全 文 ： 药理药化
收稿日期:2008-10-16;　修订日期:2008-12-31
基金项目:国家自然科学基金(No.30660221);
青海自然科学基金项目(No.2006-N-554)
作者简介:宋　萍(1965-),女(汉族),山东长岛人 ,现任青海民族学院化
学系教授 ,学士学位 ,主要从事药物及食品的分析研究工作.
青海地区几种锦鸡儿属植物中总黄酮含量的测定
宋　萍 , 赵明德 , 殷海青
(青海民族学院 , 青海 西宁　810007)
摘要:目的 测定青海地区几种锦鸡儿属植物中总黄酮的含量。方法 采用分光光度法 ,以芦丁为对照品 , 并利用 NaNO2
-Al(NO3)3 -NaOH显色方法 ,对青海地区几种锦鸡儿属植物中的总黄酮含量进行测定。结果 在最大吸收波长 510 nm
处芦丁测定的线性方程是 A=12.737C-0.003 5,相关系数 r=0.999 6 (n=7), 测得方法的平均回收率为 99.2 %(n=
6), RSD=1.05% 。结论 该方法的测定结果准确可靠 、快速 、重复性好。
关键词:锦鸡儿属;　总黄酮;　分光光度法
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)06-1297-02
DeterminationoftheTotalFlavonoidContentintheplantofCaraganaFabr.fromDif-
ferentAreasinQinghaiProvince
SONGPing, ZHAOMing-de, YINHai-qing
(DepartmentofChemistry, QinghaiInstituteofNationalities, Xining810007, China)
Abstract:ObjectiveTodeterminethetotalflavonoidcontentofCaraganaFabr.plantfromdiferentareasinQinghaiprovince.
MethodsWithrutinasstandardsamples, spectrophotometrymethodandthecolourmethodofsodiumnitrite—aluminiumni-
trate—sodiumhydroxidewereusedtodeterminethetotalflavonoidcontentintheplantofCaraganaFabr.fromdifferentareasin
Qinghaiprovince.ResultsThecalibrationcurveofrutinat510nmwasA=12.737C-0.003 5, r=0.999 6 (n=7), andthe
averagerecoverywas99.2 % (n=6)withRSDof1.05% .ConclusionThismethodisreliable, accurate, quickandreproduci-
ble.
Keywords:CaraganaFabr.;　Totalflavonoids;　Spectrophotometry
　　豆科(Leguminosae)锦鸡儿属 CaraganaFabr.植物 , 为落叶
灌木 , 全世界约有一百多种 , 主要分布于亚洲和欧洲的干旱和半
干旱地区 , 是温带亚洲的代表属之一。 我国锦鸡儿属植物有 62
种 , 9变种 12变型 , 主要产于西北 、华北 、东北 、西南等干旱地区
和荒漠地带;青海产 20种 , 3变种和 1变型 [ 1 , 2] 。该属植物药用
部位为其根 、根皮和花 ,根和花的药用作用主要是祛风止痛 、活血
散瘀 、补气益肾 、滋阴健脾等 , 治疗头晕腰酸 、妇女气虚白带 、耳鸣
眼花 、肺虚久咳 、小儿疳积 、风湿性关节炎等疾病。近年来临床研
究报道 , 该属植物对抗炎 、治疗高血压病也有明显效果 ,而且还具
有较强的抗癌及抗病毒的活性 [ 3 ～ 8] 。由于该属植物资源丰富 、分
