全 文 ：7 岁缈
广 西 植 物 Guihaia 14(4)：345-348．1994
软 紫 草 愈 伤 组 织 的 初 步 培 养
f
王 黎 张治国l雇 志光 韩献忠 刘 骅
(新江省医学科学院．杭州 $10013)
·77 7．争
摘要 外植俸来诼不同的软紫草愈伤组织产生紫草色素的能力各异．¨Co—r射线辐照处理后的
HI无性系愈防组织生长置和色素产生均属上乘．改良MS基本培养基露加 l毫克／升 KT．0．5毫
克／升 IAA，5 (W／V)蔗糖对寂伤组织培养较为适宜．马铃薯提取液对愈伤组织生长有明
显的促进作用．
关键词 ； 墅 堕一笠
PRELIMINARY STUDY ON CALLUS CULTURE OF
ARNEBIA EUCHROMA
Wang Li-Zha Zhiguo·Osi Zhiguang，Ⅱ曲 X isnzhong end LiuⅡⅡa
(ZhejlaaI Ac~emy ot Medical Scle=cez,I-Imzzzbo~$i~015)
Abstract CalIus of~arious expIazts of 打f曲 哪c^，口，，口had differe砒 ability to
produce ehikoniu．Ht clOm which waB treated by“Co-r rays bad higher produ-
ction in both callus yield and shikonin tha n the othere．A rood“led MS medium
with l mg／i KT，O．s me／l I从 ． 5 蛐cro舱 etimulated production of calln8
and shikonin．Potato extract WaB benefit to callos production．
Key words rn06 $uchvomQ；callus；shikouin
软紫草 (新疆紫草 )Arnebia eucluoma为传统中药，根入药，主要成分为紫草素，具
抗菌，消炎，抗癌、治疗外伤等作用。紫草素又是贵重的天然色素，可广泛地应甩于l印染、
化妆品、食品工业中“．1】。 由于紫草资源日盎枯竭， 和用植物细胞培养技术生产紫草索，
将是一个有希望的途径。目前， 国内对紫草属植物细胞培养的研究已有报道 r ”， 集中栗
甩改变培养基成分，筛选高产细胞株等措施以提高培养细胞的生长速率及紫草索含量。本文
就基本培养基，激素组合，蔗糖浓度，有讥添加物等对软紫草禽仿组织生长的影响和产生紫
草素的能力作一报道。
l 材料和方法
1．1材辑 软紫草 (Arnebia euchroma)胚轴，子叶，根愈伤组织为中国科学院植 物所 赠
送。作者经 1年多骊化，继代后的无性系。其中胚轴愈伤组织 Ⅱt经 Co— 射线辐照处理，
●
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346 广 西 植 物 H卷
选择出二 个 无 性 系 为 H 和
H 3。
1．2方法
(1) 愈伤组织培养；
采用L8基本培 养基 一添加
1 mg／i KT和 0．5mg／I IAA，
5 蔗糖，0．8 琼脂，pH5．8。
接种量 2克 ·鲜重／瓶，25±
1℃下暗培养，3O天后收获。
(2) 愈伤组织生长和
紫草紊含量的测定；愈伤组织
收获后分别测定每瓶 的鲜重和
干 重。紫 草 素 含 量 测 定 同
Mizn~Irmi川 ，食量以每克干
重愈仿组织中所含紫草素的毫
克数表示。
2 结果与讨论
2．1 不同外檀体来叠的 禽 份
丑奴培彝比较
来源于胚轴、子叶、根 的
愈伤组织~~WKT和IAA的L
培养基上培养，结果表明 (表
1)，不同外植体来源的愈伤
组织均能产生紫草素，这与李
国凤等 ” 在对软紫 草 (新疆
紫草 )愈伤组织培养的结果一
致 但是，各种来源愈伤组织
的生长量、产色素能力差异明
显 愈伤组织生长量为胚轴>
子叶>根，色素含 量 以根最
高-子叶最低，分 别 为2．551
mgig和0．2mg／g，两 者 差i3
倍 3种胚轴愈伤组织色素含
量以Ⅱz为摄高，约2．23mg／g，
近于根愈伤组织，且其生长量
高于根愈伤组织，故H。为较佳
的无性系。
表1 不周外檀体来漂的软紫草禽伤组织培养比较
Table 1 Growth comparison of callus from different
explants of ．euchromcl
愈伤组组样重
F
(
r
E
e，fJsh
a
w畦e1)ght 26·3±l·3 22．2+3 ,4 2 ·2±2·6 l6·l±2·l 6
· 6±2·5
愈伤组麴于重
飘 ht 盯±。‘¨ 聃±0‘。 朝±D．0 D．5 口10Z 0．36~0．1】
紫草素含量
$Mk0n 1．66 2．23 1．27 0
． 2 2．55
(mg／gDW )
表2 基本培井基对豁紫草意伤组织生长的影响
Table 2 Effects of basal medium 0n callus culture
of euel~roma
愈伤组组群重
Fresh|welght 14·B±3．9 11．5±3．6 12．1±1．7 12．8±4．4 14．7±1．2
(g／flask)
愈惦组织千重
Dry weight O．50±0．10 0．38±O．07 0．53±0．07 0．49±O．13 0．67~0．03
of callas
fg／~lask)
紫草素含量
Shlkoain 1．65 0．1 0．9 1．43 18．59
content
(mg／gDw )
表3 不同It素组台对软紫草愈伤组织培养的影响
TabIe 3 Effects of different com bination of
