全 文 ：中国当代医药 CHINA MODERN MEDICINE
·药品鉴定· 2012 年 10月第 19卷第 30期
安儿宁颗粒由天竺黄、短管兔耳草、岩白菜、高山辣根菜
等九味药材组方而成，具有清热祛风、化痰止咳的功效，主要
用于小儿风热感冒、咳嗽有痰、发热咽痛、上呼吸道感染见上
述症候者[1]。方中君药岩白菜为民间常用药，最早记载于清《分
类草药性》，具有滋补、止血、止咳等功效[2-3]。 岩白菜素为岩白
菜主要药效成分，具有收敛止泻、止血止咳、舒筋活络的功效，生
理活性显著，为镇咳祛痰药之良药，多用于民族药中肺系统疾
病及消化道系统疾病的治疗 [4-6]，因此选取岩白菜素作为安儿
宁颗粒含量测定指标。文献报道岩白菜素的含量测定方法主要
有紫外分光光度法[7-8]、薄层扫描法[9-10]和高效液相色谱法[11-13]。
本实验采用高效液相色谱法（HPLC）对安儿宁颗粒中岩白菜
素进行了含量测定，并对其进行了方法学研究。本文首次建立
了安儿宁颗粒中岩白菜素的含量测定方法，该方法简便易行，
专属性强，稳定性、重复性较好，精密度、回收率也较高，因此
能够作为安儿宁颗粒中岩白菜素的质量控制方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
1220型安捷伦高效液相色谱仪；Boston C18色谱柱（250mm×
4.6 mm，5 μm）；BT125D 赛多利斯电子分析天平 ，KQ-300B
超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 试药
岩白菜素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测
定用），批号：111532-200202；安儿宁颗粒（青海金诃藏药药
业 股 份 有 限 公 司 ）， 批 号 分 别 为 20091005、20091110、
20091227，规格：3 g/袋；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他
试剂均为分析纯。
2 试验方法与结果
2.1 液相色谱条件
色谱柱：Boston C18色谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm），柱
温：25℃，流动相：甲醇-水（17∶83，V/V），流速：1.0 mL/min，检
测波长：275 nm，进样量：10 μL。理论板数按岩白菜素峰计算
应不低于 2 000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取岩白菜素对照品 12.62 mg，
置 25 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀；精密量
取 10 mL，置 100 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即
得（岩白菜素含量为 50.48 μg/mL）。
2.2.2 供试品溶液的制备 本品研细后， 取粉末 2 g， 精密称
定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，密塞，称定重
量，超声处理 30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的
重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方量以相同制剂工艺制备
缺少岩白菜药材的阴性对照样品，照“2.2.2”项下的供试品溶
液的制备方法同法制得阴性样品溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 系统适用性考察与阴性干扰试验 照“2.1”项所述的液相
色谱条件进行测定，精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性
样品溶液各 5 μL，分别注入液相色谱仪。 试验结果：供试品色
谱中， 在与对照品溶液色谱峰相应的位置上检出相应的色谱
峰，且岩白菜素色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于 1.5；阴性
对照溶液在与对照品溶液色谱峰相应的位置上没有相应的色
谱峰，表明阴性样品对供试品的测定没有干扰。 结果见图 1。
HPLC法测定藏药安儿宁颗粒中岩白菜素的含量
李怀平 1，2 王唯红 1 孙绪丁 2
1.山东大学药学院，山东济南 250012；2.山东阿如拉药物研究开发有限公司，山东济南 250101
[摘要] 目的 建立测定安儿宁颗粒中岩白菜素含量的 HPLC法。 方法 采用 Boston C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），
柱温为 25℃，以甲醇-水（17∶83，V/V）为流动相，流速为 1.0 mL/min，检测波长为 275 nm，进样量为 10 μL。 结果 在
10.1~101.0 μg/mL 浓度范围内，岩白菜素的色谱峰峰面积与对照品浓度线性关系良好（r = 0.999 8，n = 5），平均加样
回收率分别为 98.85%，RSD 为 1.37%（n = 6）。 结论 所建立的含量测定方法简便易行、准确度高、重现性好，可用于
安儿宁颗粒中岩白菜素的质量控制。
[关键词] 岩白菜素；安儿宁颗粒；HPLC；含量测定
[中图分类号] R286 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）10（c）-0066-03
Determination of bergenin in Anerning Keli by HPLC
LI Huaiping1,2 WANG Weihong1 SUN Xuding2
1.Shandong University School of Medicine, Jinan 250012, China; 2.Shandong Arura Pharmceutical Research & Develop -
ment Limited Co., Ltd., Jinan 250101, China
[Abstract] Objective To establish HPLC method for determination of bergenin in Anerning Keli. Methods The content of
bergenin in Anerning Keli was determined by HPLC on a Boston C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) with the column
temperature at 25℃. The mobile phase, a solution of methol and water (17∶83, V/V), was set at a flow rate of 1.0 mL/min. The
detection wavelength was set at 430 nm, and the injection volume was 10 μL. Results The determination of bergenin kept
the good linearity relation in the content range of 10.1-101.0 μg/mL (r = 0.999 8, n = 5). The mean sample recovery rate of
bergenin was 98.85%, and the RSD was 1.37% (n = 6). Conclusion The established method for determination of bergenin is
simple, accurate with good reproducibility, which can be qualified for the quality control of bergenin in Anerning Keli.
