全 文 ：Chinese Journal of New Drugs 2013，22(4)
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中国新药杂志 2013 年第 22 卷第 4 期
［基金项目］ 成都医学院 2009 年科研基金(CYZ09-011)
［作者简介］ 吴敏，女，博士，副教授，主要从事中药新型给药系统研
究。联系电话:(028)62308653，E-mail:wuminzhaofeng@ 126． com。
·实验研究·
岩白菜素包合物渗透泵片的 Beagle犬体内药动学研究
吴 敏1，谢 佳2，曾 建1，刘 洪2，李德银1
(1 成都医学院药学院，成都 610081;2 四川省天然药物研究所，成都 610041)
［摘要］ 目的:研究岩白菜素包合物渗透泵片在 Beagle 犬体内的药动学，对体外释放和体内吸收的相
关性做出评价，确认其处方设计的合理性。方法:按照《中华人民共和国药典》附录中转篮法测定体外释放
度，以岩白菜素普通片为对照，采用 HPLC-DAD测定犬血浆中岩白菜素浓度。采用 Loo-Riegelman 法计算药
物体内吸收百分率。结果:体外释放度数据(R)与相应各时间点的体内药物吸收百分率(F)回归方程为:F
= 0． 88R + 4． 262(r = 0． 923 0，P ＜ 0． 01)。结论:岩白菜素包合物渗透泵片体内吸收和体外释放相关性良好，
与普通片相比可有效促进药物的体内吸收。
［关键词］ 岩白菜素;渗透泵片;Loo-Riegelman法;体内外相关性
［中图分类号］ R969． 1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1003 － 3734(2013)04 － 0465 － 05
Pharmacokinetics of bergenin inclusion complex
osmotic pump tablets in Beagle dogs
WU Min1，XIE Jia2，ZENG Jian1，LIU Hong2，LI De-yin1
(1 Department of Pharmacy，Chengdu Medical College，Chengdu 610081，China;
2 Sichuan Institute of Nature Drug，Chengdu 610041，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the pharmacokinetics of bergenin inclusion complex osmotic pump
tablets in beagle dogs，and its in vitro-in vivo correlation and rationality of formulation design． Methods:The in
vitro release was tested according to Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China，Method 1 of Appendices
XC． The HPLC-DAD methods were developed and validated for bergenin assay in plasma samples using bergenin
conventional tablets as reference preparation，and the in vivo pharmacokinetics was studied by Loo-Riegelman meth-
od． Results:The linear regressive equation was established between the absorption percentage in vivo and the accu-
mulated release percentage in vitro of bergenin as F =0． 88R +4． 262 (r =0． 923 0，P ＜0． 01)． Conclusion:There is
