全 文 ：开唇兰属 3 种植物总膏的降血糖活性研究*
蔡金艳1，朱恩1，赵林2，张铁3，祝晨蔯4
(1．广东药学院药科学院，广州 510006;2．广东药学院生命科学与生物制药学院，广州 510006;3．文山学院，文
山 663000;4．广州中医药大学临床药理研究所，广州 510006)
摘 要 目的 研究开唇兰属 3 种药用植物齿唇兰、艳丽齿唇兰和西南齿唇兰的总膏对高糖高脂饮食联合链脲佐
菌素(STZ)诱导的大鼠模型血糖相关指标的影响。方法 高血糖实验组大鼠分别灌胃给予 3 种总膏，测定给药后大鼠
血糖、胰岛素敏感性、抗氧化活性及一氧化氮(NO)水平等相关指标。胰腺切片，进行病理学检查。结果 与模型组比
较，西南齿唇兰总膏组的随机血糖明显降低，由给药前 19． 3 降至 8． 5 mmol·L －1(P ＜ 0． 05) ，而且该组大鼠的体质量明
显高于模型组，同时能提高胰岛素敏感性，改善高糖负荷以后的糖耐量。开唇兰属 3 种植物提取物给药组的超氧化物歧
化酶(SOD)活性增加，NO含量均显著降低。结论 西南齿唇兰总膏具有良好的降血糖作用，其作用机制可能与改善胰
岛素抵抗、增强机体抗氧化活性和降低血浆 NO等机制有关。
关键词 齿唇兰;艳丽齿唇兰;西南齿唇兰;降血糖;胰岛素敏感指数
中图分类号 Ｒ282． 71;Ｒ285． 5 文献标识码 A 文章编号 1004 － 0781(2014)02 － 0140 － 05
Hypoglycemic Effect of Three Different Extracts from Anoectochilus Genus
CAI Jin-yan1，ZHU En1，ZHAO lin2，ZHANG Tie3，ZHU Chen-chen4(1． School of Pharmacy，Guangdong
Pharmaceutical College，Guangzhou 510006，China;2． School of Life Science and Bio-Pharmaceutical，
Guangdong Pharmaceutical College，Guangzhou 510006，China;3． Wenshan University，Wenshan 663000，
China;4． Institute of Clinical Pharmacology，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，
China)
ABSTＲACT Objective To investigate the hypoglycemic effect of 3 different extracts from Anoectiochilus in diabetic rats
induced by high lipid diet plus streptozotocin (STZ)． Methods The total EtOH extracts were prepared from A． lanceolatus，
A． moulmeinensis and A． elwesii，yielding 3 extracts． Blood glucose (BG) ，insulin sensitivity index (ISI)and antioxidant activity
was assayed． Morphological examination of the pancreas was performed． Ｒesults The total extract from A． elwesii showed the
best profile in hypoglycemic effect and improving insulin sensitivity with a fall of BG from 19． 3 to 8． 5 mmol·L －1(P ＜ 0． 05)． A
significant raise in SOD activity and a reduction in plasma NO were observed after the treatment of 3 extracts from Anoectochilus．
Conclusion The total extract from A． elwesii shows a good activity in improving glucose metabolism，which may be attributed
to increased insulin sensitivity and SOD activity and reduced plasma NO level．
KEY WOＲDS A． lanceolatus;A． moulmeinensis;A． elwesii;Hypoglycemic;Insulin sensitivity index