phytohormone on callus culture of ．euchroraa
BA 1
IAA 0．5
NAA 0．5
2．4一D o．5
17．4±1．0
13．7±0．9
12．0±1．
o．51±O．O2
o．41±0．02
o．40±0．03
m A 0．5 16．2B±2．“ o． ±0．07
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4期 王 黎等：软紫草愈伤组织的初步培养
2．2 基本培养基对软紫草愈 伤 组织
培养的影响
基本培养基对细胞生长和次生产
物的形成有重要影响。朱蔚华等 曾
报道改 良MS培养基更适 于 滇 紫 草
(Onosma panicula~um)愈伤组织的
生长。在软紫草愈仿组织继代培养 1
年后， 以Ⅱ：无性系为材料，观察其
在B 、N。、MG ．n 、改 良Ms基本
培养基上的生长情况，结果表明，改
良MS培养基较其它基本培养基更适
于软紫草愈伤组织的生长和色素产生
(表2)。培养后期，B。培养基上的
愈伤组织出现揭化。愈伤组织在L8、
MG。培养基上生长量近似，但MG 培
养基上启动快、易老化、故Lg培养基
适于软紫草愈 伤 组 织 的继代 与保
存。
2．8 不同激素组合对教紫草愈 伤组
鍪I培养的影响
植物激素对植物组织和细胞培养
中细胞的生长和次生代谢产物产生起
着重要的调节 作 用。当 分 别 用 KT
和BA与不 同生 长 素 (IAA，NAA、
2．4一D、IBA )组合，观 察 对 软 紫
草愈伤组织生长的影响，结果如衷 3
所示。 在 img／l IBA或 KT分别与
0．5rag／1的IAA或IBA组合的培养
条件下，愈伤组织具较高的生长量。
愈伤组织在NAA组上生长略好，而在
2．4一D组，生长则差。NAA和2．4-D
不仅影响愈伤组织的生长，且抑制次
生代谢产物的产生。~ouyo等 曾
用同位素示踪法证明了2．4一D能阻断
紫草素生物台成过程中的中间代谢产
物，从而抑制紫草素的合成。因此，
我们采用KT或BA与IAA或IBA激
素组合，进行软紫草愈伤组织培养。
’、‘ C口Ic曲恤吐I。n of 0uct0 (％，w／v)
图i 蔗糖浓度对软紫草愈伤组织培养的影响
Fig．1 Effects of sucrose on cal lus
culture of A．euc~；roma
cluu。 yield (g·DW／~Ink)一
图2 不同有机添加物对软紫草愈伤组织培养的影响
Fig．2 Effects of different additive
on ca1lus culture of ．euohroma
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348 广 西 植 物 14卷
2．4 藏■对愈伤组规培养的影响
Mizuakmi等 报道紫草 (Li#,~ospernmm ery#hrorh~zon)愈伤组织培养中加入蔗糖
5 时紫草素含量和细胞生长鲜重为最高。而厨立刚等 [sj报道培养滇紫草 (Ono~ma f—
clJ耐“m’愈伤组织以蔗糖6 时紫草素含量达最高值，蔗糖9 时，细胞干重生长量最高。
为了确定适合于软紫草愈伤组织生长和紫草素产生的适宜蔗糖浓度，我们采用了 1— 9％的
蔗糖添加在IJ8培养基中，结果如图 1。当蔗糖浓度为 5 愈伤组织鲜重产量和紫草素的含量
为最高。蔗糖浓度为9％时愈伤组织干重达最高值，培养后期，愈伤组织里灰褐色。因此，
软紫草愈伤组织培养的合适蔗糖浓度为5 ，我们的结果与Mlzuskmi等在紫草愈伤组织培
养的结果相符 [|】。
2．5 有机器加■对蠢伤坦规培养的搭一
用蛋白胨．水解乳蛋白(LH)、酵母提取液 (YE)，玉米粉、马锋薯提取渡加入到培
养基中，对软紫草愈伤组织培养的影响。结果如图 2所示。 蛋白脒，LH，玉米粉对愈伤组
织生长影响不显著。YE抑制愈伤组织生长。Mizuskmi等 [_ 报道蛋白胨促进愈 伤 组 织生
长，YE对生长不明显。 这与我们的结果不同。本项试验还表明，马锋薯提取液能促进愈伤
组织生长。这种促进作用可能为马锋薯提取液提供了软紫草愈伤组织生长所需的破源和植物
激素。
参 考 文 献
车国凤，伍正容．叶和春等．离体培养的折叠紫草薯最色素的诱导形成．植物学通报，1989, 5‘2)·8●一8e
朱蔚华．羹 红髓，胡缺等．漠紫草血仿组织的谱导培养受忧良无性熏的筛选．中商材t 1990·13(I)， 8—9
局立刚，郁光植．王世林．攮紫草愈捞组织培养与肇草素生产．云南擅簪研究，1991，13(8)·315--320
l 周立脚，郑光埴，王世林等．多糖对漠觜草培养细晦的影响．天然产簪研究与开发，1991，8(墨)·94-98
5 Linsmaier E F．Skoog F“O~aulc growth |sctoz of tobacco tissue cultures．Physiol Plant 196~* 19
(1)I 100-127
6 Mizu吐 mi H，KODOShi血8 M，Tabata M．． Effect of nutrjtlon [actors OD shnkonin de~ivatlve
formatoin Lithospermum c lus culttres．Phytochemlstry，1977， l8(8)l 1183一 ll86
7 Inonye H， Ueda 5l Inoue K et a1．． Biosynthesis of shikonin in culture of Lithospermum
erythrorhlzon．Phytochemistzy， 1979，1 1301- 1308
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