a significant correlation between the in vivo absorption and the in vitro release of bergenin inclusion complex osmotic
pump tablets，and it can effectively promote drug absorption in vivo compared with the conventional tablets．
［Key words］ bergenin;osmotic pump tablets;Loo-Riegelman method;in vitro and in vivo correlation
岩白菜素(bergenin，BN)对咳嗽中枢有选择性
抑制作用，治疗气管炎有独到之处［1］。但该药在水
中微溶，在湿、光照条件下不稳定;在体内透膜性差、
肠内不稳定且代谢迅速［2］，其性质类似于生物药剂
学分类系统中低溶解度、低渗透性的Ⅳ类药物。基
于以上特点，BN普通制剂均存在口服吸收差、生物
利用度较低的问题。因此采用增溶、提高稳定性和
促进透膜吸收的制剂技术及辅料，可望改善其体内
吸收。笔者在前期研究［3］中结合包合技术与渗透
泵片制剂技术，制成了零级释药特征显著、累积释药
完全的 BN包合物渗透泵片。本实验采用反相高效
液相色谱法对 BN包合物渗透泵片药动学和体内外
相关性进行研究，以进一步确认难溶性、不稳定与低
渗透性中药 BN包合物渗透泵片处方设计的合理性
与有效性。
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材 料
LPG 3400A高效液相色谱仪(DAD-3000 检测
器，Dionex) ;BS 224S 电子天平(德国 Sartorius) ;
TGL 16G 台式离心机(上海安亭科学仪器厂) ;
XW 80A 旋涡混合器(上海青浦沪西仪器厂) ;氮
吹仪(自制) ;HH 2 数显恒温水浴锅(上海常思仪
器厂) ;Finnpipette 移液器(美国 Thermo Scientific)。
BN对照品(中国食品药品检定研究院，批号:
111532-200202，纯度 ＞ 99%) ;对乙酰氨基酚对照品
(中国食品药品检定研究院，批号:100018-200408，
纯度 ＞99%) ;BN普通片(自制，规格:每片 125 mg) ;
BN包合物渗透泵片(自制，规格:每片 47 mg)。甲醇
(色谱纯，山东禹王实业有限公司禹城化工厂) ;磷
酸(分析纯，四川成都方舟化学试剂厂) ;HPLC 所
用水为纯化水;其他试剂均为分析纯。
健康 Beagle犬 6 只(成都达硕生物科技有限公
司) ，雄性，体重(9 ± 1． 0)kg，实验前未用任何药物，
许可证号:SCXK(川)2010-001 号。
方 法
1 体外分析方法的建立
称取 BN及各辅料超声溶解于释放介质中，于波
长 200 ～600 nm范围内扫描，结果表明，BN在 273 nm
处存在最大吸收，各辅料在该波长附近对测定无干
扰，因此选择 273 nm作为测定波长。
配制系列 BN 标准工作液，以浓度(C)对吸光
度(A)进行线性回归，得到标准曲线方程为:C =
24. 5A － 0． 000 2，r = 0． 999 9，n = 5。
2 体外释放度
取 BN包合物渗透泵片，照《中华人民共和国药
典》2010 年版二部 XD 释放度测定法第一法，采用
XC溶出度测定法第二法的装置，以纯化水 600 mL
作为释放介质，释放介质温度为(37 ± 0． 5)℃，转速
100 r·min －1条件下进行测定，分别在 0． 5，1，2，4，6，
8，10，12 h取样 6 mL(及时补加同温介质 6 mL)过
滤，取续滤液，以脱气纯化水为空白，在 273 nm处测
定吸光度，根据标准曲线计算 BN累积释放度。
3 BN包合物渗透泵片 Beagle犬体内药动学研究
3． 1 色谱条件
色谱柱:Welchrom-C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm，
美国月旭公司) ，保护柱:C18(15 mm × 4． 6 mm，
5 μm，美国月旭公司) ;流动相:含 0． 02%磷酸的甲
