全 文 ：广酉 ~植物 多 ui恤少 _ _ _坦2 s年 笙卫墨 _第 _1 规 1 二卫旦页
金 桔 组 织 培 养 的 初 步 研 究
林 荣 王秀琴 王润珍
( 广西植物研究所 )
Al, R E L IM IN A R Y S T U D Y O N T H E T IS SU E
C U L T U R E O F F O R T U N E L L A M A R G A R IT A
L i n R o o g
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a n g X i u
一 q i n a n d W
a n g R t比一 z h a n
( G u a n 义 x i I n s t i t u t e o f B o t a n y )
金桔 ( F o r t u n e l l a m a r g a r i t a ( L 。 u r . ) s w i n g l e ) 原产于我国 , 为柑桔类的优良品种之一 。
果实含有丰富的维生素 、 酸甜适中 , 可供生食 , 又可作蜜饯 , 畅销 国内外 , 深受群众欢迎 。
在植物组织养培的研究中 , 柑桔类的组织培养技术亦有很大的发展 。 柑桔的胚和胚乳培
养分化植株 ` 一 “ , 茎尖 、 嫩茎 、 叶切块培养的器官分化已有研究 4 一 7 。 但金桔的组织培养
尚未见报导 , 我们进行金桔组织培养研究 , 为金桔良种的快速繁殖提供新的途径 。
材 料 和 方 法
材料采用广西阳朔县产的金桔 , 种子经表面消毒培养无菌苗 。 当 苗 长 至 4 一 5 枚叶片
时 , 采取胚轴和嫩茎 , 切成长约 0 . 5厘米长的小段 , 子叶和叶片切成约 6 x s 毫米 “ 的小块 ,
每处理一般接种 20 块 。
采用M S 一 3 一 和 N 。 。 〕作为基本培养基 , 根据试验要求分别附加不同浓度的 6 一 苇基氨基嗓
吟 B( A ) 、 蔡乙酸 ( N A A ) 、 因噪丁酸 ( BI A ) 和水解乳蛋白 ( L H ) 。 蔗糖浓度为 2一 5 % ,
琼脂为 0 . 7一 1 . 。% 。 pH 为 5 . 8 。 以 1 公斤 /厘米 “ 高压蒸汽灭菌 20 分钟 , 接种后培养于 2c 一 35
℃ , 每天用 日光灯照光 9 一 1 。小时 , 约 2 , c 0 勒克司 。
结 果 和 讨 论
一 、 不同基本培养基对形成芽的影响
采用 M S和 N 。两个不同的基本培养基 ,
附加相同激素的试验结果 (见表 1) , 两者均可
诱导胚轴和茎段形成芽 , 但以N 6 为基本培 养
基 ,其诱导芽频率较高 , 上胚轴为 4’1 . 94 % ,
茎段为 90 . 70 % ; 而M S为基本培养基 , 上胚
轴为 21 . 43 % , 茎段为 7 2 . 0 9 % , 因此 , N 。作
为金桔的基本培养基较为适宜 。
二 、 不同激素组合对形成芽的影响
表 1 不同基本培养基对形成芽的影响
} {夕卜植 体 } 形 成 芽
基本培养基 {外 植 体 } }— —— …— 一 J遨邑i竺) 一{一竺 -阵N “ …上胚敬` … ” ` 1 ’ 3 } 4 , · 9 4} 茎 段 4 4 3 …“ 9 } ” o · 70M S ! 上胚 郭` 1 4 2 J 0 1“ , · 4 3
{
茎 “ :
{
` 3
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3 ,
}
` 2 · 。”
在N 。基本培养基中附加不同浓度的 B A和 BI A 组合对培养的上胚轴和嫩茎形 成芽的影响
( 见表 2 ) 。 在试验浓度的范围内 , 带节茎段均能诱导形成芽 , 而节间和上胚 轴 , 在 BI A
0
.
