全 文 ：收稿日期:2000-07-13
文章编号:1006-2858(2001)03-0198-03
HPLC法对皂荚属植物中刺囊酸的含量测定
李　楠1 , 包文芳1 , 宋　刚2
(1.沈阳药科大学中药系 , 辽宁 沈阳　110016;　2.辽宁成大医药连锁有限公司 ,辽宁 沈阳　110014)
摘要:采用 HPLC 法 , 对皂荚属 3 种植物果实中刺囊酸的含量进行了测定。用 TSK-ODS 柱 ,流动
相为甲醇-水(V∶V , 80∶20),在215 nm下检测。平均回收率为 95.1%, RSD 为 1.30%, 所建立的
方法确实可靠 ,具有良好的线性关系。本法可用于皂荚属植物的含量测定。刺囊酸在皂荚属植物
中分布广泛 ,且含量较高 , 种间差异明显。
关键词:高效液相色谱;刺囊酸;皂荚属;含量测定
中图分类号:R 972.2　　　文献标识码:A
　　皂荚属(Gleditsia L.)为豆科(Leguminosae )
植物 ,始载于神农本草经(下品),其果实 ,棘刺均
可入药。具有祛痰开窍 、散结消肿之功效。现代
药理学的研究表明 ,其果实总皂苷具有祛痰 、抗菌
活性[ 1] , 而从同属植物日本皂荚(G.japonica
var.koraiensis)果实中分离得到的三萜皂苷 ,确证
具有抗 HIV 活性[ 2] 。已有用分光光度法进行含
量测定 ,但操作繁琐 ,误差较大[ 3] 。作者用 HPLC
法对皂荚属植物果实中所含的刺囊酸进行测定 ,
以期为皂荚属植物品质评价提供依据。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪:输液泵 Binary LC Pump
250(PERKIN ELMER),检测器 UV/V IS Detec-
tor LC 295(PERKIN ELMER), 色谱工作站
MODEL-1022 (PERKIN ELMER),微量进样器
HAMILTON 。
　　对照品:刺囊酸(echinocystic acid)自制 ,通过
光谱鉴定 ,并经高效液相分析 ,纯度>95%,结构
见图 1。生药样品为作者购买 ,并经过本校许春
泉老师鉴定。
试剂:氯仿(分析纯)沈阳正信高科技研究所
试剂部;甲醇(分析纯)山东禹王实业总公司化工
厂;甲醇(色谱纯)山东禹王实业总公司化工厂;重
蒸馏水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:TOSOH TSKgel ODS —80TM 4.6 mm×
25 cm;流动相:甲醇-水 =80∶20(V∶V);流速:
1 mL/min;检测波长:215 nm;柱温:40 ℃进样量:
20μL。
Fig.1　Echinocystic acid
2.2　标准曲线的绘制
精密称取刺囊酸对照品 23.4 mg ,置于25 mL
容量瓶中。加甲醇溶解并稀释到刻度 ,配成储备
液。精密称取储备液各 0.4 、2 、4 、6 、8 、10 mL分别
置于10 mL容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,混匀 。分别
进样 20 μL , 按上述色谱条件测定。在 t R =
14.47 min左右有一唯一吸收峰 ,以浓度为横坐
标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,计算回归方
程如下:A =-7.582×105 +4.436×107C , r =
0.999 7 ,线性范围 0.18 ～ 0.90 mg/mL 。
2.3 精密度实验
精密吸取储备液 20 μL 进样 ,连续 6次。测
定刺囊酸的峰面积 ,其 RSD为 2.5%。
2.4　生药样品测定
分别将生药样品于 40 ℃干燥 24 h 后 ,粉碎
过 60目筛 ,各精密称取2 g ,置沙氏提取器中 ,加
60 mL氯仿提取8 h后 , 残渣挥干溶剂 , 继续加
第 1 8 卷　第 3 期
2 0 0 1 年 5 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.18 　　No.3
May 2001　p.198
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2001.03.012
60 mL甲醇提取10 h ,甲醇提取物浓缩至小体积 ,
置5 mL 容量瓶中 , 用甲醇稀释至刻度。经
0.45 μm微孔滤膜过滤后 ,吸取20 μL进样 ,计算
每组峰面积 ,通过回归方程计算刺囊酸含量 ,结果
见表 1 ,样品色谱图见图 2。
Tab.1　The contents of echinocystic acid in Gleditsia L.
No 　　Sample 　　Origin Content(mg/ g , n =3)
1 Gleditsia sinensis Lam. Shangxi Taiyuan 1.8312
2 G.sinensis Lam. Shangxi Taiyuan 1.2146
3 G.sinensis Lam. Liaoning Shenyang 0.4580
4 G.fera(Lour.)Merr. Henan Deng zhou 0.2239
5 G.japonica Miq. Liaoning Shenyang undetected
Fig.2　The chromatogram of vegetation from Gleditsia L.