布广泛 , 而且具有较强的药理活性 ,但目前研究的品种还是较少 ,
因此 , 为全面利用该属植物资源并且充分开发其药用价值 , 给合
理选取该属植物用药品种提供可靠的参考依据 ,本文建立了锦鸡
儿属植物中总黄酮含量的分析方法 ,并首次对青海省几种锦鸡儿
属植物中的总黄酮含量进行了测定。
1　器材
1.1　仪器与试剂 722型可见分光光度计(上海精密科学仪器有
限公司);恒温水浴锅(金坛恒丰仪器有限公司);分析天平(上
海良平精密仪器仪表有限公司);常用玻璃仪器等。对照品芦丁
(中国药品生物品检定所), 实验中试剂均为分析纯。
1.2　样品采集 2007 -08在青海省境内采集锦鸡儿属植物 , 由
青海省藏药研究所多杰研究员鉴定。将采集药材的根茎部分去
除杂质 、切断 ,阴干 , 粉碎后过 80目筛作为试验药材。
2　方法
2.1　芦丁对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品 0.025 0 g,
75%乙醇溶解并定容至 100 ml容量瓶中稀释至刻度 ,即得芦丁
对照品储备液 ,使用时稀释成所需浓度即可。
2.2　锦鸡儿属植物中总黄酮提取方法的确定 准确称取粉碎过
筛后的锦鸡儿属植物样品 10 g于烧瓶中 , 加入 100 ml石油醚回
流 40min进行脱脂 , 弃去滤液 , 再加入 100 ml75%的乙醇 , 回流
提取 30 min共 3次 , 弃去滤渣 , 合并滤液后进行减压浓缩 , 用
75%乙醇定容至 250 ml量瓶中 , 即得药材中总黄酮的提取
物 [ 9 ～ 11] 。
3　结果
3.1　最大吸收波长的确定 取芦丁对照品溶液 4 ml采用 NaNO2-Al(NO3)3 -NaOH显色方法 ,在 470 ～ 560 nm波长范围内测定
溶液的吸光度 , 结果得出该溶液在 510nm处有最大吸光度值 , 由
此可以选择 510 nm作为实验的检测波长。
3.2　实验测定条件的选择
3.2.1　氢氧化钠溶液用量的选择 精密吸取芦丁对照品溶液 2
ml各 4份 , 分别置于 25 ml容量瓶中 , 各加 5%亚硝酸钠溶液
1.0ml, 再加 10%硝酸铝 1.0ml, 然后分别加入 10%氢氧化钠 5,
10, 15, 20 ml,再用 75%乙醇溶液稀释至刻度 , 摇匀 , 分别在 510
nm处测定其吸光度(见表 1)。由此选择氢氧化钠溶液的用量为
10% NaOH10 ml。
表 1　不同氢氧化钠用量时芦丁标准溶液的吸光度
氢氧化钠用量 V/ml 吸光度
5 0.215
10 0.259
15 0.184
20 0.158
3.2.2　硝酸铝溶液用量的选择 在装有芦丁对照品溶液的 4个
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6 时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期
25 ml容量瓶中 , 各加 5%亚硝酸钠溶液 1.0 ml, 再分别加入
10%硝酸铝溶液 0.5, 1.0, 1.5, 2.0ml, 然后分别加入 10%氢氧化
钠 10 ml,定容 , 分别在 510nm处测定其吸光度 , 结果见表 2。由
此选择硝酸铝溶液加入量为 1.5 ml最佳。
3.2.3　反应温度的选择 精密吸取芦丁对照品溶液 2 ml, 加 1.0
ml5%亚硝酸钠溶液 , 1.5ml10%硝酸铝溶液 , 10%氢氧化钠 10
ml, 分别在室温 、20, 30, 40℃时测定溶液吸光度值。实验结果见
表 3。由此可知 , 温度对实验测定没有太大的影响 , 所以可选择
室温下对样品进行测定。
表 2　不同硝酸铝用量时芦丁标准溶液的吸光度
硝酸铝用量 V/ml 吸光度
0.55 0.216
1.0 0.259
1.5 0.375
2.0 0.238
表 3　不同温度下芦丁标准溶液的吸光度
温度 T/℃ 吸光度
17 0.259
20 0.258
30 0.258
40 0.257
3.3　标准曲线的绘制 精密吸取芦丁对照品溶液 0.0, 1.0, 2.0,