醇-水(18 ∶ 82) ;流速:1 mL·min －1;检测波长:
273 nm;柱温:30 ℃。
3． 2 溶液的配制
3． 2． 1 BN对照品贮备液的配制 精密称取 BN 约
50 mg置 50 mL量瓶中，用纯化水定容至刻度，摇匀，
得到浓度为 1 mg·mL －1的贮备液。
3． 2． 2 对乙酰氨基酚对照品(内标)溶液的配制
精密称取对乙酰氨基酚对照品约 10 mg 至 50 mL量
瓶中，加入纯化水超声使其完全溶解后，稀释并定容
至刻度，得到浓度为 200 μg·mL －1的内标溶液。
3． 3 血浆样品的处理与测定［4］
精密量取血浆样品 500 μL，加入内标溶液 50 μL，
旋涡混合均匀，然后加入 1 500 μL 乙腈涡旋混合
3 min，10 000 r·min － 1离心 5 min 后分离上清液于
40 ℃水浴条件下空气吹干，加 500 μL 甲醇溶解，
涡旋 3 min 后 12 000 r·min － 1离心 10 min，分离上
清液过滤后在“3 ． 1”项色谱条件下进样分析，记
录色谱图、内标峰面积、BN 峰面积，BN 峰面积与
内标峰面积的比值带入标准曲线中，计算血浆
BN 浓度。
3． 4 方法学研究
3． 4． 1 标准曲线的制备 精密吸取不同体积的 BN
对照品贮备液，加纯化水稀释成一系列不同浓度的
对照品工作液，各取 50 μL 加入 450 μL 空白血浆，
得到一系列含药血浆，浓度为 0． 3，0． 5，1，2，6，10，
14，16，18，20 μg·mL －1，按照“3． 3”项方法进行处理
和测定，记录 BN 峰面积及内标峰面积的比值 Y
(As /Ai) ，以药物浓度(X，μg·mL
－1)对 Y 进行线形
回归，得回归曲线方程为:Y = 19． 685X － 0． 017 5，
r = 0． 999 9。表明血浆样品中的 BN 在 0． 3 ～ 20
μg·mL －1范围内，浓度与其峰面积和内标峰面积的
比值有良好的线性关系。BN 在血浆中的定量限为
0． 3 μg·mL －1，并以此作为标准曲线的最低点。
3． 4． 2 精密度 按照标准曲线样品的配制方法，制
成高、中、低 3 种浓度(20，10，1 μg·mL －1)的 BN 血
浆样品，再按照“3． 3”项方法进行处理和测定，以
1 d 内 5 次测定结果计算日内精密度，以 1 周内连续
3 d 测定结果计算日间精密度。计算得日内精密度
RSD分别为 1． 76%，1． 50%，3． 73%;日间精密度
RSD分别为 0． 37%，0． 53%，0． 65%。
3． 4． 3 回收率 按照标准曲线样品的配制方法，制
成高、中、低 3 种浓度 (20，10，1 μg·mL －1)的 BN 血
浆样品，按照“3． 3”项方法进行处理和测定，进样 10
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μL，分别以萃取与未经萃取之比计算回收率。得
低、中、高浓度回收率分别为 82． 23%，88． 86%，
92. 22%，RSD分别为 8． 52%，2． 63%，4． 85%。
3． 5 BN包合物渗透泵片在 Beagle 犬体内的药动
学研究［5 －6］
雄性比格犬(体重 8 ～10 kg)6 只，实验前随机分
为 2组，采用双周期交叉实验设计，禁食 12 h 后分别
口服给予渗透泵片和普通片剂(给药后立即灌服
100 mL水) ，每只服药间隔时间为 5 min。2 组分别在
给药前和给药后 0． 5，1，1． 5，2，2． 5，3，3． 5，4，5，6，8，
12，24，36 h，由前腿静脉取血 2 ～ 3 mL，立即将其移至
涂有肝素的离心管中，4 000 r·min －1离心 10 min，然后
12 000 r·min －1离心3 min。分离上清液于 －20 ℃条件
下保存。1周后两组交叉给药。避光操作。
3． 6 体内外相关性研究方法
BN包合物渗透泵片在体内的吸收符合二室模
型，因此选用 Loo-Riegelman 法，计算其在 Beagle 犬
体内不同时间点的药物吸收百分率(F) ，以各时间
点的体内吸收百分率分别与药物体外释放度(R)测
定结果进行相关性分析，药物吸收百分率计算公式
如下:
F /% =
C t + K10∫
t
0
Cdt +
(Xp)t
Vc
