全 文 :2015 年 4 月 陕西理工学院学报(自然科学版) Apr. 2015
第 31 卷第 2 期 Journal of Shaanxi University of Technology (Natural Science Edition)
Vol. 31 No. 2
[文章编号]1673 - 2944(2015)02 - 0062 - 04
不同产地盘龙七中岩白菜素含量的分析研究
王 星1, 张 娜2, 赵 桦1
(1. 陕西理工学院 生物科学与工程学院,陕西 汉中 723000;2.汉中职业技术学院,陕西 汉中 723000)
[摘 要] 利用高效液相法测定 14 个不同产地盘龙七中岩白菜素的含量。色谱条件:色谱
柱为 Inertsil ODS-3C18(4. 6 mm ×150 mm,5μm)柱,乙腈-0. 2%磷酸溶液(9 ∶ 91)为流动相,流
速 1. 0 mL /min,检测波长 275 nm,柱温 30 ℃。岩白菜素在 15 ~ 75 μg /mL范围内呈良好的线
性关系,Y = 14 942. 0X - 428. 6 (R2 = 0. 999 8 ),平均加样回收率 100. 58%,RSD为 1. 77%
(n = 6)。分析结果表明,不同产地盘龙七中岩白菜素的含量不同,其含量随产地的不同而显
示出一定的差异,其变化范围在 14. 68 ~ 70. 19 mg /g,含量较为丰富。本研究建立盘龙七药材
中岩白菜素含量测定方法,并分析检测了产自陕西、甘肃、四川三省 14 个产地盘龙七中岩白菜
素的含量,其结果可为盘龙七药材的质量控制提供科学依据。
[关 键 词] 盘龙七; 秦岭岩白菜; 岩白菜素; 含量分析
[中图分类号] Q946. 91 + 9 [文献标识码] A
收稿日期:2014-09-28
基金项目:陕西理工学院研究生创新基金资助项目(SLGYCX1312)
作者简介:王星(1987—),男,陕西省商洛市人,陕西理工学院硕士研究生,主要研究方向为植物资源开发利用;[通信作
者]赵桦(1957—),男,陕西省汉中市人,陕西理工学院教授,硕士生导师,硕士,主要研究方向为植物资源开发利用。
盘龙七为虎耳草科(Saxifragaceae)岩白菜属植物秦岭岩白菜(Bergenia scopulosa T. P. Wang)的根
茎,多年生草本,分布于陕西、四川及甘肃东南部[1],为我国特有种。盘龙七是陕西民间常用药,涩、味
苦、平;具有补脾健胃,收涩固肠,除湿利水,活血的功效;主治急慢性肠胃炎、浮肿、崩漏、白带、淋症、痢
疾、黄水疮、秃疮、疥癣等[2]。岩白菜素(Bergenin),又称岩白菜内脂、矮茶素、虎耳草素等,属异香豆素
类化合物。岩白菜素为岩白菜等药用植物中的有效成分,具有良好的镇咳和治疗胃肠道疾病的功效,如
胃溃疡、腹泻及便秘,此外还具有良好的抗炎、抗心律失常、抗病毒、护肝等作用[3-5]。
冯永辉等[6-7]曾对陕西太白山产盘龙七中岩白菜素含量进行了研究报道,但不同产地盘龙七中的岩
白菜素含量的变化情况尚无研究分析报道。为深入了解盘龙七药材有效成分含量变化,便于药材质量
控制,作者对产自陕西、甘肃、四川三省 14 个产地盘龙七药材中岩白菜素含量进行了分析研究,为盘龙
七药材资源的开发利用以及药材质量控制提供科学依据。
1 仪器与材料
1. 1 实验仪器
Waters e2695 高效液相色谱仪(包括四元泵,真空脱气机,2489 紫外检测器),Empower色谱工作站;
U3900H紫外分光光度计,日本日立;AB204-S电子分析天平,瑞士,Mettler Toledo公司;SB-5200DR型数
控超声波清洗机,宁波新芝生物科技股份有限公司;UPH-II-10T优普超纯水机,成都优普净化科技有限
公司。
·26·
1. 2 实验材料与试剂
14 个不同产地实验用药材分别购自陕西汉中等盘龙七产地药材市场,经陕西理工学院植物学教授
赵桦鉴定为秦岭岩白菜干燥根茎,即盘龙七药材。
