全 文 ：反相高效液相色谱法测定 木属植物中黄酮类和香豆精的含量
许旭东 , 张曙明 , 张聿梅 , 林　耕 , 杨峻山
(中国医学科学院 、中国协和医科大学药用植物研究所 ,北京 100094)
摘要　目的:对 木属植物中草本和木本两个自然群进行化学分类学的研究。方法:应用反相高效液相色谱法
测定 木属植物中 4 种化学成分[ neoliguiritin (I), 5 , 8-dimethoxycoumarin (II), isoliquritoside (II I), 8-[ (2″, 3″)-
preny l]-4′-methoxy-flavone-7-O-β-D-glucopyranosyl-(2※1)-α-L-rhamnopyranoside(IV)] , 对本属 11 种植物中该 4 种
成分进行了定量分析。色谱柱固定相为 Supelco SIL-LC-18;流动相为 40%甲醇—甲醇梯度洗脱 ,根据 4 种成分紫外
吸收波长的不同而改变检测波长;流速 1.0 ml·min-1;4 种成分的线性范围分别为(0.5600 ～ 0.0175)μg , (0.3760 ～
0.0118)μg ,(0.2875～ 0.0090)μg 和(0.3090 ～ 0.0097)μg , 回收率分别为 98.92%, 98.27%, 94.78%和 97.41%。
结果:木本自然群中香豆精成分含量较高 。结论:香豆精为木本自然群区别于草本自然群的特征成分之一。
关键词　反相高效液相色谱法; 木属;黄酮类化合物;香豆精
　　 木属(Aral ia linn.)植物从形态 、地理分布上
可明显分为两个自然群即木本自然群和草本自然
群[ 1 ,2] 。通过对该属植物特征化学成分的分析找出
两个自然群主要化学成分的区别 ,可进一步将两个
自然群划分为两个独立的亚属 ,即木本亚属和草本
亚属提供理论依据。前文[ 3]我们曾用反相高效液
相色谱法测定了 木属植物中二萜酸 、三萜酸和皂
甙的含量 ,在此基础上本文进一步建立了 木属植
物中 4 种化 学成 分 [ neoliguiri tin (I), 5 , 8-
dimethoxycoumarin (II), isoliquritoside (III), 8-
[(2″, 3″)-prenyl ]-4′-methoxy-f lavone-7-O-β-D-
g lucopyranosy l-(2※1)-α-L-rhamnopy ranoside (IV)]
的反相高效液相色谱测定法。根据这 4种成分紫外
吸收波长的不同 ,在测定过程中改变检测波长 ,既使
各成分在最大吸收波长处检测 ,又避免了相邻色谱
峰的干扰 ,提高了分析的灵敏度和准确度。4 种成
分在 25 min内得到良好的分离 ,可用于样品分析 。
实 验 部 分
1　仪器 、药品和试剂
高效液相色谱仪 ,包括 Waters 510 型 ,Waters
490E检测器 ,Waters U6K 进样器 ,Waters Baseline
810色谱工作站(均为美国Waters液相色谱公司产
收稿日期:　1998-03-23
基金项目:自然科学基金资助项目(39470062)
联系人　Tel:(010)62899736 , Fax:(010)62898425 ,
E-mail:xudong-xu@hotmail.com
品);CX-250型超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。
Neoliguirit in(I), 5 ,8-dimethoxycoumarin(II),
isoliquritoside (III ), 8-[ (2″, 3″)-prenyl ]-4′-
methoxy-f lavone-7-O-β-D-glucopyranosyl-(2 ※1)-α-
L-rhamnopy ranoside(IV)均为作者从该属植物中提
取 、分离并经四谱鉴定 ,纯度均在 95%以上。
植物样品除食用土当归 ,头序 木由谭策铭教
授采集外 ,其余均由本所朱兆仪教授提供并鉴定 。
重蒸馏水 ,甲醇(分析纯 ,色谱纯)等。
2　色谱条件
色谱柱:Supelco SIL-LC-18(4.6 mm×150 mm ,
5 μm);流动相:A:40%甲醇 ,B:甲醇 ,梯度洗脱 , 0 ～
10 min ,A:100%,10 ～ 25 min , A:10%,B:90%线性
变化;柱温:室温;灵敏度:0.008AUFS;流速:1.0
ml·min-1;检测波长:0.00 ～ 8.30 min用 276 nm 检
测 ,8.30 ～ 14.00 min 用 343 nm 检测 , 14.00 ～
20.00 min 用 361 nm 检测 , 20.00 ～ 30.00 min 用
272 nm 检测。
3　检测波长的选择
根据 4种成分的紫外吸收光谱 , I 在 214.8 nm
和 276 nm 处有最大吸收 , I I在 228.9 nm和 343 nm
处有最大吸收 , III 在 361 nm 处有最大吸收 , IV 在
271.5 nm 处有最大吸收。由于 4种成分的紫外最
大吸收差异较大 ,如只选用某一检测波长检测 ,将会
引起灵敏度下降。因此 ,根据这 4种成分在上述色
谱条件下的保留时间(tR)及紫外光谱数据 ,本法选
