全 文 ：广 西 植 物 G ui hai a1 6 (3 ) :1 9 9 6
高效液相色谱法测定银杏叶提取物中黄酮试含量
李典鹏 方 宏
(广西植物研究所 , 桂林 5 41 X() 6 )
摘 要 用高效液相色谱法测定银杏叶提取物经酸水解后黄酮贰元含量 . 采用 cl : 柱 , 甲醇 :
水 : 磷酸 ( 5 : 4 .5 : .0 5) 为流动相 , 检测波长 3 70 n m , 方法回收率 95 . 1% 一 103 . 2% , 变异系
数 ( C V ) 3 . 17 % , 10 批样品含测平均为 25 .4 % .
高效液相色谱 ; 银杏叶黄酮贰 ; 拼皮素 ; 银杏叶提取物
D E T E R…M IN A T IO N O F F L A V O N O ID S IN E X T R A C T O F
G IN K G O B I L O B A L E A V E S B Y H IG H P E R F O R M A N C E
L IQ U ID C H R O M A T O G R A P H Y (H P L C )
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在欧洲 , 主要在德 、 法等国家 , 由银杏 ( G动坛口 b ilo ba L . ) 叶提取制成的药物销路长盛不
衰 , 而且市场正在看好 . 我国在 70 年代虽也有银杏叶提取物 ( E G b) 制剂面市 , 但因其提取工
艺不佳 , 质量标准不够完善 , 未能推广使用 . EG b 中含有黄酮贰 、 银杏 内醋和一些酚性物等 .
国内过去多采用比色法 〔 ’ , 2 〕测定其总黄酮 , 但因专属性差 , 只能测算总黄酮 , 而不能有选择地
定量测定有效黄酮贰元 . 至于对银杏叶 , 可能由于大量原花色素的干扰 , 使此法重现性差 . 国外
有采用 H P L c 测定 E G b 中双黄酮的含量 (3 〕 ; 有采用 H P L c 测定 E G b 中内酷的含量 〔 4 〕 ; 有
采用样品直接进样 , 梯度洗脱高效液相分析 , 测定银杏叶中所含黄酮贰类成分 (5 〕 ; 也有样品经
19 6州M一习9 收稿
第一作者简介: 李典鹏 , 男 , 1969 年出生 , 研究实习员 .
3 期 李典鹏等 : 高郊液相色谱法测定银杏叶提取物中黄酮贰含量 29 3
酸处理 , 梯度洗脱高效液相色谱分析测定其贰元含量 “ 〕 . 因为 E G b 中黄酮类成分相当复杂 ,
单一测定每一个成分比较困难 , 且缺乏各自对照品 . 另外 , 梯度洗脱常引起基线漂移 , 给定量带
来误差 . 我们研究了 E G b 经酸水解测定其贰元 , 恒比例溶剂洗脱高效液相色谱分析 , 水解后的
三种主要黄酮贰元搬皮素、 山蔡酚和异鼠李素分离良好 . 方法简便 , 重现性好 , 准确 , 精密度高 .
2 实验部分
.2 1 仪器年川式剂
.2 1
.
1 仅 器
美国 W a et sr 公司高效液相色谱仪采用 5 10 泵 , 8 10 色谱工作台 , U 6K 手动进样器 , W a et sr
48 6 可编程序紫外检测器 , 梅特勒 A T 20 电子天平 .
.2 1
.
2 试剂与样品
重蒸水 ( 自制 , M il ipo er H A .0 45 料m 滤膜过滤 ) , 甲醇 (色谱纯 、 m il po er F A 0 . 5杯m 滤膜
过滤 ) , 磷酸 (分析纯 ) , 懈皮素对照品 (中国药品生物制品检定所提供 , 0 81 一9 0 0 3) , 溶解于
甲醇中, 配制成 0 .0 56 m g / m L , 用前新鲜配制 , E G b (广西植物研究所制药厂提供 ) .
.2 2 色谱条件
流动相 : 甲醇 : 水 : 磷酸 ( 5 : 4 .5 : 0 . 5 ) ; 流速 : 1.0 m L / m i ;n 柱温 25 ℃ ; 进样体积 :
10 拜L : 检测波长 : 3 7 0 n m . 色谱柱 : S如e r is o r b R -b 18 ( 10 ” m) (25 0 x 4 m m )。
2
.
3 样品处理
准确称取 75 .0 m g EG b , 加 20 m L 甲醉使其溶解 , 然后加人 5 m L 25 % 盐酸液 , 混匀 , 置水
浴上回流加热 60 m in , 冷却 , 过滤至 50 m L 容量瓶中 , 甲醇定容至刻度 , 摇匀 , 待进样 .