5毫克 /升存在的情况下 , 随着B A 浓度从。 . 5毫克 /升增至 2 . 。毫克 /升 , 形成芽 的频率也随
着增加 。 在 N 。基本培养基 , 不加任何激素的情况下 , 亦能诱导上胚轴和嫩茎形成芽 , 但频
, 本项工作还有韦春榕 、 唐海平两同志参加 。
l 1
表 2不 同 激 素 组 合 对 形 成 芽 的 影 响一一布乍外 植 体数量 (块 ) 2 01 51 5 2 016 25 2 0芽生 沃情况成 l…形一块 1 0316 1 4芽 %15 . 0 026 .召 726 .6 75 0. 0 01 8 . 756 4. 0 07 0. 0 0单生 1从生从 生从尘从生丛生丛生率较低 , 同时形成单芽 , 这说明金桔的上胚轴和嫩茎 ,
但附加激素对芽的形成有促进作用 。 以 N 。基本培养荃 ,
毫克 /升配合使用 , 效果较好 。
三 、 有机附加物的作用
在附加有 B A I . 0毫克 /升和 BI A O . 5毫
克 /升的N 。培养基中 , 再加入不同浓度 L H ,
以不附加 L H 作对照 , 其试验结果 (见表 3 )
表明 , 添加适员的水解乳蛋 白明显促进上胚
轴形成芽 , 以附加 4 0 毫克 /升 , 效果最为明
显 。 随着 L H 浓度的增加 , 形成芽的频率反
而下降 , 这可能由于浓度高 , 致使产生有毒
物质所致 。
四 、 不同外植体对形成芽的影响
采用金桔的下胚轴、 子叶 、 上胚轴 、 叶
片 、 嫩茎 ( 带节茎段和节间 ) 及根尖等不同
外植体 。 在附加有 IA B o . 5毫克 /升和 B A Z . o
毫克 /升的 N 。培养基上 , 其试验结果 ( 见表
4 ) 表明 , 不同的外植体对芽的形成有明显
的差异 。 嫩茎和胚轮 , 形成芽的频率较高 ,
表 3
含有闭源激素较 多 , 可使其形成芽 ,
附加 I B A o . 5毫克 /升和 B A I . c一 2 . 0
不同浓度的 L H 对上胚轴形 成芽的影响
水解乳蛋白
(毫克 /升 )
外 植 体
数 量 (块 )
形 成 芽
一 2 0…
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一
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一 卜一兰—9 { 45
16 1 80
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不同外植体对形成芽的影响
。
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夕。 。 。讼(二 形 成
下 胚 软
子 叶
_卜 胚 轴
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芽生长
情 况
丛生
单生 1
丛生
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叶 片
带节韭段 一
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根 尖 `
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。 丛生
丛生
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~ 川一一 . . 门口. . . . 目. 州. . . . .同时形成丛生绿芽 ; 子叶仅个别形成芽 , 而根尖和叶组织均元形成芽 。 因此 , 植物组织培养诱导形成芽 , 不仅 一与外源激素有关 , 而且因植物材料而异 。 金桔的嫩茎作为无性系快速繁殖
是较好的培养材料 。金桔的嫩茎在适宜的培养基 , 士忠养后约一周可见茎组织开始膨大 , 颜色 逐 渐 转 为淡绿
色 , 培养约二周升始形成愈伤组织 , 培养约 一个月 , 在愈伤组织开始形成许多小绿芽 , 随后
长出茎叶 , 将茎叶转入生根培养基 , 获得完整再生杭袜 ( 图 1一 3 ) 。 并将丛生小芽分开转
到新鲜的培养越继续培养 , 可促进芽白。增殖 , 培养约两个月 , 可长出粗壮的绿芽 、 茎叶和密
集的小芽 , 又可将密集的小芽分开切成小块进行继代培养 , 能繁殖大量绿苗 。
五 、 很的诱导和幼苗移栽
金桔组织培养诱 导形成芽 , 长出茎叶在原 .卜击养墓上 , 一般不能形成根 , 必需将 已形成茎
叶的无根苗 , 切下传八含有生长素的生根培养签 , 一般转管后一个月左右开始形成根 , 获得
完整植株 。 经试验结果表明 , 以令M S基本培养基 , 附加 0 . 2毫克 /升 , 效果较好 , 不仅生根
率高 , 且根系粗壮 , 从
茎基部长出很 , 有利于
移栽成活 ; 在不含有生
长素的N 。培养基 , 亦能
诱导生根 , 但生根率较
低 ; 而含 有 较 高 浓 度
N A A 灼培养基 , 则形
成大量愈 勿组织 , 然 后
长 出很系 , 移栽洗根时
容 易悦落 , 影响移栽成
活 。
金桔的试管苗 , 移
栽前揭开试管塞 , 让幼
苗在 自然光下或培养室 图 1 茎段增大和形成愈伤组织
光照下锻炼两天 , 取出幼苗 , 立即栽植于营养箩或盆中 , 图 2 一 _ 形成绿芽和长出茎叶
基土用三分之二草皮泥和三分之一砂混合 , 栽植后盖上玻璃罩 2 一 3 周 , 待幼苗长出新叶后
揭盖 , 让幼苗在自然条件下生长 , 幼苗移栽获得成活 ( 图 4) , 一般成活率在 60 %左右 。
气
图 3 再生完整小植株 图 4 移栽成活的小植株
参 考 文 献
〔 1 〕 王大元 等 , 1 9 7 5。 柑桔胚的人工培养。 植物学报 , 17 ( 2 ) : 1 90 一 1 9 20
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〔 8 〕 王大元 等 , 1 97 8。 从胚乳培养再生三倍体柑桔植株 。 中国科学 , ( 4 ) : 续52 一 4 5 5。
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C u l t u r e g
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H o r t s e i
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t i , s u e d u r in g p r o l
o n g e d C u l t
u r e
.
A n n
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B
o t
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3 9 : 6 8 3一 6 8 7。
〔 8 〕 M u r a ￡h i又e , T . & F . s k o o又 , 1 9 6 2 。 A r e v i s e d m e d iu m f o r r a p i d g r o w t h a n d b i o a s s a y ` w i th
t o b a e e o t i s , u e C u l t u r e
,
P h y : 10 1一 P l a n t . , 1 5 : 4 7 3一 4 9 7 。
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