择 0.00 ～ 8.30 min 用 276 nm 检测 , 8.30 ～ 14.00
·46· 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 1999 , 34(1)∶46～ 48
DOI :10.16438/j.0513-4870.1999.01.011
min用 343 nm 检测 , 14.00 ～ 20.00 min 用 361 nm
检测 , 20.00 ～ 30.00 min用 272 nm 检测 ,这样既使
各成分在最佳吸收波长处检测 ,又避免了相邻色谱
峰的干扰 ,提高了分析的灵敏度和准确度。
4　标准曲线
分别准确称定 I ～ IV 标准品 2.24 , 3.76 , 1.15
和2.06 mg ,置2 ,2 ,1和 2 ml量瓶中 ,用甲醇溶解并
定容 ,制成标准品储备液;分别准确吸取 50 , 20 , 25
和 30 μl置 1 ml量瓶中 ,用甲醇定容 ,制成混合标准
品储备液。分别将上述混合标准品储备液用甲醇稀
释成 4 ,8 ,16及 32倍 ,形成 5个浓度梯度的标准溶
液 。依次吸取 10μl进样 ,在上述色谱条件下检测 ,
以峰高(X)为横坐标 ,成分含量(Y)为纵坐标 ,得回
归方程 、相关系数及线性范围见表 1。
Tab 1　Calibration data of compounds I ～ IV(n =5)
Compound t R/min Regression equation γ Linear range/μg
I 6.62 Y=2.8751×10-7X-1.3622×10-2 0.9991 0.018～ 0.560
II 8.18 Y=1.6031×10-7X-6.5835×10-3 0.9997 0.012～ 0.376
III 16.68 Y=2.2618×10-7X-1.7228×10-3 0.9991 0.009～ 0.288
IV 22.14 Y=1.4429×10-7X-4.5736×10-3 0.9994 0.010～ 0.309
I.Neoliguiritin;II.5 , 8-Dimethoxycoumarin;II I.Isoliquritoside;IV.8-[ (2″, 3″)-Prenyl] -4′-methoxy-flavone-
7-O-β-D-glucopy ranosy l-(2※1)-α-L-rhamnopy ranoside.
5　提取方法和样品液制备
方法同文献 3。
6　方法精密度测定
取同一生药样品 5份(n =5),用上述方法测
定 ,测得 I ～ IV 的 RSD(%)分别为:1.05 , 1.26 ,
2.13和 2.08。证明该法是可行的 。
7　加样回收率试验
准确称定头序 木粉末 1 g 6份 ,其中 3份作为
对照 ,余 3份加入一定量的混合标准品溶液混匀 ,自
然晾干后 ,依上述方法制备样品液 ,测定回收率。结
果见表 2。 4 种成分的平均回收率为 94.78%～
98.92%。
Tab 2　Recoveries of compounds I ～ IV(n =3)
Compound Added/μg Found/μg Recovery/ % RSD/ %
I 1.120 1.108±0.060 98.92±0.01 0.48
II 0.752 0.739±0.100 98.27±0.02 0.52
III 0.575 0.545±0.180 94.78±0.02 1.06
IV 0.618 0.602±0.080 97.41±0.03 0.98
I ～ IV cf Tab 1.
8　样品分析
按样品液制备项操作 ,对各样品进行定量测定 ,
并计算含量 ,结果见表 3 ,色谱图见图 1。
Tab 3　Content of compounds I ～ IV in different species
Classification Group Species
Con tent /μg·g -1
I II III IV
Woody S ect.Ara lia A.echinocaul is 0.047 0.016 0.022 0.117
A.decaisneana 0.019 1.744 0.182 0.051
A.ch inensis var.nuda - 0.028 0.148 0.036
A.ch inensis var.dasyphyl loides 0.080 0.021 0.053 +
S ect.Digi t ipanicula Hoo A.elata 0.082 0.022 0.028 0.029
A.hupehensis 0.652 0.165 0.310 +
S ect.Cap ituli-gerae Harms A.dasyphylla 0.019 0.022 0.018 0.050
Herbal S ect.Genuinae Harms A.cordata 0.085 + - 4.257
S ect.Anomalae Harms A.henryi 5.227 + 0.051 4.051
A.fargesi i - - + -
A.a tropurp urea 0.037 - 3.059 0.039
I～ IV cf Tab 1.+:The content is less than 0.015μg·g -1;-:Not detected.
