全 文 :第33卷 第1期
2015年3月
广西师范大学学报:自然科学版
Journal of Guangxi Normal University:Natural Science Edition
Vol.33 No.1
Mar.2015
doi:10.16088/j.issn.1001-6600.2015.01.016
收稿日期:2014-12-14
基金项目:国家自然科学基金资助项目(21262006);广西医药人才小高地基金资助项目(1107);药用资源化学与药物
分子工程教育部重点实验室开放基金资助项目(桂科能07109001-14)
通信联系人:覃江克(1977—),男,广西大化人,广西师范大学教授,博士。E-mail:jiangkeq@sina.com
HPLC测定四方藤中3种岩白菜素类化合物的含量
陈如意1,2,罗 培1,2,李怡杰1,2,郑 婷3,覃江克1,2
(1.广西师范大学 化学与药学学院,广西 桂林541004;2.广西师范大学 药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室,
广西 桂林541004;3.桂林市科学技术情报研究所,广西 桂林541002)
摘 要:建立了使用高效液相色谱测定四方藤中岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、11-O-对羟基苯甲酰岩白
菜素含量的方法。色谱柱为SinoChrom ODS-BP C18(5μm,4.6mm×200mm),流动相为乙腈和0.1%的
甲酸水溶液,流速为0.8mL/min,检测波长为275nm。结果表明岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素和11-O-
对羟基苯甲酰岩白菜素都在0.066 7~0.343 7μg内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为96.11%
(RSD=1.92%),97.02%(RSD=0.9%),94.43% (RSD=1.77%)。本方法操作简便,精密度高,重现性好,
可作为四方藤中这3种岩白菜素类化合物含量的检测方法。
关键词:四方藤;岩白菜素;11-O-没食子酰岩白菜素;11-O-对羟基苯甲酰岩白菜素;高效液相色谱
中图分类号:R284.1 文献标志码:A 文章编号:1001-6600(2015)01-0099-05
四方藤Cissus pteroclada Hayata为葡萄科白粉藤属植物,主要分布于我国广西、广东、海南等南方
省份[1]。四方藤的藤茎可入药,其味微苦,性平,具有舒筋活络、去瘀生新、祛风湿、消炎等药理活性[2-3],在
广西民间广泛用于治疗风湿病痛、腰肌劳损、外伤、止血等疾病,有良好的疗效,是极具开发利用价值的特
色民族药之一[4]。
岩白菜素及其衍生物属于异香豆素类化合物,具有抗炎[5]、镇痛[6]、抑菌[7]、抗氧化[8]等多种药理活
性。目前,岩白菜素已制成胶囊、片剂,在临床上用于支气管炎等疾病的治疗,具有良好疗效[8]。
鬼灯檠属、岩白菜属、落新妇属植物中岩白菜素类化合物含量较高,是目前天然岩白菜素的主要来源。
然而,经过多年的开发利用,上述植物面临着资源短缺的现状,寻找新的富含岩白菜素类化合物的药用植
物是项富有意义的研究工作。前期研究工作已从四方藤中分离获得岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、
11-O-对羟基苯甲酰岩白菜素[9-10],然而目前却尚未有测定四方藤中几种岩白菜素含量的报道。本文采用
高效液相色谱法对四方藤中这3种岩白菜素类化合物的质量分数进行测定,旨在为岩白菜素药源植物资
源研究提供参考,并对四方藤药材的进一步开发利用提供一定的测试手段和理论依据。
1 实验材料和仪器
1.1 实验仪器
P230II高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司);R-1001型旋转蒸发仪 (郑州长城科工贸有
限公司);TU1801紫外可见分光光度计(北京普析通用);BS124S型电子天平 (赛多利斯科学仪器北京有
限公司);DZF-1B型真空干燥箱(上海跃进医疗器械厂);ZKW 型电子恒温水浴锅 (郑州长城科工贸有限
公司);DHG-9146型真快干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);微量移液器 (Eppendorf)。
广西师范大学学报:自然科学版 第33卷
1.2 药品和试剂
四方藤茎(购于桂林市中药材市场);岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、11-O-对羟基苯甲酰岩白菜素(自
制,经HPLC检测质量分数大于99%);无水甲醇(AR)、乙酸乙酯(AR)、甲酸(AR)、乙腈(GR);去离子水。
2 实验方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
分别精密称取10.00mg的岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、11-O-对羟基苯甲酰岩白菜素于3个
不同的烧杯中用无水甲醇溶解,并分别转移至100mL容量瓶中,定容,摇匀,即分别得到3种0.100 0g/L
的标准品溶液,等体积混合作为对照品溶液,备用。
2.2 供试品溶液的制备
精密称取干燥的四方藤粉末10g,置于圆底烧瓶中用无水甲醇浸提数次(T=60℃,t=5h,n=3),
