全 文 ：第３２卷　第１期
２０１４年３月
　　　　
广西师范大学学报：自然科学版
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ
　　　　　　
Ｖｏｌ．３２　Ｎｏ．１
Ｍａｒ．２０１４
收稿日期：２０１３－１１－２０
基金项目：国家自然科学基金资助项目（２１２６２００６）；广西医药人才小高地资助项目（１１０７）；药用资源化学与药物分子
工程教育部重点实验室开放基金资助项目（桂科能０７１０９００１－１４）
通信联系人：覃江克（１９７７－），男（壮族），广西大化人，广西师范大学教授，博士。Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｋｅｑ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
ＨＰＬＣ法测定四方藤中岩白菜素和白藜芦醇的含量
罗　培，黄华奎，黄　俊，覃江克，何金芳，黎国庆
（广西师范大学 化学与药学学院，广西 桂林５４１００４）
摘　要：以高效液相色谱法同时测定四方藤中岩白菜素和白藜芦醇的质量分数，色谱柱为ＳｉｎｏＣｈｒｏｍ　ＯＤＳ－
ＢＰ　Ｃ１８（５μｍ，４．６ｍｍ×２００ｍｍ），流动相为乙腈－水，流速为１．０ｍＬ·ｍｉｎ
－１，在波长为３１８ｎｍ下进行梯度
洗脱。结果表明，岩白菜素和白藜芦醇对照品分别在０．３８０　９５～１．９４４　７６μｇ（Ｒ
２＝０．９９９）、０．０１９　８６７～
０．０９９　３３μｇ（Ｒ
２＝０．９９９　５）呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为９７．７１％、９７．５３％；ＲＳＤ分别为１．０８％
（ｎ＝６）、０．８８％（ｎ＝６）。该方法操作简单、重现性好、结果准确，能在３１８ｎｍ处对四方藤中岩白菜素和白藜芦
醇的质量分数同时进行定量分析。
关键词：四方藤；高效液相色谱；岩白菜素；白藜芦醇
中图分类号：Ｒ２８４．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１－６６００（２０１４）０４－００９１－０４
四方藤Ｃｉｓｓｕｓ　ｐｔｅｒｏｃｌａｄａ　Ｈａｙａｔａ为葡萄科白粉藤属植物，主要分布于我国广西、广东、海南等南方地
带，具有祛风湿、消炎、舒筋络、活血散瘀等药理活性［１］，在我国民间广泛用于风湿痹痛、腰肌劳损、炎症、胃
疼等疾病的治疗，疗效显著［２－３］。目前对四方藤活性成分的研究相对较少，本课题组在前期的研究中，已从
四方藤中分离得到岩白菜素和白藜芦醇［４］。研究表明：岩白菜素具有明显的止咳作用［５］，《中华人民共和
国药典》收为镇咳祛痰药，临床上用于慢性支气管炎等疾病的治疗［６］；白藜芦醇具有抗癌［７］、抗炎［８］、抑
菌［９］、保肝［１０］等多种药理作用。本研究拟用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）同时测定四方藤中岩白菜素和白藜芦
醇的质量分数，旨在为四方藤药材的质量控制提供实验方法和参考依据。
１　材料
高效液相色谱仪（大连伊利特分析仪器有限公司）；Ｌａｍｂｄａ６５０紫外可见光分光光度计（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ
公司）；ＢＴ２５Ｓ赛多利斯电子天平（精度为０．０１ｍｇ，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；ＺＫＷ 型电子恒
温水浴锅（郑州长城科工贸有限公司）；ＤＨＧ－９１４６型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；移液器
（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）。
四方藤购于广西桂林药材市场，由广西师范大学生命科学学院唐绍清教授鉴定为葡萄科Ｖｉｔａｃｅａｅ白
粉藤属Ｃｉｓｓｕｓ　Ｌｉｎｎ．植物四方藤Ｃｉｓｓｕｓ　ｐｔｅｒｏｃｌａｄａ　Ｈａｙａｔａ；岩白菜素和白藜芦醇对照品（购于阿拉丁公
司，货号：１１２７８４８）；乙腈（色谱纯，美国大地公司）。其余试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　对照品与供试品溶液的制备
精密称取１０．２１ｍｇ岩白菜素和１０．４３ｍｇ白藜芦醇，用甲醇溶解，分别转移至１００ｍＬ容量瓶中，定
DOI:10.16088/j.issn.1001-6600.2014.01.019
容至刻度。分别吸取２０ｍＬ岩白菜素和１ｍＬ白藜芦醇混合均匀，作为对照品溶液。
精密称取干燥的四方藤粉末约５．０００　０ｇ，置于索氏提取器中用甲醇进行提取，提取至浸提液为无色，
将提取液移至２５０ｍＬ量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用０．４５μｍ微孔滤膜过滤，备用。