云南省文山州常见 5 种开唇兰属药用植物:花叶
开唇兰［Anoectochilus roxburghii(Wall．)Lindl］、滇越
金线兰(Anoectochilus chapaensis Gagnep．)、齿唇兰
(Anoectochilus lanceolatus Lindl．)、艳 丽 齿 唇 兰
［Anoectochilus moulmeinensis (Par． et Ｒchb． f．)
Seidenf．］和西南齿唇兰［Anoectochilus elwesii(Clarke ex
收稿日期 2013 － 07 － 10 修回日期 2013 － 09 － 10
基金项目 * 广东省医学科研基金项目(B2011150) ;国家
自然科学基金资助项目(81001628) ;广东省自然科学基金资助
项目(S2013010014771)
作者简介 蔡金艳(1981 －) ，女，湖北枝江人，副教授，博
士，主要从事天然药物活性成分和创新药物研究。电话: (0)
15920107845，E-mail:caijy928@ 163． com。
通讯作者 赵林(1979 －) ，男，湖北十堰人，讲师，博士，研
究方向:生物制药学。电话:020 － 39352151，E-mail:biozhl@
126． com。
Hook． f．)King et Pantl．］。前两种又叫“金线莲”，目
前野生资源日渐匮乏，价格昂贵，市场混乱，急切需要
科学方法对相关品种进行药用研究［1-4］。齿唇兰、艳丽
齿唇兰和西南齿唇兰在民间也常用于治疗糖尿病、肾
病等。对金线莲的化学成分和药理活性有较多研
究［5-12］，但是齿唇兰、艳丽齿唇兰和西南齿唇兰的报道
仅限于物种鉴定［4］、资源调查［13］、组织培养［14］等方
面，笔者未见对其降血糖药理活性方面的报道。笔者
在本研究考察齿唇兰、艳丽齿唇兰和西南齿唇兰 3 种
植物提取物对 2 型糖尿病动物模型血糖、胰岛素敏感
性、抗氧化能力和一氧化氮(nitrogen monoxidum，NO)
的影响，为民间草药资源的综合利用和治疗糖尿病的
药物开发提供实验依据。
1 材料与方法
1． 1 实验动物及饲养 健康 4 ～ 5 周 SPF 级雄性 SD
大鼠 60 只，体质量 80 ～ 110 g，购于广东省医学实验动
·041· Herald of Medicine Vol. 33 No. 2 February 2014
物中心，许可证号:SCXK(粤)2008-0002。饲养环境:
室温 18 ～ 25 ℃，相对湿度 50% ～ 80%，每笼 6 只，共
分 10 笼，自由采食、饮水，适应饲养 10 d。高糖高脂饲
料(配方:蛋黄 2． 5%、蔗糖 20%、猪油 10%、基础饲料
67． 5%)喂 养 4 周 后，腹 腔 注 射 链 脲 佐 菌 素
(streptozotocin，STZ)35 mg·kg －1造模。基础料的营
养成分符合国标《GB1492413-2001·实验动物·小鼠
大鼠配合饲料》的营养标准。
1． 2 材料与试剂 西南齿唇兰 25 kg、齿唇兰
19． 75 kg、艳丽齿唇兰全草鲜品 12． 6 kg，购于云南省
文山州。经广东药学院中药学院马鸿雁老师鉴定分别
为兰科开唇兰属西南齿唇兰(A． elwesii)、齿唇兰(A．
lanceolatus)和艳丽齿唇兰(A． moulmeinensis) ，原植物
凭证标本分别为 No． 2010-XN1002、2010-CC1003、
2010-YL1004，保存于广东药学院药科学院。将药材自
然晾干，分别得干品 2． 6，2． 25 和 1． 5 kg，经剪碎后用
95%乙醇加热回流提取 4 次，每次 4 h，过滤，回收溶
剂，得总膏 493． 8 ，622． 6和 394． 5 g。STZ，美国 Sigma
公司，批号:S0130，临用前用 0． 1 mol·L －1柠檬酸盐缓
冲液(pH4． 4)配成浓度为 1%的溶液(10 mg·mL －1) ;
总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase，T-SOD)
活力(批号:20110712)、总抗氧化能力测定试剂盒(批
号:20110712)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)测定试
剂盒(批号:20110712)购于南京建成生物工程研究
所。大鼠胰岛素测试盒购自上海蓝基生物试剂公司。
阳性药盐酸二甲双胍缓释片(购于双鹤药业有限公
司) ，取 3 g 溶 于 去 离 子 水 100 mL 中，配 成
30 mg·mL －1备用。怡成超越系列 JPS-6 型手持式全
血葡萄糖测定仪(购于北京怡成生物电子技术有限公
司)及专用试纸。尿糖试纸购于广州市花都高尔宝生