合并提取液,过滤,浓缩成浸膏状;再将所得浸膏置于圆底烧瓶中用乙酸乙酯浸提数次(T=80℃,t=5h,
n=3),合并提取液,过滤,浓缩,烘干。用无水甲醇溶解所得固体,制备成母液,再用无水甲醇稀释成不同
浓度,作为供试品溶液,备用。
2.3 检测波长的确定
用无水甲醇做空白,采用紫外可见分光光度计在波长200~600nm分别对3种标准品溶液进行扫描,
对扫描结果进行分析,发现在275nm处三者均有较强吸收。因此,在采用液相色谱分析时,选择275nm
波长处进行测定。
2.4 色谱条件
选用色谱柱SinoChrom ODS-BP C18(5μm,4.6mm ×200mm),流动相为乙腈和0.1%甲酸水溶
液,洗脱条件为乙腈10%~40%(体积比)梯度洗脱30min,检测波长为275nm,流速为0.8mL/min,进
样量为10μL,柱温为室温。色谱图见图1。
1.岩白菜素;2.11-O-没食子酰岩白菜素;3.11-O-对羟基苯甲酰岩白菜素
图1 样品的 HPLC色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of standard sample and test sample
从图1中可以看出,在设定的洗脱条件下,3种岩白菜素类化合物在30min内均获得基线分离,且峰
形尖锐对称。
2.5 标准品的线性关系考察
精密量取3种岩白菜素的对照品溶液2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5mL于5mL的容量瓶中,用无水甲
醇定容至刻度线,得到不同浓度的对照品溶液,按照2.4节色谱条件进样,以峰面积Y 为纵坐标,对照品
的质量X作为横坐标,进行线性回归,各组分的回归方程以及相关性系数结果见表1。
2.6 精密度试验
取2.5节中对照品溶液,按照2.4节色谱条件进样,重复进样6次,测定岩白菜素、11-O-没食子酰岩
001
第1期 陈如意等:HPLC测定四方藤中3种岩白菜素类化合物的含量
白菜素、11-O-对羟基苯甲酰岩白菜的峰面积的RSD值分别为1.46%、1.96%、1.98%,表明仪器进样精密
度良好。
表1 标准品的线性考察结果
Tab.1 Linear results of the three standard samples
组分 回归方程 相关系数R2 线性范围/μg
岩白菜素 Y=1 233.9 X-29.828 0.999 3 0.066 7~0.343 7
11-O-没食子酰岩白菜素 Y=1 169.1 X-0.972 5 0.996 5 0.066 7~0.343 7
11-O-对羟基苯甲酰岩白菜素 Y=1 678.3 X-20.076 0.999 7 0.066 7~0.343 7
2.7 稳定性试验
取同一份供试品溶液,分别于2、4、8、12、24、48h,按照2.4节色谱条件进样,测定岩白菜素、11-O-没
食子酰岩白菜素、11-O-对羟基苯甲酰岩白菜素峰面积的RSD值分别为1.19%、1.52%、1.70%,表明样品
溶液在48h内稳定性良好。
2.8 重现性试验
取同一批四方藤药材,按上述含量测定方法,分别制备6份供试品溶液,按照2.4节色谱条件进样,测
定岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、11-O-对羟基苯甲酰岩白菜峰面积的 RSD值分别为2.83%、
2.90%、3.29%,表明本方法重现性良好。
2.9 加样回收率试验
精密称取一定量的含量已知的四方藤粉末6份,分别加入一定量的混合对照品,依照上诉方法制备供
试品溶液,按照2.4节色谱条件进样,计算3种组分的加样回收率,结果见表2。
表2 3种组分的加样回收率试验结果
Tab.2 Recovery test of bergenin,11-O-galoyl bergenin and 11-O-(4-hydroxyl benzoyl)bergenin
样品名称 样品含量/μg 加入量/μg 测得量/μg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
岩白菜素
0.178 0 0.128 9 0.300 6 95.11
0.178 0 0.128 9 0.306 4 99.61
0.178 0 0.128 9 0.299 6 94.34
0.197 8 0.114 6 0.307 0 95.29
0.197 8 0.114 6 0.308 1 96.25
0.197 8 0.114 6 0.307 9 96.07
96.11 1.92
11-O-
没食子酰岩
白菜素
0.105 0 0.129 4 0.230 8 97.22
0.105 0 0.129 4 0.228 8 95.67
0.105 0 0.129 4 0.230 5 96.99
0.116 7 0.115 0 0.229 5 98.07
0.116 7 0.115 0 0.229 1 97.74
0.116 7 0.115 0 0.227 6 96.43
97.02 0.90
11-O-
对羟基苯甲酰
岩白菜素
0.107 0 0.100 0 0.203 9 96.90
0.107 0 0.100 0 0.200 7 93.80
0.107 0 0.100 0 0.201 7 94.70
0.109 8 0.080 0 0.186 0 95.30
0.109 8 0.080 0 0.185 0 94.00
0.109 8 0.080 0 0.183 3 91.90
94.43 1.77
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广西师范大学学报:自然科学版 第33卷