２．２　检测波长的确定
分别取已配制的岩白菜素溶液和白藜芦醇溶液，在２００～６００ｎｍ波长内对２个标准品溶液进行扫描，
结果发现在３１８ｎｍ处两者均有较大吸收。因此，选择波长为λ＝３１８ｎｍ进行测定。
２．３　色谱条件
色谱柱：ＳｉｎｏＣｈｒｏｍ　ＯＤＳ－ＢＰ　Ｃ１８（５μｍ，４．６ｍｍ×２００ｍｍ）；流动相：乙腈（Ａ）和水（Ｂ）；梯度模式：
０～１０ｍｉｎ，Ａ，５％～１０％（体积分数）；１０～４０ｍｉｎ，Ａ，１０％～８０％（体积分数）；流量：１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检
测波长：３１８ｎｍ；柱温：２５℃。在此色谱条件下岩白菜素和白藜芦醇的相对保留时间分别为１６．８ｍｉｎ和
２６．３ｍｉｎ，分离度良好。色谱图见图１。
　　（ａ）混合对照品　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　（ｂ）四方藤提取液
图１　混合对照品和四方藤提取液的 ＨＰＬＣ图
Ｆｉｇ．１　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ａｎｄ　ＣｉｓｓｕｓｐｔｅｒｏｃｌａｄａＨａｙａｔａ　ｅｘｔｒａｃｔ
２．４　线性关系的考察
分别精密吸取混合对照品溶液４、８、１２、１６、２０μＬ，按照２．３项的色谱条件进样，测定峰面积。以进样
量（μｇ）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。岩白菜素的回归方程为：Ｙ＝２８６．４２　Ｘ＋４６．４８９，Ｒ
２＝
０．９９９　０；其线性范围为：０．３８０　９５～１．９４４　７６μｇ。白藜芦醇的回归方程为：Ｙ＝３４０．５３　Ｘ＋９．９１７，Ｒ
２＝
０．９９９　５；其线性范围为：０．０１９　８６７～０．０９９　３３μｇ。
２．５　精密度试验
取２．１项的对照品溶液，并按照２．３项色谱条件，进样１０μＬ，重复进样６次，分别测定岩白菜素和白
藜芦醇的峰面积，并计算其平均质量分数。测得岩白菜素和白藜芦醇的ＲＳＤ分别为１．１０％和１．４５％。
２．６　重现性试验
精密称取同一批次的样品６份，按照２．１项条件制备供试品溶液，并按照２．３项色谱条件进样，分别
测定并计算岩白菜素和白藜芦醇的质量分数，测得供试品中岩白菜素的平均质量分数为２．７１％，白藜芦
醇的质量分数为０．００７　０５１％，其ＲＳＤ分别为１．０９％、２．３６％，表明该方法重现性良好。
２．７　稳定性试验
取同一份供试品溶液，分别于０、４、８、１２、２４、４８ｈ，按照２．４项色谱条件进样，测定峰面积，并计算平均
质量分数。测得岩白菜素和白藜芦醇的ＲＳＤ分别为０．９８％、２．１３％，表明供试品在４８ｈ内稳定。
２９ 广西师范大学学报：自然科学版　　　　　　　　　　　　　　　　 第３２卷
第１期 罗　培等：ＨＰＬＣ法测定四方藤中岩白菜素和白藜芦醇的含量
２．８　加样回收率试验
表１　岩白菜素的加样回收率（ｎ＝６）
Ｔａｂ．１Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｂｅｒｇｅｎｉｎ（ｎ＝６）
样品中含量／ｍｇ 加入量／ｍｇ 测得量／ｍｇ 回收率／％ 平均回收率／％ ＲＳＤ／％
０．５３７　４　 ０．１０２　１　 ０．６３６　２　 ９６．７６
０．５３７　４　 ０．１０２　１　 ０．６３７　８　 ９８．３３
０．５３７　４　 ０．２０４　２　 ０．７３８　８　 ９８．６３　 ９７．７１　 １．０８
０．５３７　４　 ０．２０４　２　 ０．７３４　４　 ９６．４７
０．５３７　４　 ０．３０６　３　 ０．８４０　５　 ９８．９５
０．５３７　４　 ０．３０６　３　 ０．８３６　７　 ９７．１４
　　精密量取６份一定量四方藤提取液，分别加入一定量的混合对照品溶液，按照２．３项下色谱条件进样
分析，见表１，２。结果显示，岩白菜素的加样回收率为９７．７１％，ＲＳＤ为１．０８％；白藜芦醇的加样回收率为
９７．５３％，ＲＳＤ为０．８８％。
表２　白藜芦醇的加样回收率（ｎ＝６）
Ｔａｂ．２　Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ（ｎ＝６）
样品中含量／μｇ 加入量／μｇ 测得量／μｇ 回收率／％ 平均回收率／％ ＲＳＤ／％
１．４０６　４　 １．０４３　 ２．４３３　４　 ９８．４６
１．４０６　４　 １．０４３　 ２．４１６　７　 ９６．８６
１．４０６　４　 ２．０８６　 ３．４１４　２　 ９６．２５　 ９７．５３　 ０．８８
１．４０６　４　 ２．０８６　 ３．４４３　６　 ９７．６６
１．４０６　４　 ３．１２９　 ４．４８３　７　 ９８．３５
１．４０６　４　 ３．１２９　 ４．４６０　６　 ９７．６１
２．９　样品测定
取不同批次样品，按照２．１项条件制备供试品溶液，进行岩白菜素和白藜芦醇质量分数测定，结果见表
３。
表３　不同批次四方藤中岩白菜素和白藜芦醇的质量分数测定结果（ｎ＝３）
