全 文 ：食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品安全与检测
· 278 ·
2014年 第39卷 第01期
收稿日期：2013-08-30 *通讯作者
基金项目：国家自然科学基金项目(39860048，30060040)。
作者简介：田建平(1972—)，男，博士研究生，副教授，研究方向为种质资源学。
田建平1,2,3，李娟玲4，胡远艳5，刘国民1,2*
(1.海南大学苦丁茶研究所，海口 570228；2.海南大学农学院，海口 570228；3.海南
医学院药学院，海口 571101；4.海南大学园林园艺学院，海口 570228；5.海南大学
热带生物资源教育部重点实验室，海口 570228)
摘要：应用超声提取、络合反应及紫外分光光度法测定了5种冬青属苦丁茶植物总黄酮的含
量。就5批次栽培材料总黄酮的平均值而言，苦丁茶冬青(3.96%)>五棱苦丁茶(3.67%)>霍山冬青
(3.63%)>枸骨(3.04%)>大叶冬青(2.64%)；低温干燥放置2月后的叶片总黄酮含量明显降低；栽培
苦丁茶冬青成熟叶片所含总黄酮含量平均值要高于野生成熟叶所含量；就所有个体总黄酮含量
而言，霍山冬青最高(7.39%)；幼嫩叶的总黄酮含量具有较高的水平。结果表明霍山冬青是一种
良好的种质资源，另外利用幼嫩叶加工成苦丁茶具有其科学性。
关键词：冬青属苦丁茶；总黄酮；含量测定；资源评价
中图分类号：TS 275.2 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2014)01-0278-04
Resources evaluation and content of total fl avonoids of leaves from
Ilex kuding and relatives species
TIAN Jian-ping1,2,3, LI Juan-ling4, HU Yuan-yan5, LIU Guo-min1,2*
(1.Kudingcha Research Institute of Hainan University, Haikou 570228; 2.College of
Agriculture, Hainan University, Haikou 570228; 3.Department of Pharmacy, Hainan Medical
College, Haikou 571101; 4.Horticulture and Landscape College, Hainan University, Haikou
570228; 5.Key Laboratory for Tropical Biological Resources, MOE, Hainan University, Haikou
570228)
Abstract: The content of total fl avonoids from 5 species of Ilex L. used as kudingcha tea were determined
using ultrasonic extraction, complexation reaction and UV spectrophotometry. On the average of value
of total fl avonoids from 5 batches of planting materials, Ilex kudingcha (3.96%)>I.pentagona (3.67%)>I.
huoshanesis (3.63%)>I.cornuta (3.04%)>I. latifolia (2.64%); and total flavonoids in the leaves of placed
after two months at low temperature dried has decreased signifi cantly; On the average, the content of total
fl avone content of cultivation of mature leaves of I. kudingcha was signifi cantly higher than that of wild
mature leaves. The content of total fl avonoids of I.huoshanesis was highest (7.39%) in all individuals from
冬青属苦丁茶叶总黄酮含量测定与
资源评价
食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 食品安全与检测
· 279 ·
2014年 第39卷 第01期
苦丁茶为源自我国的一类历史悠久的纯天
然保健饮料佳品，常大量出口东南亚地区，深
受人们欢迎。药理实验表明，其对人体具有重
要的保健价值[1-3]。苦丁茶原植物来源多样，
其中主要为冬青属植物，如苦丁茶冬青(I l e x
kudingcha C.J.Tseng)、大叶冬青(I.latifolia Thunb)、
枸骨(I.cornuta Lindl.)、霍山冬青(I.huoshanesis
Y.H.He)、五棱苦丁茶(I. pentagona S.K.chen，
Y.X.Feng et C.F.Liang)等，它们主要分布在中国西
南和华南等地区[4]。根据种植面积、经济价值和
国内外影响，苦丁茶冬青被众多专家认定为“正
宗苦丁茶”。冬青属苦丁茶所含化学成分众多，
其中黄酮是冬青属苦丁茶植物所含的一类化学成
分，其对人体具有众多重要的生理活性作用，因
此有必要对苦丁茶中所含有的黄酮成分含量进行
研究[5]。已有研究表明，在5种冬青属苦丁茶植物
中，仅有大叶冬青、枸骨和苦丁茶冬青的黄酮含
量已进行了研究，但多从提取方法优化的角度进
行探讨[6-9]。为了深入系统研究冬青属苦丁茶资源
状况，本研究拟整体上比较5种冬青属苦丁茶植物
黄酮含量差异，并对苦丁茶冬青不同产地野生与
栽培材料、不同发育时期和贮藏措施下叶片的黄
酮含量差异进行研究，以为合理利用和评价冬青
属苦丁茶植物种质资源提供依据。
