全 文 ：19 99平 2 1月
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第 2 1卷第 4期
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文章编号 :1007一 9084 (99 9 1) 04一 00 0 1一 03
芸蔓属种子贮藏蛋白质
亚基构成及亲缘关系分析
文建军 ’ , 何应森 2 , 刘世贵` , 何获平 `
l(
. 四川大学生命科学学院 , 四川 成都 61 0 6 4 ; 2 . 四川教育学院生化室 , 四川 成都 61 0 0 4 1 )
摘要 : 采用线性梯度 S L 6一 , PAG E 分析芸鉴属 4 个种 17 个品种 (系 )的种子贮藏蛋白亚基组成 ,表明种子
贮藏蛋白比较复杂 ,共有 58 条带 ,分子量范围是 8 0 0 ~ 30 o 0D ,不同种不同品 系带型不同 ,种间差异主要
表现在 8 0 0 ~ 70 0 00D 之间 , 品种 (系 )的差异主要在 70 00 ~ 30 o o D 之间 ,相似度指数也表现出同种内不
同的品种之间相似度高 ,种内品种间相似度大于种间 。
关键词 : 芸鉴属 ; 种子贮藏蛋白质 ; 蛋白质亚基
中图分类号 : 5 5 65 . 40 2 . 3 ` 文献标识码 : A
种子贮藏蛋白质比较稳定 , 一旦种子成熟 , 环境及季节等外界条件对其影响很小 ,甚至染色体的重
排或加倍 , 也很少改变其固有的蛋白质成分 1[, 2· 3〕 ,分析种子蛋白质组成已广泛应用于植物的分类 、进
化 、 遗传和变异等方面的研究闭 。 目前 , S D S一P A G E 技术在亚基水平上对特定蛋白质的分析已取得了
显著的进展 5j[ ,其形成的蛋白质谱带具有稳定性 、 均匀性和可加性 , 因此它成为研究植物亲缘关系的有
效手段 。 六十年代 以来 , 一些学者用免疫学方法 、 淀粉凝胶 电泳方法 、 丙烯酞胺凝胶电泳方法对芸墓属
(召翔 s lca )进行了分类学意义上 的研究 〔” 一 8〕 , 但以线性梯度垂直板 S D S一于A G E 为研究方法未见报道 。
本文对我们研究 出的一种提取率高 、 快速 、 色素干扰少和再溶性好的蛋白抽提物进行线性梯度 S E 6一
P A G E 分析 ,确定出芸墓属 4 个种 17 个品种之间的亲缘关系 。
1 材料和方法
1
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1 材料
供试材料包括甘蓝型油菜 ( B决口户哪 ) 81 0 08 、 We s wo g
、 日本油菜 、 蜀杂 2 号 、 3 5 2 9 X Or 。 、 A (可育 ) 品
系 、 sA (不育 )品系 、 B (可育 )品系 、 sB (不育 ) 品系 、 C (可育 )品系 、 sC (不育 )品系 ;芥菜型油菜 ( B . 为cn ea )
沪 州 四 棱 、 沪 州 金 黄 、 马 尾 丝 ; 白菜 型 油 菜 ( B . ca mP e st ir : ) 遵 义 蛮 油 菜 、 蛮 油 菜 ; 萝 卜油 菜
(几户人口瓜st r o id七s )蓝花子 。 以上均为四川大学生物系植物遗传研究室提供 。
1
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2 方法
1
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2
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1 种子贮藏蛋 白的提取 种子人工去壳 , 乙醚索氏抽提脱脂 , 风干 ,冰浴中研磨 ,过 12 0 目铜筛 。 取
50 0rn g 脱脂粕 , 用 10 耐 提取液 (0 . 125 mo l / L N a2 1~ I X〕 ;一N a O H 缓冲液 p H n . 4 , 内含 17 . smg S E 6 ,
0
.
2时琉基 乙醇 , s o mg 尿素 , 10 0rn g 亚硫酸氢钠 , 50 Om g 氯化钠 , 20 grn 叠氮钠 )抽提 ,磁力搅拌 3伽刀 in ,
冰箱静置 6h ,匀浆 , 15 0 0 0 0 r pm 离心 1 0而 n ,上清为抽提蛋白。
1
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2
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2 电泳样品的制备 取抽提蛋白 0 . 2耐 ,等量加入样 品处理液 (内含 0 . 0 16 %嗅酚蓝 , 4 % S L 6 ,
5% D r T
,
3 0%甘油的浓缩胶溶液 )沸水中煮 2而 n ,冷却后离心 sha n , 上清即为电泳用样品 。
1
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2
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3 电泳 线性梯度 (4 % ~ 20 % ) S E 6一P A G E 垂直板电泳 。分离胶浓度为 4 %至 20 %线性梯度 (含
S跳 0 . 1% , rT i s 1 . 5% , p H 8. 8 ) ,浓缩胶浓度为 3 . 4% (含 S E 6 0 . 1% , rT i s 1 . 5% , p H 6 . 8 ) , 加样量
2即 l , 电极缓冲液为 rT is一甘氨酸系统 (含 S E 6 0 . 1写 , pH 8 . 3 ) , 起始 电压 5V0 ,指示剂进人分离胶后改
为 I OOV , 恒压 10 h ,用考马斯亮蓝 R 25 o 染色 ,含 12 . 5%异丙醇的 10 %冰醋酸溶液脱色 。 7%乙酸中保藏
收稿 日期 : 1 9 9 8一 1 1一 1 5
作者简介 : 文建军 ( 1 9 6 3一 ) ,男 , 四川达川市人 ,遗传学博士 ,从事分子遗传及生物工程研究 。
文建军等 :芸荃属种子贮藏蛋白质亚基构成及亲缘关系分析
表 l蜀杂 2号品种与其它 6 1个品种的蛋白质亚基相似度指数
T知 b】 e l 11比 i nd e xf o5 1.川皿 .对 t yo r少 o tei ns ub u ni ts ef oN o .2 f os i ch u a nh vb d d碗 h to th e r 16 s u加
类型 T力笨 相同亚基数
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f o5 1而 la rs ub ui nts不同亚基数 N b .f oi df f e re ms ub u垃 s t相似度
指数
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口 U月,左且,曰Q匀n乙6154萝 卜油菜 蓝花子汤户丙` snu sat iur o L 0 . 1 1
白菜型 蛮油菜 加肠 n扣 cu ia
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c山 , 比以行 s 遵义蛮油菜 uZ咖 M a n y o cau i
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甘蓝型
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沪州四梭 L uz h o u S il gn
沪州金黄 L u公刃 u iJ hn u a gn
马尾丝 加坛we is
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研几 s w o g t y沐
日本油菜 aJ 阵 n ar pe
3 5 2 9 X C卜o t y p吧
A可育品系 A p r de cu i gn t y l祀
sA 不育品系 sA u n p r记 cu ign t y休
B 可育品系 B p r团 cu ign t y l犯
玫不育品系压 u n p r de cu ign t y pe
C 可育品系 C P r司 cu i gn t y】犯
Q 不育品系 Q u叩 r团 cu i gn t刃祀
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召朋 s s i c a 口」. bI i d , 1 96 7 b , 18 : 26 9一 2 76 .
〔8」 w ll i t ne y P J , Va u g h a n J G , eH a l e J B .
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