[Key words] Bergenin; Anerning Keli; High performance liquid chromatography; Content determination
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CHINA MODERN MEDICINE 中国当代医药
2012 年 10月第 19卷第 30期 ·药品鉴定·
A.对照品溶液；B.供试品溶液：C.阴性对照溶液
图 1 安儿宁颗粒中岩白菜素 HPLC 含量测定色谱图
A. the reference solution; B. the test solution; C. the negative reference
solution
Fig.1 The HPLC chromatogram for determination of bergenin in
Anerning Keli
2.3.2线性关系考察 精密量取岩白菜素对照品溶液（101.0μg/mL）
1、3、5、8、10 mL，分别置 10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，
摇匀，分别精密进样 10 μL 注入高效液相色谱仪，照“2.1”项
所述的液相色谱条件进行测定。以对照品浓度（C）为横坐标，
色谱峰峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线。 试验结果：岩白
菜素回归方程为 A = 6.080 7C+0.480 8，相关系数：R = 0.999 8。
结果表明：岩白菜素在 10.1~101.0 μg/mL 浓度范围内，岩白
菜素色谱峰的峰面积（A）与对照品浓度（C）线性关系良好。
2.3.3 精密度试验 照“2.1”项所述的液相色谱条件进行测定，
精密吸取同一对照品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，连续测定
6 次， 记录岩白菜素色谱峰的峰面积并计算相对标准偏差。
试验结果：岩白菜素对照品色谱峰峰面积的平均值为 310.3，
RSD = 0.53％（n = 6）。 结果表明：该方法仪器的精密度良好。
2.3.4 稳定性试验 按照“2.2.2”项所述的方法制备供试品溶
液，精密吸取同一供试品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，照“2.1”
项所述的液相色谱条件进行测定， 以后每隔 2 h 测定 1 次，
考察 8 h， 记录岩白菜素色谱峰的峰面积并计算相对标准偏
差。 试验结果：供试品溶液中岩白菜素色谱峰峰面积的平均
值为 324.2，RSD = 0.90％（n = 5）。 结果表明：供试品溶液中
岩白菜素在 8 h内保持稳定。
2.3.5重复性试验 取同一批安儿宁颗粒样品（批号为20091227）
6 份，按照“2.2.2”项所述的方法制备供试品溶液，照“2.1”项
所述的液相色谱条件进行测定， 分别精密吸取对照品溶液
5、10 μL，供试品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标
两点法方程计算含量。 试验结果：供试品溶液中岩白菜素含
量的平均值为 3.954 mg/袋，RSD 为 1.15％（n = 6）。 结果表
明：该分析方法重复性较好。
2.3.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批安儿宁颗
粒样品（批号为 20091227，样品中岩白菜素的含量为 3.954mg/袋）
1 g，共 6份，分别置具塞的锥形瓶中，各精密加入对照品溶液
（岩白菜素含量为 50.48 μg/mL）25 mL 和 25 mL 甲醇 ，按
“2.2.2”项所述的方法制备供试品溶液，按“2.1”项所述的液
相色谱条件进行测定， 分别精密吸取对照品溶液 5、10 μL，
供试品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法方
程计算含量，并计算回收率。试验结果：供试品中岩白菜素平
均加样回收率为 98.85%，RSD 为 1.37% （n = 6）。 结果表明：
该测定方法测定结果准确。 结果见表 1。
2.3.7 样品含量测定 按照“2.2.2”项所述的方法制备批号分
别为 20091005、20091110、20091227 的三批安儿宁颗粒供试
品溶液（每批 3份）。按“2.1”项所述的液相色谱条件进行含量
测定，分别精密吸取对照品溶液 5、10 μL，供试品溶液 10 μL，
注入液相色谱仪，测定，以外标两点法方程分别计算供试品
中岩白菜素的含量。 结果见表 2。
3 讨论
3.1 测定波长的选择
取岩白菜素对照品溶液，置紫外分光光度计于 190～400 nm
波长范围内进行扫描，记录紫外吸收光谱图。 结果显示岩白
菜素对照品溶液在 220 nm 和 275 nm 有最大吸收峰，分别以
220 nm 和 275 nm 作为检测波长进行考察，结果表明 275 nm
波长下供试品色谱图中基线平稳，杂质峰较少，分离度效果
好。 文献报道岩白菜素含量测定也多采用 275 nm[12-16]，因此
选定 275 nm 为检测波长。
3.2 流动相的选择
参照相关文献对流动相进行考察，发现不需加入酸液或
1
2
3
4
5
6
1.002 6
1.005 2
1.002 1
1.009 5
1.003 0
1.001 7
1.321 4
1.324 8
1.320 8
1.330 5
1.321 9
1.320 2
1.262 0
2.565 3
2.602 5
2.572 6
2.558 1
2.569 7
2.556 2
98.56
101.24
99.19
97.27
98.87
97.94
98.85 1.37
序号
No.