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Fig 1　Chromatogram of standards(A), A .cordatad (B)and A .asyphy lla (C)Elute was
detected at 276 nm (0.00 ～ 8.30 min), 343 nm (8.30 ～ 14.00 min), 361 nm (14.00 ～
20.00 min)and 272 nm (20.00 ～ 30.00 min).I ～ IV cf Tab 1.
讨 论
本研究测定了 11 种(包括两个变种) 木属植
物的 4种化学成分 ,即黄酮 、二氢黄酮 、查耳酮和香
豆精各一种 。由于该属植物从形态 、地理分布明显
分为两个自然群 ,通过本分析方法比较两个自然群
上述 4种化学成分的相对含量后 ,可清楚地发现 ,草
本自然群中除龙眼 、独活外 ,黄酮类成分含量较高 ,
且不同种之间差异较大 ,但香豆精成分的含量均较
低或检测不出 ,而在木本自然群中均含有香豆精成
分 ,因而可以认为香豆精类成分是木本自然群区别
于草本自然群的特征成分 。结合前文[ 3]的结果可
以发现 ,草本自然群和木本自然群均有各自的特征
性成分 ,即草本自然群中二萜类成分含量较高 ,而木
本自然群中香豆精成分含量相对较高 。从而为将
木属中草本和木本两个自然群划分为两个独立的亚
属提供了化学分类学的依据 。
参 考 文 献
1　中国科学院中国植物志编委会.中国植物志.第 54 卷.北
京:科学出版社 , 1978.150
2　许旭东 ,杨峻山 , 朱兆仪. 木属植物三萜皂甙研究进展.
药学学报 , 1997 , 32∶711
3　许旭东 ,张曙明 , 杨峻山 ,等.反相高效液相色谱法测定
木属中二萜酸 , 三萜酸和三萜皂甙的含量.药学学报 ,
1998 , 33∶933
DETERMINATION OF FLAVONES AND COUMARIN IN ARALIA BY RP-HPLC
Xu Xudong (Xu XD), Zhang Shuming (Zhang SM), Zhang Yumei(Zhang YM),
Lin Geng (Lin G)and Yang Junshan(Yang JS)
(Inst itute of Medicinal Plant Development , Chinese Academy of Medical Sciences
and Peking Union Medical College , Beijing 100094)
ABSTRACT　AIM:To reveal the dif ference between the g roups of herbal and woody in Aralia.
METHODS:An accurate RP-HPLC method w ith variable wavelength for the determination of neoliguirit in(I),
5 ,8-dimethoxycoumarin (II), isoliquritoside (III) and 8-[(2″, 3″)-prenyl ]-4′-methoxy-flavone-7-O-β-D-
g lucopyranosy l-(2※1)-α-L-rhamnopy ranoside(IV)in 11 species of Aralia has been developed.The analytical
column used was Supelco SIL-LC-18.The mobile phase w as 40%MeOH to absolute MeOH.Gradient elut ion
w as employed.The f low rate w as 1.0 ml·min-1.From 0.00 ～ 8.30 min the elute was detected at 276 nm ,
8.30 ～ 14.00 min at 343 nm , 14.00 ～ 20.00 min at 361 nm and 20.00 ～ 30.00 min at 272 nm.During the
detection , the w avelength w as changed to obtain high sensitivity and precision.The linear ranges of I ～ IV w ere
0.0175 ～ 0.5600 μg , 0.0118 ～ 0.3760 μg , 0.0090 ～ 0.2875 μg and 0.0097 ～ 0.3090 μg , respectively.The
recoveries of I ～ IV w ere between 94.78% and 98.92%.RESULTS:The content of coumarin w as higher in
w oody than in herbal.CONCLUSION:Coumarin is the specif ic constituent in the group of herbal , which is the
difference from the w oody .
KEYWORDS　RP-HPLC;Aralia;flavonoids;coumarin
·48· 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 1999 , 34(1)∶46～ 48