岩白菜素对照品购自上海同田生物技术股份有限公司,批号(14042121)。高效液相分析流动相用
乙腈为色谱纯,样品制备用甲醇为分析纯,磷酸为分析纯,水为超纯水。
2 方法和结果
2. 1 色谱条件
色谱柱为 Inertsil ODS-3C18(4. 6 mm ×150 mm,5 μm)柱,以乙腈-0. 2%磷酸溶液(9 ∶ 91)为流动相,
流速 1. 0 mL /min,检测波长 275 nm,柱温 30 ℃。
2. 2 对照品溶液制备
精密称取岩白菜素标准品 7. 5 mg,甲醇溶解并定容至 100 mL 容量瓶中,配制成 75. 0 μg /mL 的对
照品溶液(母液)。放于 4 ℃冰箱中,备用。
2. 3 供试品溶液制备
取盘龙七药材,60 ℃下烘干,粉碎过 60 目样品筛。称取约 0. 2 g,精密称定,置于 100 mL 锥形瓶
中,加 50 mL甲醇,60 ℃下超声萃取 30 min。超声萃取条件为:功率 240 W,频率 40 kHz。提取液冷却
后抽滤,将滤液定容至 50 mL容量瓶中备用。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系的考察
准确量取岩白菜素标准品母液 2、4、6、8 mL,分别用甲醇溶解并定容至 10 mL 的容量瓶中,配制成
浓度分别为 15. 0、30. 0、45. 0、60. 0 μg /mL的岩白菜素标准品溶液,连同岩白菜素标准品母液共 5 种不
同浓度的溶液分别进样,每个浓度供试品溶液各进样 3 次,每次 10 μL,进样前用 0. 45 μm的滤膜过滤,
测定峰面积。以岩白菜素对照品溶液浓度为横坐标,吸收峰面积为纵坐标绘制标准曲线,得岩白菜素回
归方程为 Y = 14 942. 0X - 428. 6,R2 = 0. 999 8。试验结果表明,在 15. 0 ~ 75. 0 μg /mL范围内岩白菜素
溶液浓度与其光吸收峰面积呈良好的线性关系,岩白菜素标准曲线见图 1,标准品色谱图见图 2。
图 1 岩白菜素标准曲线
2. 4. 2 精密度试验
用岩白菜素对照品溶液重复进样 5 次,每
次 10 μL,其峰面积 RSD为 0. 34%。
2. 4. 3 重复性试验
称取盘龙七样品 5 份,每份约 0. 2 g,精密
称定。按照 2. 3 项下方法制备供试液,按照
2. 1项下条件测定,每份进样 3 次,每次 10 μL。
5 份样品中岩白菜素的含量分别为:14. 485 8、
14. 655 2、14. 551 1、14. 794 1、14. 901 9 mg /g,
平均含量为 14. 677 6 mg /g,RSD为 1. 17%。说明本文方法有较好的重现性。
2. 4. 4 稳定性试验
用某一份盘龙七样品制备供试液,供试液分别于提取后 0、1、2、4、6、8 h 进样。得岩白菜素溶液光
吸收峰面积的 RSD为 0. 89%。说明盘龙七中岩白菜素供试液在 8 h内稳定。
2. 4. 5 加样回收试验
精密称取盘龙七样品 6 份,各约 0. 1 g。向 6 份样品中分别加入 1. 586 0 mg 岩白菜素对照品,按本
文方法制备供试液和测定岩白菜素含量,并计算回收率。结果见表 1。
2. 5 不同产地盘龙七样品中岩白菜素含量测定
称取 14 个不同产地盘龙七样品,每个产地样品各 5 份,每份 0. 2 g,精密称定。按照 2. 3 项下方法
制备供试液,按照 2. 1 项下条件测定,每份进样 3 次,每次 10 μL,测得 14 个不同产地盘龙七中岩白菜素
·36·
第 2 期 王星,张娜,赵桦 不同产地盘龙七中岩白菜素含量的分析研究
含量在 14. 68 ~ 70. 19 mg /g之间。样品含量测定色谱图见图 3,其岩白菜素含量和 RSD见表 2。
表 1 岩白菜素加样回收率实验(n = 6)
序号
取样量
/g
样品中岩白菜素
含量 /mg
添加标品量
/mg
实测值