物技术有限公司。
1． 3 高血糖实验大鼠模型的建立 大鼠高糖高脂饲
料喂养 4 周，禁食 12 h 后，将 STZ 用 0． 1 mmol·L －1，
pH4． 2 的无菌柠檬酸缓冲液配制成 1% STZ溶液，且避
光，冰浴，即用。按 35 mg·kg －1腹腔注射 STZ 造模，
继续高糖高脂饮食，观察大鼠饮食量、饮水量、尿量、毛
色 等 情 况，2 周 后 测 随 机 血 糖，选 取 血 糖
＞ 11． 1 mmol·L －1者(即成功造模)作为高血糖实验
大鼠。
1． 4 大鼠分组与给药方法 将高血糖模型大鼠随机
分成 5 组，模型组、阳性药对照组、齿唇兰总膏、艳丽齿
唇兰总膏和西南齿唇兰总膏组，每组 8 只。所有总膏
给药剂量折算为生药材均为 4 g·kg －1体质量，模型组
给予等体积 0． 9%氯化钠溶液，阳性对照组每日给予
盐酸二甲双胍 60 mg·kg －1。连续 14 d，每日观察记录
体质量、饮食、饮水、垫料，隔日检测尿糖水平，每周检
测血糖值(取尾静脉血)。
1． 5 观察指标 给药 2 周后，所有动物禁食过夜，测
定空腹血糖值(fasting blood glucose，FBG)。40%葡萄
糖溶液灌胃 2． 5 g·kg －1，给糖负荷后间隔时间 0，30，
60，90，120 min，尾静脉采血测定血糖值，并计算血糖-
时间曲线下面积。将所有 SD 大鼠禁食过夜，3%戊巴
比妥(30 mg·kg －1)麻醉大鼠，将鼠仰卧固定于鼠固
定板上，剪去胸腹部位的被毛，用 75%乙醇消毒皮肤，
剪开腹腔，腹主动脉采血，血样置入肝素-锂抗凝真空
管中，3 000 r·min －1离心 10 min(离心机半径 15
cm) ，分离血浆。分别采用相应试剂盒测定血浆胰岛
素水平、SOD 活力、总抗氧化能力、MDA 含量、NO 含
量。剪开腹腔，位于胃和十二指肠的弯曲处，取胰腺，
呈淡红色，形状不规则，似脂肪，用 10%甲醛浸泡，固
定、染色、镜检，苏木精-伊红(hematoxylin and eosin，
HE)染色观察病理组织学变化。胰岛素水平测定采用
双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(enzyme linked
immunosorbent serologic assay，ELISA) ，结合空腹血糖
值评价胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index，ISI) :
ISI = 1 /(空腹血糖值 ×空腹胰岛素值)。
1． 6 统计学方法 数据均以均数 ±标准差(x ± s)表
示，组间分析的数值变量采用单因素方差分析，用
SPSS19． 0 版统计软件进行统计学处理，P ＜ 0． 05 为差
异有统计学意义。
2 结果
2． 1 血糖相关指标
2． 1． 1 血糖和体质量 造模前，各实验组大鼠的血糖
值平均为(6． 5 ± 3． 3)mmol·L －1。造模成功后糖尿
病大鼠逐渐出现消瘦、精神萎靡、毛色松散灰暗、动作
反应迟钝、多饮、多食、多尿等症状。各给药组大鼠随
机血糖和体质量的实验结果见表 1。给药 14 d 后，与
模型组比较，二甲双胍、西南齿唇兰总膏和齿唇兰总膏
组大鼠血糖值降低差异有统计学意义，且西南齿唇兰
总膏组大鼠毛色和精神状态都有明显好转，运动量增
加，多饮、多食、多尿症状也明显减轻，后期体质量有明
显回升。但齿唇兰总膏组体质量明显减轻。
2． 1． 2 血浆胰岛素敏感指数 开唇兰属 3 种植物粗
提物及二甲双胍均能使模型大鼠的胰岛素敏感指数显
著升高，对模型大鼠胰岛素抵抗的改善效果较好。见
表 2。
2． 1． 3 糖耐量试验(oral glucose tolerance test，
OGTT) 糖耐量可由血糖-时间曲线评价，结果见图 1。
·141·医药导报 2014 年 2 月第 33 卷第 2 期
表 1 5 组大鼠血糖和体质量检测值
Tab． 1 Determination results of blood glucose and body weight in five groups of rats n = 8，x ± s
组别
血糖 /(mmol·L －1)
给药前 给药后
体质量 /g
给药前 给药后
模型组 22． 8 ± 3． 2 19． 1 ± 1． 4 255． 3 ± 42． 7 224． 9 ± 40． 5
二甲双胍组 18． 0 ± 4． 5 7． 6 ± 1． 1* 1 258． 3 ± 35． 5 262． 5 ± 41． 7* 1
艳丽齿唇兰总膏组 19． 9 ± 6． 3 17． 2 ± 5． 9 305． 6 ± 21． 8 336． 0 ± 28． 7
西南齿唇兰总膏组 19． 3 ± 6． 0 8． 5 ± 1． 4* 1 297． 8 ± 18． 7 295． 1 ± 32． 8* 1