回收率试验结果表明,本实验的提取和处理方法对四方藤中岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、11-
O-对羟基苯甲酰岩白菜素均有较高的回收率。
2.10 样品中各组分质量分数的测定
取不同批次的四方藤药材,依照2.2节方法制备供试品溶液,分别测定3种组分的质量分数,并取平
均值,结果见表3。
表3 3种组分质量分数测定结果
Tab.3 Determination results of bergenin,11-O-galoyl bergenin and 11-O-(4-hydroxyl benzoyl)bergenin %
组分 1 2 3 珚x
岩白菜素 3.63 3.84 3.72 3.73
11-O-没食子酰岩白菜素 0.78 0.79 0.71 0.76
11-O-对羟基苯甲酰岩白菜素 0.027 0.025 0.032 0.028
由表3可知,四方藤中岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、11-O-对羟基苯甲酰岩白菜的质量分数分
别为3.73%、0.76%、0.028%。
3 结论
通过实验发现,本文建立的高效液相色谱法可用于四方藤中3种岩白菜素类化合物含量的同时测定,
提高了工作效率。在给定的色谱条件下,色谱峰之间能够有效地分离,实验的精密度、重现性、回收率均较
高,而且在30min内实现色谱分离,具有操作简便、快速等优点。
四方藤富含岩白菜素类化合物,尽管在不同产地、批次的四方藤中有差异,但岩白菜素、11-O-没食子
酰岩白菜素的含量均较高,显示了较好的开发利用价值。四方藤在我国南方资源丰富、价格便宜,富含岩
白菜素类化合物,从四方藤中提取分离岩白菜素对于解决目前生产原料药岩白菜素的资源短缺问题具有
较好的现实意义。通过四方藤中岩白菜素及其衍生物含量的测定,可为四方藤药材及其制剂的质量控制
和进一步开发利用提供理论指导和实验依据。
参 考 文 献:
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第1期 陈如意等:HPLC测定四方藤中3种岩白菜素类化合物的含量
Determination of Three Kinds of Bergenin Derivatives in
Cissus pterolada Hayata by HPLC
CHEN Ru-yi 1,2,LUO Pei 1,2,LI Yi-jie1,2,ZHENG Ting3,QIN Jiang-ke1,2
(1.Colege of Chemistry and Pharmaceutical Sciences,Guangxi Normal University,Guilin Guangxi 541004,China;
2.Key Laboratory for the Chemistry and Molecular Engineering of Medicinal Resources of State Education Ministry,
Guangxi Normal University,Guilin Guangxi 541004,China;3.Guilin Institute of Inteligence Science and Technology,
Guilin Guangxi 541002,China)
Abstract:To develop aquantitative method for determining bergenin,11-O-galoyl bergenin and 11-O-
(4-hydroxyl benzoyl)bergenin in Cissus pteroclada Hayata by HPLC,the determination is performed in
gradient separations with a column SinoChrom ODS-BP C18(5μm,4.6mm ×200mm)and solvent
consisting of MeCN-0.1%formic acid.The flow rate is 0.8mL/min and the wavelength at 275nm.The
results showed that the bergenin,11-O-galoyl bergenin and 11-O-(4-hydroxyl benzoyl)bergenin were
linear in the range of 0.066 7~0.343 7μg.And their average recovery were 96.11% (RSD=1.92%),
97.02% (RSD=0.9%),94.43% (RSD=1.77%),respectively.The method is simple,accurate and
could be used to determine the content of this three kinds of bergenin derivatives in Cissus pterolada
Hayata.
Keywords:Cissus pterolada Hayata;bergenin;11-O-galoyl bergenin;11-O-(4-hydroxyl benzoyl)
bergenin;HPLC
(责任编辑 王龙杰)
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