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 0. 099 7 1. 463 4 1. 568 0 3. 012 3 98. 79
2 0. 100 5 1. 475 1 1. 568 0 3. 015 9 98. 27
3
4
0. 100 3
0. 099 9
1. 472 2
1. 466 3
1. 568 0
1. 568 0
3. 084 8
3. 051 2
102. 85
101. 08
100. 58 1. 77
5 0. 100 2 1. 470 7 1. 568 0 3. 069 3 101. 95
6 0. 100 6 1. 476 6 1. 568 0 3. 053 4 100. 56
图 2 岩白菜素对照品 HPLC色谱图 图 3 盘龙七药材供试液中岩白菜素 HPLC色谱图
表 2 不同产地盘龙七中岩白菜素含量测定(n = 5)
产地
含量
/(mg·g -1) RSD /% 产地
含量
/(mg·g -1) RSD /% 产地
含量
/(mg·g -1) RSD /%
文县 70. 19 1. 68 宕昌县 68. 38 1. 85 太白县 60. 71 1. 81
眉县 59. 83 1. 58 礼县 59. 61 1. 73 凤县 58. 68 1. 86
青川县 53. 55 1. 79 洋县 49. 72 1. 71 九寨沟县 47. 51 1. 77
户县 45. 77 1. 63 洛南县 35. 12 1. 59 留坝县 37. 10 1. 37
勉县 23. 12 1. 55 镇安县 14. 68 1. 17
3 讨 论
本实验曾比较过流动相不同比例对分析结果的影响:乙腈-0. 2% 磷酸溶液 (20 ∶ 80、15 ∶ 85、
13 ∶ 87 、11 ∶ 89、10 ∶ 90、9 ∶ 91)。当流动相比例为 9 ∶ 91(乙腈-0. 2%磷酸溶液)时,其出峰质量和出峰
时间相对于其它流动相配比为最佳。所以选择 9 ∶ 91(乙腈-0. 2%磷酸溶液)为该实验的流动相比例。
在稳定性实验中,供试液在 8 h之内测定,RSD为 0. 89%,而在 12 h测定时,RSD为 6. 5%,误差较大,故
供试液在8 h之内检测是稳定的。
有关 HPLC法测定岩白菜属植物中岩白菜素含量的报道较多[6-12],但关于不同产地盘龙七中岩白
菜素含量的测定尚未见报道。本研究以陕西、甘肃、四川三省 14 个不同产地盘龙七为材料,研究了其岩
白菜素的含量。分析检测结果表明,所检测的 14 个产地盘龙七中岩白菜素的含量在 14. 68 ~
70. 19 mg /g之间,其中甘肃省陇南市文县产的秦岭岩白菜中岩白菜素含量为 70. 19 mg /g,为所分析材料
中岩白菜素含量最高的样品。
据文献报道,不同生长地区岩白菜属植物根茎中岩白菜素的含量变化较大,一般在 1. 80% ~
9. 77%之间,其中产自云南的岩白菜中含量较高[8-10]。厚叶岩白菜根茎中岩白菜素的含量在 8. 65% ~
9. 58%,含量较高[10-11]。舌岩白菜、峨眉岩白菜等的含量较低,一般含量在 3%以下[12-13]。在虎耳草科,
除岩白菜属植物外,虎耳草属植物中岩白菜素含量在 0. 11% ~0. 51%之间[14]。鬼灯擎属植物根茎中岩
·46·
陕西理工学院学报(自然科学版) 第 31 卷
白菜素含量最高可达 10. 05%,最低为 1. 31%[15-17]。本文所报道的 14 个产区秦岭岩白菜有 7 个产区的
岩白菜素含量在 5. 0%以上,最高可达 7. 0%。与现有文献报道相比,秦岭岩白菜中岩白菜素的含量较
高,可作为岩白菜素的来源之一。
实验建立了高效液相色谱法测定盘龙七药材中岩白菜素含量的方法,分析检测了产自陕西、甘肃、
四川三省 14 个产地盘龙七药材中岩白菜素的含量,研究结果可为盘龙七药材质量评价提供科学依据。
[ 参 考 文 献 ]
[1] 中国科学院中国植物志编委会.中国植物志:第三十四卷,第二册[M].北京:科学出版社,1992:27.