齿唇兰总膏组 22． 9 ± 5． 4 13． 3 ± 6． 4* 1 301． 1 ± 17． 7 266． 9 ± 20． 9* 1
与模型组比较，* 1P ＜ 0． 05
Compared with model group，* 1P ＜ 0． 05
表 2 5 组胰岛素敏感指数检测值
Tab． 2 Determination results of insulin sensitivity index
in five groups of rats n = 8，x ± s
组别
禁食血糖 /
(mmol·L －1)
血浆胰岛素 /
(ng·mL －1)
胰岛素
敏感指数
模型组 8． 00 ± 0． 67 2． 233 ± 0． 456 0． 052 ± 0． 012
二甲双胍组 7． 40 ± 0． 30 1． 637 ± 0． 737 0． 081 ± 0． 014* 1
艳丽齿唇兰总膏组 8． 83 ± 1． 36 1． 487 ± 0． 992 0． 076 ± 0． 034* 1
西南齿唇兰总膏组 7． 40 ± 0． 47 1． 732 ± 0． 447 0． 078 ± 0． 007* 1
齿唇兰总膏组 9． 37 ± 1． 62 1． 010 ± 0． 251 0． 106 ± 0． 023* 1
与模型组比较，* 1P ＜ 0． 05
Compared with model group，* 1P ＜ 0． 05
图 1 5 组大鼠糖耐量试验的血糖-时间曲线
Fig． 1 Blood glucose-time curves of sugar tolerance test
in five groups of rats
血糖峰值和达峰时间是其中最直观的评价指标。
与模型组比较，各给药组对糖耐量均有所改善，其中影
响较大的依次是西南齿唇兰总膏组和艳丽齿唇兰总膏
组。西南齿唇兰总膏组大鼠在给予糖负荷后血糖约
1 h达到峰值，其他组均在 0． 5 h 达到峰值。艳丽齿唇
兰总膏组的血糖在 0． 5 h达到峰值后以较快的速度降
低，至 1． 5 h 就基本恢复到糖负荷前的水平。而模型
组在 0． 5 h 达到血糖峰值后，血糖值一直处于较高水
平。齿唇兰总膏组对模型大鼠的糖耐量未见明显改
善。
2． 1． 4 胰腺组织学检查 各给药组大鼠胰腺组织 HE
染色的切片图见图 2。模型组胰岛细胞团有慢性重度
炎症，β细胞可见广泛不可逆性核溶解，灶性细胞坏
死，及少量淋巴细胞浸润和广泛小血管充血。开唇兰
属 3 种植物粗提物给药组的胰腺细胞形态较模型组有
明显改善。艳丽齿唇兰总膏组细胞核染色较深，可见
少量细胞分裂，细胞界限不清，排列无极性;胰岛 β 细
胞有广泛的空泡变性，轻度血管充血，有少量核固缩，
未见核溶解(未出现点状坏死及灶性坏死) ，未见胰岛
纤维化，未见淋巴细胞。西南齿唇兰和齿唇兰总膏组
胰岛形状饱满，细胞形态较好，细胞核染色较好。细胞
数量密集，界限清楚，细胞核较好，核形状正常，有点状
坏死(核溶解) ，有少量分裂增殖，轻度血管充血，未见
淋巴细胞浸润。二甲双胍组胰岛细胞团体积明显较
大，细胞数量较多，细胞形状不规则，较少见细胞空泡
变性，胰岛有轻度血管充血，未见纤维化;胰腺大血管
可见有明显充血。
2． 2 血浆 SOD活性、总抗氧化能力和 MDA 含量 开
唇兰属 3 种植物提取物给药组的 SOD 活性显著增加，
对总抗氧化活性影响不显著(表 3) ，齿唇兰总膏组的
MDA含量显著降低。
2． 3 血浆 NO含量 如图 3 所示，开唇兰属 3 种植物
总膏组的 NO含量与模型组和二甲双胍组相比均显著
降低。
3 讨论
本研究采用高糖高脂饮食联合 STZ诱导的糖尿病
大鼠模型对开唇兰属 3 种植物总膏进行活性筛选，发
现西南齿唇兰总膏显著降低模型大鼠血糖，提高胰岛
·241· Herald of Medicine Vol. 33 No. 2 February 2014
图 2 5 组大鼠胰腺组织 HE染色的切片图(×400)
A．艳丽齿唇兰总膏组;B．西南齿唇兰总膏组;C．齿唇兰总膏组;D．二甲双胍组;E．模型组
Fig． 2 H-E dyeing on pancreas slices of each group of rats(×400)
A． total extracts from A． moulmeinensis;B． total extracts from A． elwesii;C． total extracts from A． lanceolatus;D． metformin group;E．
model group
表 3 5 组 SOD活性、总抗氧化能力和 MDA 含量的检测
值
Tab． 3 Determination results of SOD activity， total
antioxidant capacity and MDA content in five groups of rats