1 材料与方法
1.1 仪器和试剂
180 W 40 kHz超声波清洗机：宁波新芝生物
fi ve species. Content of total fl avonoids in young leaves maintained a higher level. The results showed
that I.huoshanesis was a better germplasm resources, and it had a scientific significance that people
used the tender leave as materials of Kudingcha tea.
Key words: Kudingcha of Ilex; total fl avonoids; content of determination; resources evaluation
表1 实验材料代码及产地来源
代码 物种名称 产地来源 类别 代码 物种名称 产地来源 类别
kw1 I.kudingcha 广西清新 野生 g1 I.cornuta 海南海口 栽培
kw2 I.kudingcha 广东大埔 野生 g2 I.cornuta 湖南祁东 栽培
Kw3 I.kudingcha 广西上林 野生 g3 I.cornuta 湖北宜昌 栽培
Kw4 I.kudingcha 海南五指山 野生 g4 I.cornuta 贵州贵阳 栽培
Kw5 I.kudingcha 海南白沙 野生 g5 I.cornuta 湖南衡阳 栽培
Kc1 I.kudingcha 湖南通道 栽培 WL1 I.pentagona 广西桂林 栽培
Kc2 I.kudingcha 广西大新 栽培 WL2 I.pentagona 湖南长沙 栽培
Kc3 I.kudingcha 海南五指山 栽培 WL3 I.pentagona 广西马山 栽培
Kc4 I.kudingcha 海南万宁 栽培 WL4 I.pentagona 广西上林 栽培
Kc5 I.kudingcha 海南定安山 栽培 WL5 I.pentagona 广西大化 栽培
D1 I.latifolia 浙江淳安道 栽培 HS1 I.houshanensis 安徽霍山 栽培
D2 I.latifolia 浙江缙云 栽培 HS2 I.houshanensis 安徽霍山 栽培
D3 I.latifolia 浙江永康 栽培 HS3 I.houshanensis 安徽霍山 栽培
D4 I.latifolia 浙江磐安 栽培 HS4 I.houshanensis 安徽霍山 栽培
D5 I.latifolia 浙江新昌 栽培 HS5 I.houshanensis 安徽霍山 栽培
科技技术有限公司；uv-1800紫外分光光度仪。
亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠(分析纯)；乙
醇(分析纯)；超纯水。
1.2 材料
实验所用的5种植物均从全国各地采集而来，
标本经海南大学黄世满教授鉴定，分别为冬青
科植物苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C.J.Tseng)、大
叶冬青(I.latifolia Thunb.)、五棱苦丁茶(I.pentagona
S.K.Chen，Y.X.Feng et C.F.Liang)、枸骨(I.cornuta
Lindl.)、霍山冬青(I.huoshanesis Y.H.He)。其中苦丁
茶冬青包含野生与栽培两种材料，其余4种植物来
源于栽培材料。凭证标本保存于海南大学苦丁茶
研究所标本室。实验材料详细产地见表1所示。
1.3 方法
1.3.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品10
mg，置50 mL量瓶中，加70%乙醇适量，利用超
食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品安全与检测
· 280 ·
2014年 第39卷 第01期
声提取器法溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇
匀。即得(每1 mL含无水芦丁0.2 mg)。
1.3.2 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液0、
1、2、3、4、5、6 mL分别置于25 mL量瓶中，各
加水至6 mL分别加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，
静置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，静置6
min，加4%氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，
摇匀，放置15 min，以相应的溶剂为空白，照分
光光度法，在510 nm波长处测定吸收度。以浓度
为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，得
回归方程Y=15.229X-0.0048(r2=0.9923)(图1)；
本研究中，总黄酮(以芦丁计)含量测定时每
批材料测量均重复3次，苦丁茶冬青5种来源的野
生材料叶片不同发育时期(老叶、成熟叶、幼嫩叶)
经低温干燥处理室温密封保存2月后其所含总黄
酮含量比较见图2所示。由图2可知，低温放置2月
后总黄酮的含量大大低于新鲜叶的总黄酮含量。
在新鲜叶材料中，老叶、成熟叶和幼嫩叶中的
总黄酮含量变化无规律，大部分的老叶的总黄酮
含量大于幼嫩叶，成熟叶的总黄酮含量最低，为
2.85%((广东大埔产)。最高值为新鲜老叶，其总黄
酮含量为6.11%(广西清新产)。而嫩叶中总黄酮的
含量保持了较高的水平。
2.2 苦丁茶冬青不同产地野生与栽培材料新鲜成
熟叶总黄酮含量的差异
图2 5种产地苦丁茶冬青野生材料老叶、幼叶和成熟叶所
含总黄酮含量比较(n=3)
图3 不同产地苦丁茶冬青野生与栽培材料成熟叶总黄酮
含量(n=3)
图4 枸骨在放置2月处理和新鲜叶条件下总黄酮含量比较
(n=3)
图1 总黄酮计算标准曲线图