3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0 ml分别置于 50ml容量瓶中 ,各加 1.0
ml5%亚硝酸钠溶液 , 摇匀放置 5 min, 加 1.5 ml10%硝酸铝溶
液 , 摇匀放置 5 min, 再加 10%的氢氧化钠溶液 10 ml, 然后用
75%乙醇溶液稀释至刻度 , 摇匀放置 10min后 , 以试剂空白为参
比 , 分别在 510nm处测定其吸光度。以芦丁浓度 C(g/ml)为横
坐标 , 吸光度 A为纵坐标 , 其线性方程为:A=12.737C-0.003 5,
相关系数 r=0.999 6 (n=7)。
3.4　精密度实验 取浓度为 0.025 0mg/ml的芦丁对照品溶液 ,
在 “ 3.2”项选定的实验条件下连续 6次测定其吸光度 A值 , 计算
得吸光度值的相对标准偏差 RSD=0.99% (n=6), 表明仪器精
密度良好。
3.5　重复性实验 精密称取鬼箭锦鸡儿样品 10 g, 共 6份 , 按
“ 2.2”项下方法操作制备供试品溶液 , 然后在 “ 3.2”项选定的实
验条件下测定其吸光度 A值 , 计算得吸光度值的相对标准偏差
RSD=1.03%(n=6), 实验结果表明本方法的重复性满足要求。
3.6　稳定性实验 精密称取鬼箭锦鸡儿样品 10 g, 按 “ 2.2”、
“ 3.2”项下方法操作 , 然后分别在 2, 4, 6, 8, 10 h时测定其吸光度
A值 , 结果表明样品溶液在 10h内稳定。
3.7　回收率实验 精密称取 6份已知含量的鬼箭锦鸡儿样品 10
g, 依次加入一定量芦丁对照品溶液 , 按 “ 2.2” 、“ 3.2”项下方法
操作 , 测得其平均回收率为 99.2 %(n=6), RSD=1.05%。
3.8　药材中总黄酮含量的测定 称取各种锦鸡儿属样品按
“ 2.2”项下方法制备供试品溶液 ,取试样离心 , 除去悬浮杂质 ,准
确吸取上层清液 1 ml4份 , 分别置于 50 ml容量瓶中 , 其中 1份
用 75%的乙醇定容至刻度 , 作为参比溶液。其余 3份按 “ 3.2”项
下实验条件分别在波长 510 nm处测定其吸光度 A值。结果见表
4。经计算后可得出青海地区几种锦鸡儿植物中总黄酮的含量。
4　讨论
实验表明 , 经过优化选择在波长 510 nm处锦鸡儿属植物中
总黄酮的测定条件是在 5%的亚硝酸钠溶液 1.0 ml, 10%的硝酸
铝溶液 1.5 ml, 10%的氢氧化钠溶液 10ml下为最佳。另外由于
本实验利用分光光度法测定的是锦鸡儿属植物中所有黄酮苷和
苷元的总含量 ,加之采用的是碱性介质中加铝盐显色的方法 , 从
而也使得样品中总黄酮的测定含量比较高和准确可靠。
表 4　青海几种锦鸡属植物中总黄酮含量的测定结果
品种 吸光度平均值(A) 总黄酮平均含量(%)
川西锦鸡儿 0.325 3.22
甘青锦鸡儿 0.103 1.05
短叶锦鸡儿 0.128 1.29
鬼箭锦鸡儿 0.778 7.67
甘蒙锦鸡儿 0.124 1.25
青海锦鸡儿 0.358 3.56
荒漠锦鸡儿 0.120 1.21
印度锦鸡儿 0.502 4.98
康青锦鸡儿 0.182 1.82
小叶锦鸡儿 0.345 3.43
柠条锦鸡儿 0.101 1.03
沙地锦鸡儿 0.113 1.14
通过分析检测发现青海省锦鸡儿属样品中总黄酮含量各不
相同 , 其原因可能是由于品种不同 、采集时间 、地点的不同而引起
的;另外不同海拔地区以及不同气候特点等原因也可能对实验结
果产生一定的影响。
锦鸡儿属植物在我国的许多地区都有广泛分布 , 资源丰富 ,
适应能力强 , 由于其有根瘤 , 能提高土壤肥力 , 绿化荒山 , 保持水
土 , 防风固沙。因此 ,根据本文的分析测定结果 ,不仅可为选择好
的锦鸡儿属品种进行种植 、保护生态环境提供一定的参考依据 ,
而且还可为有针对性的充分发挥该属植物的药用价值起到积极
的促进作用。
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6