[2] 南京中医药大学.中药大辞典[M]. 2 版.上海:上海科学技术出版社,2006:3048.
[3] 崔莹.盘龙七化学成分的研究(I)[J].中成药,2011,33(9):1546-1549.
[4] 杨丽川,邹澄,赵沛基,等.岩白菜素的研究进展[J].昆明医学院学报,2012(1):150-154.
[5] 李凤,周丹,秦瑄,等.岩白菜素理化性质的研究[J].中国药学杂志,2009,44(2):92-94.
[6] 冯永辉,贺利娜,张博,等. HPLC法测定盘龙七中岩白菜素的含量[J].安徽农业科学,2011,39(2):15973-15974.
[7] 索建兰,林宏领. HPLC法测定盘龙七中岩白菜素的含量[J].陕西中医,2011,32(3):353-355.
[8] 姜洪君,郭凤根,张丽梅,等.云南不同地区岩白菜中岩白菜素含量的比较[J]. 云南农业大学学报,2010,25(6):
895-898.
[9] 姜洪君,程培秀,魏银贵,等.高效液相色谱法测定岩白菜中岩白菜素含量[J].中国中医急症,2010,19(7) :1180-1181.
[10] 孙欣光,黄文华,马淼,等.岩白菜和厚叶岩白菜不同部位有效成分的比较研究[J].中国中药杂志,2010,35(16):
2079-2082.
[11] 吴红红,潘兰,贾晓光,等.新疆厚叶岩白菜素提取方法优化及不同部位含量的研究[J].中国生化药物杂志,2014,
34(1):74-75.
[12] 纪兰菊.西藏产两种岩白菜中岩白菜素的 HPLC测定[J].西北植物学报,2005,25(2):397-399.
[13] 程犇,黎云祥,权秋梅,等. HPLC法测定峨眉岩白菜中岩白菜素方法[J].西华师范大学学报:自然科学版,2011,
32(4):317-320.
[14] 黄志金,赵杨,赵超,等.虎耳草根、茎、叶中岩白菜素的含量研究[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(2):86-88.
[15] 彭朝霞,扬朝莲,熊然英.高效液相色谱法测定两种岩陀中岩白菜素的含量[J].中国生化药物杂志,2012,33(4):
419-421.
[16] 陈雯,孟珍贵,杨生超,等.云南鬼灯檠属植物中岩白菜素含量比较[J].安徽农业科学,2011,39(10):5767-5769.
[17] 刘荣,赵永成,柯福锌. HPLC法测定不同产地岩陀中岩白菜素[J].现代中药研究与实践,2014,28(2):13-15.
[责任编辑:李 莉]
Determination of bergenin in Rhizoma Bergeniae Scopulosae from different areas
WANG Xing1, ZHANG Na2, ZHAO Hua1
(1. School of Bioscience and Engineering,Shaanxi University of Technology,Hanzhong 723000,China;
2. Hanzhong Vocational and Technical College,Hanzhong 723000,China)
Abstract: The contents of bergenin in Rhizoma Bergeniae Scopulosae from different areas were deter-
mined by using HPLC. The chromatographic separation was carried out using Inertsil ODS-3 C18 column
(4. 6 mm ×150 mm,5 μm),the mobile phase was acetonitrile :0. 2% phosphoric acid (9 ∶ 91) ,the detec-
tion wavelength was set at 275 nm,the temperature was 30 ℃,and the flow rate was 1. 0 mL /min. The cali-
bration curve was linear in the range of 15 ~ 75 μg /mL and the regression equation for bergenin was Y =
14 942. 0X - 428. 6 (R2 = 0. 999 8),the average recovery was 100. 58% with RSD of 1. 77%(n = 6).
The results showed that there are some differentces in the content of bergenin among different areas,and that
the contents of bergenin were ranges betweenfrom 14. 68 ~ 70. 19 mg /g. This method is simple,efficient and
accurate,which can be used for the analysis of bergenin in Rhizoma Bergeniae Scopulosae.
Key words: Rhizoma Bergeniae Scopulosae; Bergenia scopulosa T. P. Wang; bergenin; contents
analysis
·56·
第 2 期 王星,张娜,赵桦 不同产地盘龙七中岩白菜素含量的分析研究