Z

Y


3












      
≿Ꮢ
।
ٵ
Ꮢ
।ٵᏒ
㏫ᕓ
।ٵᏒ








LX LX LX LX LX
䛺⩋㠒̭㡢ۘ䱾ᱼ᫅
ᕧ
台
䚚
䉔
䛻
ܲ
᪜

ะ⤲㔭ढ
᫜凈㔭ढ
ะ⤲Ꭸပढ
᫜凈Ꭸပढ
ะ⤲᜼⛋ढ
᫜凈᜼⛋ढ








LX LX LX LX LX LD LD LD LD LD
㠒̭㡢ۘ䱾䛺⩋ᱼ̺᫅ᵩഥᱼ᫅
ᕧ
台
䚚
ॗ
䛻
䉔
䛻
ܲ
᪜

ᕧ
台
䚚
ॗ
䛻
䉔
䛻
ܲ
᪜







( ( ( ( (
᳤俔ᵩഥᱼ᫅
ะ⤲᜼⛋ढ
᫜凈᜼⛋ढ
1.3.3 重复性实验 对苦丁茶冬青栽培材料5批进
行重复性实验，其平均值(x
-
)=2.85%(质量浓度，g/
L，以下同)，SD=0.03，说明重复性较好。
1.3.4 供试品溶液的制备 苦丁茶样品于50 ℃过
夜烘干，粉碎后过24目筛备用。精密称定约1.000
g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇30 mL，
称定质量，超声提取20 min，放冷，再称定质
量，用70%乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤
液置50 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。取
供试品溶液2 mL置25 mL量瓶中，照标准曲线制备
项下方法，测定吸收度，用回归方程求出供试品
溶液中总黄酮的含量。
2 结果与分析
2.1 苦丁茶冬青不同发育阶段的新鲜叶与处理叶
的总黄酮含量的差异比较
5种产地的苦丁茶冬青野生与栽培材料新鲜成
熟叶总黄酮含量见图3所示。整体上苦丁茶冬青野
生材料所具的总黄酮含量差异要小于栽培材料。
但在10个样品中为栽培品kc2(广西大新产)总黄酮
含量最高，其质量百分数达6.16%，最低栽培kc4
为1.65%(海南万宁产)；另外在野生品中，海南白
沙产苦丁茶冬青总黄酮含量最高，其质量百分数
为4.26%，广东大埔产最低为2.85%。5批次苦丁茶
冬青野生材料与栽培材料的成熟叶平均值分别为
3.65%、3.96%。
2.3 不同处理措施对黄酮含量的影响
不同处理措施对叶片总黄酮的含量的变化有
重要影响，由图2和图4可知，新鲜叶所含总黄酮
含量比低温处理放置2月后所含总黄酮含量要显著
较高；就成熟叶而言，苦丁茶冬青和枸骨新鲜成
熟叶总黄酮含量与处理叶所含总黄酮含量的差异
食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 食品安全与检测
· 281 ·
2014年 第39卷 第01期
可高达3倍。枸骨新鲜成熟叶中含量最高者为湖南
祁东产，其含量为4.23%，最低者为贵州贵阳产，
其含量为2.51%。5批次枸骨栽培材料总黄酮平均
值为3.04%。
2.4 5种冬青属苦丁茶植物栽培品新鲜成熟叶黄
酮(芦丁)含量比较
叶中所含总黄酮含量最高(7.39%)，因此霍山冬青
是一种良好的苦丁茶源种质资源。
3.3 总黄酮含量分析对种质资源开发的作用
5种冬青属苦丁茶植物总黄酮含量在不同种或
同种个体间存在较大的差异，这些差异可能与物
种的来源有关。同时作为产量较大的苦丁茶冬青
也应注意进一步优化在栽培中表现优异的材料，
同时也要从不断从野生种质资源中选育新的品
种，以增强产品的质量和产量。
参考文献：
[1]　NISHIMURA K, TOSHIYUKI F, TOSHIO M. Activity-
guided isolation of triterpenoid acyl CoA cholylacyl
transferase inhibitors from Ilex kudincha[J]. J.Nat.
prod,1999,62(7):1061-1064
[2]　JOO YK, HA Y J, HONG K L. Protective effect of Ilex
latifolia, a major component of “kudingcha”, again
transient focal ischemia-induced neuronal damage in
rats[J]. J Ethnopharm,2011,133:558-564
[3]　王从周,刘荣,欧阳明安.冬青属植物化学成分研究进展
[J].亚热带植物科学,2006,35(3):61-69
[4]　陈书坤,俸宇星.中国植物志.45(2)[M].北京:科学出版
社,1999
[5]　谭秦莉,刘冬,李玉宝,等.总黄酮化合物药理作用研究进
展[J].安徽中医学院学报,2009,28(3):62-64
[6]　候冬岩,回瑞华,杨梅,等.苦丁茶中总黄酮的三波长-光谱
法定量分析[J].分析化学,2004,32(6):783-786
[7]　潘慧娟,唐婷.反相高效液相色谱法测定苦丁茶中黄酮
类化合物(芦丁)的含量[J].杭州医学高等专科学校学
报,2003,24(3):126-128
[8]　李娜,毛永强.苦丁茶冬青叶总黄酮微波提取工艺[J].贵州
农业科学,2011,39(5):212-214
[9]　郭艳华,张玉敏,陈达畅.微波法提取生姜总黄酮及光热
稳定性研究[J].应用化工,2010,39(2):233-236
[10]　李娈,蒋道松,刘硕.富贵菜茎及不同发育时期叶总黄酮
含量的比较[J].湖南林业科技,2007,34(3):13-14
[11]　李宏杨,刘飞,张凤琴,等.冬青科苦丁茶中熊果酸和齐
墩果酸含量的测定[J].安徽农业科学,2010,38(14):7244-
7246
注：D：大叶冬青；WL：五棱苦丁茶；HS：霍山冬青。
图5 3种冬青属苦丁茶植物5种不同地域的栽培成熟叶所含
总黄酮含量比较(n=3)
ᕧ
台
䚚
ॗ
䛻
䉔
䛻
ܲ
᪜