Ｔａｂ．３Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｅｒｇｅｎｉｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｃｉｓｓｕｓ　ｐｔｅｒｏｃｌａｄａ　Ｈａｙａｔａ（ｎ＝３）
化合物
样品批次
１　 ２　 ３
ｘ　－
岩白菜素／％ ２．７１　 ２．６７　 ２．７４　 ２．７１
白藜芦醇／％ ０．００７　０３２　 ０．００７　０６８　 ０．００７　０５２　 ０．００７　０５１
３　讨论
目前采用 ＨＰＬＣ对岩白菜素及白藜芦醇的质量分数检测，常在其特定波长进行（岩白菜素和白藜芦
醇的特定波长［１１－１２］分别为２７５ｎｍ和３０５ｎｍ），或者采用可变波长检测器进行检测，这些因素均限制对岩
白菜素和白藜芦醇质量分数的同时检测。本研究通过采用紫外－可见光光度计扫描岩白菜素和白藜芦醇
在２００～６００ｎｍ的紫外吸收，并对其结果进行分析，发现两者在λ＝３１８ｎｍ处均有较大的吸收，且在此波
长下其他杂质的干扰小。因此，选择波长为λ＝３１８ｎｍ进行测定。
对流动相的选择进行探究，结果显示以乙腈－水体系为梯度洗脱剂，岩白菜素和白藜芦醇获得理想的
分离效果，保留时间较短，适合四方藤中岩白菜素和白藜芦醇的同时测定。
本实验结果表明，采用 ＨＰＬＣ同时测定四方藤中岩白菜素和白藜芦醇的质量分数，样品处理简单、灵
敏度高、准确性好，可为四方藤的质量控制与进一步开发利用提供一定的实验依据。
３９
参　考　文　献：
［１］　中华人民共和国卫生部．中华人民共和国药典（一部）［Ｓ］．北京：人民卫生出版社，１９７７：１５８－１５９．
［２］　卫生部药典委员会．中国药典（一部）［Ｓ］．北京：人民卫生出版社，２０１０：１５８．
［３］　陈德昭．中国植物志［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９４：８０．
［４］　李雯霏．四方藤石油醚、乙酸乙酯部位化学成分及生物活性研究［Ｄ］．桂林：广西师范大学，２０１１．
［５］　夏从龙，刘光明，马晓匡．岩白菜素的研究进展［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７（３）：４３２－４３３．
［６］　中华人民共和国卫生部．中华人民共和国药典（一部）［Ｓ］．北京：人民卫生出版社，化学工业出版社，１９９０：１８２．
［７］　ＵＤＥＮＩＧＷＥ　Ｃ　Ｃ，ＲＡＭＰＲＡＳＡＴＨ　Ｖ　Ｒ，ＡＬＵＫＯ　Ｒ　Ｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｉｎ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　ａｎｔｉ－
ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００８，６６（８）：４４５－４５４．
［８］　ＣＡＰＩＲＡＬＬＡ　Ｈ，ＶＩＮＧＴＤＥＵＸ　Ｖ，ＺＨＡＯ　Ｈａｉ－ｔｉａｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｍｉｔｉｇａｔｅｓ　ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ　Ａβ－ｍｅｄｉａｔｅｄ
ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ＴＬＲ４／ＮＦ－κＢ／ＳＴＡＴ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｃａｓｃａｄｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，
１２０（３）：４６１－４７２．
［９］　ＢＲＯＷＮ　Ｊ　Ｃ，ＪＩＡＮＧ　Ｘｉｕ－ｐｉｎｇ．Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｍｕｓｃａｄｉｎｅ　ｇｒａｐｅ　ｓｋｉｎ　ａｎｄ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ
ｐｙｌｏｒｉ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１３，１１４（４）：９８２－９９１．
［１０］　ＢＩＳＨＡＹＥＥ　Ａ，ＤＡＲＶＥＳＨ　Ａ　Ｓ，ＰＯＬＩＴＩＳ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅ：ｆｒｏｍ　ｂｅｎｃｈ　ｔｏ　ｂｅｄｓｉｄｅ　ａｎｄ
ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．Ｌｉｖｅｒ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１０，３０（８）：１１０３－１１１４．