K10∫
∞
0
Cdt
× 100
公式中 C t 为 t 时间的血药浓度; (Xp)t 为 t 时
间的周边室药物量。
结 果
1 BN包合物渗透泵片体外释放度
按照体外释放度试验方法测定 3 批自制 BN 包
合物渗透泵片样品(n = 6) ，其体外平均释放度结果
见表 1。
表 1 BN包合物渗透泵片体内药物吸收百分率
t /h Ct /mg·L－1 K10∫t0 Cdt
(Xp)t
Vc
K10∫∞0 Cdt F /% R/%
0． 5 0 0 0 19． 455 0 7． 73
1 1． 502 0 0 19． 455 0 14． 00
2 6． 345 3． 870 0． 490 19． 455 37． 27 23． 08
4 1． 241 8． 844 1． 016 19． 455 54． 77 37． 70
6 0． 738 10． 220 1． 020 19． 455 61． 99 53． 08
8 0． 619 11． 206 0． 937 19． 455 69． 40 69． 45
12 0． 524 12． 868 0． 735 19． 455 81． 67 93． 19
AUC0 ～ ∞ =26． 760，K10 = 0． 727，K10AUC0 ～ ∞ =19． 455
2 色谱分离
在选定的色谱条件下，测得色谱图见图 1。
由图可知，内标与 BN 的保留时间分别为 8 ． 5 和
15 min，样品中的 BN 与内标达到很好的基线分
离，峰形良好，血浆中的杂质不干扰 BN 与内标的
测定。
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1:内标;2:BN
图 1 BN的 HPLC色谱图
3 药动学数据处理
由测得的血药浓度数据，利用 DAS ver 2． 1． 1
软件进行药动学参数的计算。口服 BN 包合物渗透
泵片 Beagle犬体内的平均药时曲线见图 2。
图 2 犬口服 BN包合物渗透泵片的平均
药时曲线(n = 6，珋x ± s)
4 体内外相关性
体内外相关性数据见表 1。采用 SPSS 13． 0 软
件以 BN包合物渗透泵片体外释放度数据(R)为横
坐标，与其相对应的各时间点的 Beagle 犬体内药物
吸收百分率(F)为纵坐标进行直线回归，得到回归
方程为:F = 0． 88R + 4． 262，r = 0． 923 0。
对方程作直线回归方差分析，结果 P ＜ 0． 05，回
归方程显著，两个变量间具有良好的直线回归关系，
r = 0． 923 0，呈正相关。对相关系数 r 作相关性 t 检
验，结果 P ＜ 0． 01(P = 0． 003) ，可认为 BN包合物渗
透泵片体外释放度与 Beagle 犬体内药物吸收百分
率之间具有直线相关关系，相关性有统计学意义。
讨 论
1 血浆样品的处理方法
有文献［2］选择用乙酸乙酯萃取的方法处理血
样，但通过预实验发现，处理过程繁杂且样品回收率
不高。实验中选择沉淀蛋白的方式，处理过程相对
简单且提高了回收率。实验中曾先后选用乙腈、甲
醇等沉淀蛋白，结果发现甲醇除蛋白效果不佳，杂质
较多。乙腈沉淀蛋白后杂质干扰少，峰形对称，效果
好，能够满足分析要求，故最后确定选择用乙腈沉淀
蛋白。在选定色谱条件下，岩白菜素与内标可完全
分离，血浆内源性杂质与岩白菜素和内标物质可实
现基线分离。
2 体内药物吸收百分率的计算
BN在体内的吸收符合二室模型，参照文献［7］
选用 Loo-Riegelman法递推计算药物在 Beagle 犬体
内不同时间点的药物吸收百分率，计算较简便，可操
作性强。
3 参比制剂的检出问题
BN包合物渗透泵片的体内吸收较之 BN 普通
片有明显提高。限于受试制剂的载药量及检测方法
的灵敏度，实验中参比制剂所用大剂量的 BN 普通
片因溶解度低、稳定性差、透膜吸收差及代谢迅速等
原因，检出时间点较少，最后未能计算出相关的药动
学参数与 BN包合物渗透泵片的相对生物利用度。
实验结果表明，结合 BN 生物药剂学与药动学
性质，在处方设计时通过改善溶出、提高稳定性及膜
通透性能可有效促进难溶性、低渗透性药物 BN 的
口服吸收。
［ 参 考 文 献 ］
［1］ 夏从龙，刘光明，马晓匡． 岩白菜素的研究进展［J］． 时珍国医
国药，2006，17(3) :432 － 433．