1—Echinocystic acid;A —Chromatogram of standard sample;B—Chromatog ram of sample 1;C—Chromatogram o f sample 2;
D—Chromato gram of sample 3;E—Chromatog ram of sample 4;F —Chromatogram of sample 5
2.5　加样回收率的测定
精密称取已知刺囊酸含量的猪牙皂样品(2
号)6份 ,每份1 g ,均精密加入适量对照品储备
液 ,置沙氏提取器中 ,加60 mL氯仿提取8 h后 ,残
渣挥干溶剂 ,继续加60 mL甲醇提取10 h ,甲醇提
取物浓缩至小体积 ,置5 mL量瓶中 ,甲醇稀释至
刻度 。0.45 m微孔滤膜过滤后 ,吸取20μL进样 ,
计算各个对照品的回收率 。结果见表 2。
Tab.2　Recoveries of added standard echinocystic acid
No Content(mg) Added(mg) Total(mg) Recovery(%) Average(%) RSD(%)
1 1.222 1.210 2.369 94.8
2 1.226 1.210 2.379 95.3
3 1.212 1.210 2.386 97.0 95.1 1.30
4 1.209 1.210 2.347 94.0
5 1.217 1.210 2.376 95.8
6 1.219 1.210 2.35 93.6
2.6　稳定性实验
将 1号样品溶液在室温下放置 ,在 1 、2 、4 、8 、
12 、24 h进行测定 , RSD为 2.1%,说明样品溶液
至少24 h内稳定。
3　讨论
　　a.三萜皂苷为皂荚属植物荚果中所含有的主
要成分 ,但极性较大 ,不易获得 。其苷元刺囊酸极
性居中 ,较易分离 ,且在该属植物中分布广泛 ,有
一定的代表性 ,故选用刺囊酸为对照品 。
b.1号样品与 2号样品产于同一地区 ,均为
Gleditsia sinensis Lam .这一品种发育时期不同的
药材 ,测得的刺囊酸含量不同。2 号样品与 3号
样品是产于不同地区 , 均为 Gleditsia sinensis
Lam.这一品种的不育果实 ,测得的刺囊酸含量不
同。说明产地 ,发育程度使皂荚中刺囊酸的含量
产生差异 。
c.在选取样品制备方法时 , 考察了甲醇和
199第 3 期 李　楠等:HPLC 法对皂荚属植物中刺囊酸的含量测定　　　
75%乙醇为溶剂提取 ,结果甲醇提取效率高。为
降低一些脂溶性成分造成的干扰 ,实验中采用了
先用氯仿提取 ,再用甲醇提取的方法 ,以甲醇为溶
剂 ,进行了热浸回流 ,索氏提取器提取以及超声提
取3种方法的比较实验研究 ,结果以索氏法提取
完全 ,方法简便易行 。
参考文献:
[ 1] 冉先德.中华药海 [ M] .哈尔滨:哈尔滨出版社 ,
1993.1321.
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japonica and Gymnocladus chinensis , and a structure-
activity cor relation [ J] .Journal of Natural P roducts ,
1995 , 58(9):1372-1377.
[ 3] 陈道峰 , 张敏 ,邵宇 , 等.皂荚总皂甙的纯化与含量测
定 [ J] .中草药 , 1995 , 26(3):401-402.
The quantitative determination of echinocystic acid
in Gleditsia L.by HPLC
LI Nan1 , BAO Wen-fang1 , SONG Gang2
(1.Department of Tradi tional Chinese Medicines , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang
110016 , China;　2.Liaoning Chengda Drug(Chain)Co.Ltd ., Shenyang 110014 , China)
Abstract:The echinocy stic acid in three kinds of vegetation from Gledi tsia L.was determined quantita-
tively by HPLC.The results were stable and reproducible.It w as carried out in the TOSOH TSKgel ODS-
80TM column w ith the mobile phase of a mixture of M eOH∶H2O(80∶20).The average recovery was
95.1%, and the RSD was 1.03%.
Key words:HPLC;echinocy stic acid;Gledi tsia L.;quantitat ive determination
学校介绍
基　础　学　院
基础学院下设数理部 ,外语部 ,体育部和社科部 4个部。现有教职工 79人 ,其中教授 2人 ,副教授
28人 ,研究生导师 1人 。主要承担全校所有本科生的基础课教育 ,包括高等数学 ,数理统计 ,物理 ,英
语 ,日语 ,俄语 ,计算机 ,体育和政治理论课等公共课教学工作 。还承担部分研究生课程和成人本 ,专科
课程 。共开出研究生课和本科生必修课 ,选修课 100余门。
200 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 18卷