［１１］　王光发，廖正根，梁新丽，等．ＨＰＬＣ测定岩白菜及四臣止咳颗粒中岩白菜素的含量［Ｊ］．中成药，２００９，３１（１３）：１７９９－
１８０１．
［１２］　朱立贤，金征宇，陶冠军．ＨＰＬＣ测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量［Ｊ］．中成药，２００５，２７（８）：９４４－９４６．
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｅｒｇｅｎｉｎ　ａｎｄ　Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｉｎ　Ｃｉｓｓｕｓ　ｐｔｅｒｏｌａｄａ　Ｈａｙａｔａ　ｂｙ　ＨＰＬＣ
ＬＵＯ　Ｐｅｉ，ＨＵＡＮＧ　Ｈｕａ－ｋｕｉ，ＨＵＡＮＧ　Ｊｕｎ，ＱＩＮ　Ｊｉａｎｇ－ｋｅ，ＨＥ　Ｊｉｎ－ｆａｎｇ，ＬＩ　Ｇｕｏ－ｑｉｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｌｉｎ　Ｇｕａｎｇｘｉ　５４１００４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ａｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｂｅｒｇｅｎｉｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｉｎ
Ｃｉｓｓｕｓ　ｐｔｅｒｏｃｌａｄａ　Ｈａｙａｔａ　ｂｙ　ＨＰＬＣ，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｉｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｉｎ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ａ
ｃｏｌｕｍｎ　ＳｉｎｏＣｈｒｏｍ　ＯＤＳ－ＢＰ　Ｃ１８（５μｍ，４．６ｍｍ×２００ｍｍ）ａｎｄ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｓｙｓｔｅｍ　ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ－
ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｉｓ　１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ａｔ　３１８ｎｍ．Ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｏｆ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ
ｂｅｒｇｅｎｉｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ．Ｆｏｒ　ｂｅｒｇｅｎｉｎ（Ｒ２＝０．９９９　０）ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．３８０　９５～
１．９０４　７６μｇ，ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９７．７１％（ＲＳＤ＝１．０８％）．Ｆｏｒ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ（Ｒ
２＝０．９９９　５）ｉｎ　ｔｈｅ
ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０１９　８６７～０．０９９　３３μｇ，ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９７．５３％（ＲＳＤ＝０．８８％）．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ
ｓｉｍｐｌｅ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ，ｗｈｉｃｈ　ｃａｎ　ｂｅ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｂｅｒｇｅｎｉｎ
ａｎｄ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｉｎ　Ｃｉｓｓｕｓ　Ｐｔｅｒｏｌａｄａ　Ｈａｙａｔａ　ａｔ　３１８ｎｍ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｉｓｓｕｓ　ｐｔｅｒｏｌａｄａ　Ｈａｙａｔａ；ＨＰＬＣ；ｂｅｒｇｅｎｉｎ；ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ
（责任编辑　王龙杰）
４９ 广西师范大学学报：自然科学版　　　　　　　　　　　　　　　　 第３２卷