n = 8，x ± s
组别
SOD活性 总抗氧化能力
(U·mL －1)
MDA含量 /
(nmol·mL －1)
模型组 453． 35 ± 22． 00 16． 77 ± 9． 23 5． 00 ± 0． 51
二甲双胍组 463． 63 ± 17． 21 27． 38 ± 2． 25* 1 4． 84 ± 1． 21
艳丽齿唇兰总膏组 581． 43 ± 49． 98* 1 18． 47 ± 6． 37 4． 53 ± 0． 54
西南齿唇兰总膏组 535． 24 ± 30． 15* 1 17． 17 ± 6． 11 5． 90 ± 1． 37
齿唇兰总膏组 629． 13 ± 35． 47* 1 8． 45 ± 0． 94 2． 73 ± 0． 58* 1
与模型组比较，* 1P ＜ 0． 05
Compared with model group，* 1P ＜ 0． 05
图 3 开唇兰属 3 种植物总膏对血浆 NO含量的影响(n =
8，x ± s)
A．艳丽齿唇兰总膏组;B．西南齿唇兰总膏组;C．齿唇兰总
膏组;D．二甲双胍组;E．模型组
Fig． 3 Effect of three different extracts from
Anoectiochilus on plasma NO content(n =8，x ± s)
A． total extracts from A． moulmeinensis;B． total extracts from
A． elwesii;C． total extracts from A． lanceolatus;D． metformin group;
E． model group
素敏感性，改善糖耐量，其次是齿唇兰和艳丽齿唇兰总
膏。西南齿唇兰中可能含有一些具有良好的降血糖作
用的化学成分，有必要对其进行降血糖活性物质基础
的进一步研究。从胰岛素敏感性考察结果来看，预示
该降血糖作用的发挥可能与改善胰岛素抵抗密切相
关。
开唇兰属 3 种植物提取物给药组的 SOD 活性显
著增加，提示该植物含有增强体内抗氧化活力的成分，
而抗氧化作用与高血糖模型的发生和发展有一定的相
关性。
HE染色技术检查胰腺组织病理切片镜检实验结
果表明，开唇兰属 3 种植物粗提物给药组的胰腺细胞
形态较模型组均有明显改善。造模试剂 STZ含有亚硝
基，能通过释放 NO 和增加自由基损伤胰岛 β 细胞或
诱导 β细胞凋亡。活性因子 NO的测试结果显示给药
组对高血糖的改善作用可能与 NO 含量减少，减轻 β
细胞损伤有着密切关系，各给药组均能降低模型大鼠
血浆 NO含量，保护 β 细胞免受损伤。因此，各给药组
NO含量降低有非常重要的生物学意义。关于 NO 指
标的评价与探索药物降血糖的活性机制值得进一步深
入研究。NO在脊椎动物中有信号分子的作用，是疏水
性较强的胞外小信号分子，很容易通过扩散越过靶细
胞质膜，一旦进入胞内就直接调节细胞质中特异蛋白
质的活性。有实验证实，小鼠血管平滑肌细胞中的 NO
可增加蛋白酪氨酸磷酸酶 1B(PTP1B)的活性［15］。NO
可通过 PTP1B 对胰岛素信号传导下调机制减弱胰岛
素刺激细胞的能动性，因此降低 NO 有助于改善胰岛
素抵抗。
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DOI 10． 3870 /yydb． 2014． 02． 002
灵芝多糖对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制研究*
袁荣高1，杨留才2，刘德军1，李仕红2，徐红涛2
(1．连云港中医药高等职业技术学校，连云港 222006;2．盐城卫生职业技术学院，盐城 224006)
摘 要 目的 研究灵芝多糖对糖尿病(DM)模型大鼠肾脏保护作用及分子机制。方法 建立 DM大鼠模型，分为
对照组、模型组和药物治疗组，药物治疗组用灵芝多糖治疗 8 周。观察 3 组大鼠肾功能指标、氧化-抗氧化指标、原位末
端标记(TUNEL)法检测肾脏细胞凋亡，Western-blot检测 Bcl-2、转化生长因子-β1(TGF-β1)和 Bax 在肾脏的蛋白表达水
平。结果 药物治疗组的肾功能指标好于模型组，低于对照组，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05) ;药物治疗组肾皮质的丙
二醛(MDA)低于模型组，高于对照组;超氧化物歧化酶(SOD)高于模型组，低于对照组，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05) ;
药物治疗组肾脏细胞凋亡率低于模型组，高于对照组，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05) ;药物治疗组肾皮质的 Bcl-2 蛋白表