样品（g）
Sample（g）
样品含量（mg）
Original（mg）
加入量（mg）
Added（mg）
测得量（mg）
Detected（mg）
回收率（%）
Recovery（%）
平均回收率（%）
Mean recovery（%）
RSD（%）
表 1 加样回收率试验结果（n = 6）
Table1 Results of the sample recovery rate（n = 6）
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中国当代医药 CHINA MODERN MEDICINE
·药品鉴定· 2012 年 10月第 19卷第 30期
20091005
20091110
20091227
2.006 5
2.001 7
2003 2
2.002 6
2.003 5
2.005 3
2.001 9
2.007 2
2.004 6
4.125 6
4.168 5
4.102 3
4.261 8
4.207 1
4.298 5
3.956 2
3.933 7
3.986 9
4.132 1
4.255 8
3.958 9
0.81
1.08
0.67
批号
Lot No.
称样量（g）
Sampling weight
（g）
含量（mg/袋）
Content
（mg/bag）
平均含量（mg/袋）
Mean content
（mg/bag）
RSD
（%）
表 2 安儿宁颗粒中岩白菜素含量测定结果（n = 3）
Table2 Results of content determination for bergenin in
Anerning Keli（n = 3）
110824
110825
110826
94.45
94.55
94.83
0.87
0.99
0.77
序号 平均溶出度（%） RSD（%）
表 3 15 min 时米格列奈钙分散片溶出度测定结果（n = 6）
Tab.3 The results of dissolution of mitiglinide calcium
hydrate dispersible tablets at 15 min（n = 6）
从米格列奈钙分散片溶出曲线可以看出米格列奈钙分
散片 3 批样品，在 10 min 时，溶出量均可达到标示量的 80%
以上，在 15 min 时，则可溶出标示量的 94% 以上。
通过米格利奈钙分散片的溶出度测定结果，可知 3 批米
格利奈钙分散片 15 min 时的溶出度为 94.45% 、94.55% 、
94.83%，RSD 为 0.87%、0.99%、0.77%，均符合规定。
综上所述， 本文建立了一个可行的溶出度测定方法，用
此法可较好地控制本片质量。
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（收稿日期：2012-06-13 本文编辑：郭静娟）
缓冲液即可获得良好的色谱峰，文献多采用甲醇-水系统[12-16]，
因此选择了甲醇-水系统为流动相。 分别考察了甲醇-水（20∶
80，V/V）、甲醇-水（17∶83，V/V）、甲醇-水（15∶85，V/V）流动相
条件下，供试品溶液中岩白菜素色谱峰的分离效果。 结果表
明，甲醇-水（15∶85，V/V）流动相条件下，岩白菜素峰保留时
间较长；甲醇-水（20∶80，V/V）流动相条件下，岩白菜素峰形
不好；甲醇-水（17∶83，V/V）流动相条件下，岩白菜素保留时
间约 15 min，峰形较好，岩白菜素色谱峰与相邻色谱峰的分
离度均大于 1.5。 因此选用甲醇-水（17∶83，V/V）为本实验的
流动相。
3.3 供试品处理方法的考察
考察了超声提取、回流提取、振揺提取 3 种提取方法，岩
白菜素的提取效果，结果超声提取所得供试品溶液中岩白菜
素含量明显高于回流提取和振揺提取，故选用提取方法为超
声提取；考察了超声时间分别为 20、30、40 min 时，岩白菜素
的提取效果， 结果 20 min 提取不完全，30、40 min 提取所得
供试品溶液中岩白菜素含量无明显差别，故选择超声时间为
30 min； 选择提取溶剂时分别考察了甲醇、50％甲醇、95％乙
醇 3 种溶剂，结果甲醇作为提取溶剂时所得供试品溶液中岩
白菜素含量最高，故选择提取溶剂为甲醇。
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（收稿日期：2012-07-11 本文编辑：郭静娟）
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