% 8- )4
ᱼ᫅
ᱼ᫅
ᱼ᫅
ᱼ᫅
ᱼ᫅
大叶冬青、五棱苦丁茶和霍山冬青新鲜成
熟叶所含总黄酮含量如图5所示。霍山冬青、大
叶冬青、五棱苦丁茶所含总黄酮量中最高者含量
最高(7.39%)。根据5批次材料总黄酮含量的平均
值，所含总黄酮含量最高者为五棱苦丁茶，平均
值为(3.67%)；含量次之者为霍山冬青，平均值为
3.63%，最低者为大叶冬青，平均值为2.64%。但
个体含量最高者为霍山冬青，含量为7.39%。
3 结论
3.1 幼嫩叶中总黄酮含量对苦丁茶食品保健价值
的影响
总黄酮的含量与植物的不同生长发育时期有
着密切关系，已有研究表明，总黄酮含量在幼嫩
叶中保持了一定水平，其原因是总黄酮的生物合
成和积累可能主要与叶器官的早期发育相关[10]。
在本研究中，苦丁茶冬青和枸骨新鲜幼嫩叶的含
量也保持了较高的水平，证实了上述现象，同时
也表明苦丁茶用其幼嫩叶为原料进行食品加工具
有一定的合理性，其对保持苦丁茶的保健价值作
用具有重要的作用。
3.2 基于总黄酮基础上的苦丁茶种质资源评价
5种冬青属苦丁茶类植物中苦丁茶冬青是应用
最广泛的物种，就5批次栽培材料总黄酮的平均值
而言，苦丁茶冬青(3.96%)>五棱苦丁茶(3.67%)>霍
山冬青(3.63%)>枸骨(3.04%)>大叶冬青(2.64%)，而
从已报道的冬青属植物所含的齐墩果酸和熊果酸
的含量而言，霍山冬青位列第二[11]；就单批次所
含总黄酮含量而言，霍山冬青在5种植物栽培成熟
食品科技
Http://www.e-foodtech.net
E-mail:shipinkj@vip.163.com