纸 + 塑料薄膜 6 0 5 5 9 1 。 7
` 日 细 苗 棉 花 塞 6O 1 2 2 0 。 0
i
_ 仕 苗 硫酸纸 + 塑科称腆 6 0 5 0 扭3 . 3百M S + I B A O . s o 细 苗 棉 花 塞 6 0 1 8 2 6。 7
用 SOp p nl I B A或 N A A 浸泡小苗基部 4 小时 ,
和发育,
真接种植在营养杯中, 亦可健进根部毕味
2了 2
四 、 劫忿移植
广 西 植 物 份卷
甜茶组培苗较幼嫩 ,
易成活 。 在生根培养基 ,
从培养瓶移入土壤栽培环境条件发生急剧的变化 , 如不娜注意不培养五周左右 , 多数小奋已形成根系 , 在室温自然光下开口炼苗两
天 , 取出幼苗、 洗净粘附在根部的培养基 , 一贫即栽植于营养杯申 , 培养土用草寡彭耳么份和粗
砂 1 份混合 , 移植后用玻璃瓶或塑料薄膜覆盖一 周 , 并控制水分的供应 , 待幼苗长出新叶后
揭盖 , 继豁养卜 3 周 , 将幼苗摊于苗圃, 按丁一般管理 , 让幼苗在 自然条件下乐 , 幼苗移植获撇活 , 壮苗成活率高达 , %以 一 ,二, 功苗生长良好 ( 见图 4 ) , 移郁牟率黝株高御脚厘来 1 茎翻 · ` 2厘米 , 叶片.0z 冲 , 叶较无 长 “ 一 ` “厘光 宽 “ 一啊形 _瓤 7深裂 , 开始分枝 , 而细弱苗移植难以成活 · 一 _ _ _
根据` 次移植试验结果表明 , 培育壮苗是移` 成 舌`的基砒 幼苗锻炼和崖窄剖峥奢率是移猿成活的关键 。
参
毕 〕 徐位坤气 卿卜 甜茶的成分究研 , 广西植物 , 卯
〔 2 〕 M肠 ; 扭, 么i g e 。 F . a o d F . S k 。 。 g , 1 , 右2: A ; 。 v i s : d
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