［2］ 秦瑄． 岩白菜素的生物药剂学和药代动力学基础研究［D］．
成都:四川大学，2007:36 － 43．
(下转第 494 页)
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医师同意后出院，一周后返院复诊。
2 讨论
疲乏与 CK升高是核苷类似物所共有的常见的
药物不良反应。根据药品说明书及临床经验，相比
之下，替比夫定及拉米夫定较恩替卡韦更为常见，而
替比夫定又较拉米夫定的发生率更高，CK升高的幅
度更大。干扰素也可引起肌痛，但一般程度较轻，经
停用或服用非甾体抗炎药后症状即可缓解。替比夫
定与干扰素联合治疗不仅可影响肌病的发生率，也
影响肌病的发生时间、严重程度及预后。因此临床
上应尽可能避免替比夫定与干扰素或其他核苷
(酸)类似物联用或随意加大剂量使用。一旦确定
肌病为替比夫定与干扰素联用所致，两药应立即停
用。该患者在停用干扰素时即出现四肢肌肉酸痛、
双下肢无力，活动后心悸、气促等临床症状，因此其
肌病的发生与两者联用导致不良反应的累加相关。
并且在肌病发生的初始阶段没有认识到是药物所致
而采取及时停药措施，最终导致严重药品不良反应
即乳酸酸中毒伴横纹肌溶解症的发生。
鉴于抗病毒药物引起的肌病是一个循序渐进的
过程，并且极容易误诊，应当引起临床医生的重视。
而 CK 升高是替比夫定常见的不良反应，发生率约
85%，但最终发展为肌病的只占 5%，且 CK 升高在
45 岁以下的男性患者及 HBeAg 阴性的患者更容易
发生［9 － 10］。建议临床上在使用替比夫定治疗乙型
肝炎的过程中建议定期(每 2 个月)对患者进行肝
肾功能及心肌酶谱方面的检查，如果 CK 轻度升高
但无相关的临床症状，可不必停药、继续使用;如果
CK有持续升高的趋势，但尚无肌肉酸痛、肌无力等
临床症状，则应密切监测生化指标的情况下继续使
用;一旦发现 CK有持续升高的趋势，并且伴有肌肉
酸痛、肌无力等临床症状，则应立即停药或改用其他
对 CK影响较小的抗病毒药治疗，如恩替卡韦。医
师在对患者处方替比夫定时尽可能对患者进行药物
不良反应方面的知识宣传教育，让患者对所用药物可
能的副作用尽可能了解，从而提高其自我监测、自我
管理病情的意识;同时，应用替比夫定治疗前应注意
询问患者有无甲状腺功能减退或需要治疗的严重高
脂血症，对于伴有甲状腺机能减退或正在使用他汀类
降血脂治疗的患者，则不宜选择替比夫定治疗。
根据最新药品说明书，在警告周围神经病变栏
下有提醒医务人员或患者:“替比夫定合用干扰素
发生周围神经病变的风险及严重程度增加。并且合
用时治疗慢性乙型肝炎的有效性和安全性尚未得到
证明”。但在肌病栏下没有“替比夫定联合使用干
扰素可能导致发生肌病或乳酸性酸中毒的风险及严
重程度增加”方面的提示或警告。因此，建议厂家
收集整理国内外相关方面的文献资料并整理归纳，
补充或增加相关的提醒或警告。
［ 参 考 文 献 ］
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病［J］．药物不良反应杂志，2010，12(2) :130 － 141．
［3］ 蔡晧东． 替比夫定与干扰素联用引起的周围神经病的临床特
点及防治［J］．药物不良反应杂志，2009，11(5) :346 － 350．
［4］ 吴荣荣，陈红鸽，刘淼，等． 替比夫定引起神经肌肉病变的临
床观察［J］．中国新药杂志，2009，18(20) :2006 － 2008．
［5］ 曾俊涛，陈静，郭峰． 替比夫定致横纹肌溶解症一例［J］． 海
南医学，2010，21(23) :113，123．
［6］ 董建平，田国保，谢尧． 替比夫定相关性肌病乳酸中毒 1 例报
导［J］．海南医学，2010，13(3) :221 － 222．
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编辑:夏海波 /接受日期:
櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃
2012 － 06 － 15
(上接第 468 页)
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编辑:周卓 /接受日期:2012 － 12 － 16