达水平高于模型组，低于对照组，BAX和 TGF-β1蛋白表达水平低于模型组，高于对照组，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05)。
结论 灵芝多糖可能通过改善 DM大鼠氧化应激水平和抑制肾脏细胞凋亡保护 DM大鼠的肾功能。
关键词 灵芝多糖;糖尿病;氧化应激;凋亡
中图分类号 Ｒ965 文献标识码 A 文章编号 1004 － 0781(2014)02 － 0144 － 05
Kidney Protective Effect of Ganoderma Lucidum Polysaccharide in Diabetic Ｒats
YUAN Ｒong-gao1，YANG Liu-cai2，LIU De-jun1，LI Shi-hong2，XU Hong-tao2 (1． Lianyungang High
Vocational and Technical School of Chinese Medicine，Lianyungang 222006，China;2． Yancheng Health
Vocational and Technical College，Yancheng 224006，China)
ABSTＲACT Objective To study the effects of the polysaccharides of Ganoderma lucidum on the kidneys of diabetes
mellitus (DM)rats and the related molecular mechanism． Methods The DM rat model was established． The DM rats were
divided into control group，model group and treatment group． The treatment group was treated by Ganoderma lucidum
polysaccharides for 8 weeks． The rat renal function profile，oxidation and anti-oxidation index were determined． TUNEL assay
method was used for the detection of renal cell apoptosis． The expression levels of Bcl-2，TGF-β1 and Bax in the kidney were
determined by Western blotting． Ｒesults After treatment with Ganoderma lucidum polysaccharide，renal function profile in the
treatment group was significantly better than that in the model group，and worse than that in the control group (both P ＜ 0． 05)．
Ｒenal cortical MDA of treatment group was significantly lower than that of model group，and higher than that of the control group
(both P ＜ 0． 05)． SOD of the treatment group was significantly higher than that of the model group，and lower than that of the
control group (both P ＜ 0． 05)． Ｒenal cell apoptosis rate of the treatment group was significantly lower than that of the model
group，and higher than that of the control group (both P ＜ 0． 05)． Ｒenal cortical Bcl-2 expression level of the treatment group was
significantly higher than that of model group，and lower than that of the control group (both P ＜ 0． 05)． The expression levels of
·441· Herald of Medicine Vol. 33 No. 2 February 2014