3 结果与讨论
3
.
1 色谱条件选择及数据处理
本实验选用 甲醇一水一磷酸溶液作流动相 . 在条件实验中发现 : ( l) 适当增大流动相中甲
醇量 , 可使榭皮素等成分出峰快 , 敏锐 , 减少拖尾 . ( 2) 流动相中加人磷酸 , 可以缩短分离时
间 , 增强组分峰的对称性 , 但为了保持柱的稳定性 , 延长柱的寿命 , 尽可能减少磷酸加人量 .
样品色谱出现的主要峰 1 为榭皮素 Q (C 巧 H 10 7) , 2 为山蔡酚 K (C 15H 10o 5 ) , 3 为异鼠李素 I
(C 16 H
I夕 7) (图 1) . 以榭皮素对照品为对照 , 外标法定量所有峰 , 按峰面积计算主要峰的含量 ,
相应的黄酮与黄酮贰元转化因子为 .2 5 1 , .2 6 4,
.3 2 标准曲线与空白试验
准确称取榭皮素对照品 28 m g , 用甲醇溶
解定容至 10 0 m L 容量瓶中作为母液 , 用移液
管精确移取 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 8 m L 于 2 5 m L
容量瓶 , 甲醇稀释至刻度 , 各进样 10 匹 于高
效液相色谱仪 , 记录色谱图 , 测定峰面积 . 峰
面积对 浓度进 行 回归计算 , 得 回归方程 :
A = 4
.
0 2 x 10 7C + 2
.
8 x 10 4
, 相 关系数 r 二
2
.
3 9 〔6 〕 , 平均 2 . 5 1 .
表 1 裸皮素的回收率
加人量 侧得量 回收率
(m g)
1
.
0 0
l
一
0 0
1
.
0
!
.
0
!
.
0
(m g)
0
.
9 6 2
0
.
9 5 1
0
.
9 8 1
1
.
0 3 2
0
.
9 8 3
(o/ )
平均回收率 变异系数
(% ) (% )
编号
9 6
.
2
9 5
。
l
9 8
。
l
10 3
.
2
9 8
.
3
9 8
.
2 3
。
17
.0 9 9 9 2
, 峰面积与浓度的线性范围 : .0 0 2一 0 . 08 m g / m L .
扮 4广 西 植 物 1 6卷
0
.加 0 .和 0 . 60 0, 即 1. 0 1. 加 O 。 印 l , 0 1。 印
X 加 ’ M 一 u t e s 10 ’ M i n u t e s
图 l 银杏叶提取物黄酮类化合物色谱图
a 拼皮素标准 b 样品
未加样品的空白液按样品处理方法 , 进样 10 匹 经色谱分析未见任何峰 .
1 3
在数份 75 m g 银杏叶提取物样品中, 分别准确加人拼皮素对照品 1 . 0 m g, 然后按样品前处理
方法进行处理 以 10 匹 进样量进样侧定拼皮素的标样回收率 , 结果见表 1 .
玉 4 精密度试验
按样品处理方法 , 制备一
样品溶液 , 依含量侧定方法重
复进样 7 次 , 侧定其精密度 ,
结果如表 2 .
1 5 样品测定
按样品处理方法 , 对广西
植物研究所制药厂生产的 10
批 E G b 进行含量测定 (表 3 ) .
表 2 方法梢密度刹定结果 n = 7
含盆(咫 / m L ) 变异系数
.0 294 仪 296 .0四 7 .0 29 8 .0 刀2 .0 29 3 .0 29 4
标准偏差
0
. 《川】2 1 7
(C叨队
.0 7 4
表 3 不同批次银杏叶提取物黄酮后且
样品编号
含量
俘 / 劝% 26 ) 25 .2 2东 ! 25 .7 27 .9 2 4
.
6 26 .6 2 4
.
4 2东7 加. 4
本文采用拼皮素作对照定量所有峰 , 不尽准确 , 如能有山蔡酚 , 异鼠李素分别作对照 , 该法
会更完善。
致谢 本实验承蒙成桂仁教授指导 ; 工作中得到陈秀珍老师的大力协助与支持 , 在此一并表
示感翻
参 考 文 献
1 庄向歌 成杏芙 杨更生等 . 银杏叶中黄酮含盆的侧定和提取方法 . 中草或 19 大23 :l 2
2 江苏薪医学院编 . 中药大辞绷附篇l 上海 : 上海人民卫生出版执 197 :7 559
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