全 文 ：用 细 胞 培 养 法 筛 选
三尖杉属植物生物碱抗癌作用的初步报告
全允栩 耿欣莲 张芸细
在寻找抗癌新药 时 , 筛选方法的合适与否是一个关键性问题 。 我国 自成立三尖杉抗
肿瘤研究协作组 以来 , 已从各地区所产三尖杉属的几种植物中分离和半合成多种生物碱
单体 。 摆在面前的任务就是要在这些生物碱中筛选出抗肿瘤效用较高的药物 。 许多单位
已采用 动物瘤谱体内筛选的方法做了不少工作 ’ , 但尚未见到体外筛选三尖杉属 生 物
碱的报告 。 体外筛选方法甚多 “ 一 “ , 各有优缺点 , 我们选用了细胞培养法 。 由于细胞培
养法用药量经济 , 便 于应用药物 , 可用各种细胞学技术显示细胞结构和生化变化 , 尤其
是可做直接生活观察 , 以及在较短时间内可以得出结果等优点 , 因此应用这种方法进行
其他抗肿瘤药物的筛选和研究 , 在国内外已均有报导 “ 一 ’ 。 ’ “ ” “ ” 。 但因体外筛选试验
有较高的假阳性 , 一种药物在体外要显示出比较稳定的抑瘤作用 , 才认先有价值 。 因
此 , 用细胞培养法筛选三尖杉属植物生物碱打瘾作用的可靠性女.何 , 必须耳氢验沫订明 ,
始可更好地用此种方法对这类药物进行探入的研究 。 为此 , 我们选用了小白鼠艾 氏腹水
癌细胞和人类宫颈癌细胞株 ( H e L a 细胞 ) 为对象 , 分析数种三尖杉属植牧生数碱的抗
癌作用 。
材 料 和 方 法
一 、 培养液 : 所用培养浓有两种 :
在小白鼠艾氏腹水癌的实验中为含有马血清或小牛血清的水解乳蛋白平衡盐溶液 ,
成分为:
马血清或小牛血清 20 或 10 毫升
0
.
5%水解乳蛋 白亨氏 ( H a n k s) 液 80 或 90 毫升 。
对 H e L a细胞实验的培养液为 :
1 9 9液 4 5毫升 ,
0
.
5 %水解乳蛋白亨氏液 45 毫升 ,
. 小牛血清 10 毫升 。
以上两种培养液均加下列两种抗菌素 :
, 青霉素 1 0 0单位/ 毫升
链霉素 10 微克 /毫升
本丈 19 7 7年B月4 目收 到
DOI : 10. 13885 /j . i ssn. 0455 -2059. 1977. 04. 008
5 6州 天 学 学 报1 9 7 7年招月
最后用 2 .8%碳酸氢钠 ( Na HC O :)校正酸碱度至 7 .吐使用 。
二 、 培养细胞的准备 :本实验选用 以下两种细胞作研究对象 :
l
、 小 白鼠艾氏腹水癌细胞
取接种艾氏腹水癌细胞数天的小白鼠 , 用颈椎脱臼法处死 。 在无菌操 作 下 , 用 以
1 : 2 0 0 0肝素溶液湿润的注射器吸取腹水 , 注入事先加有 0 . 1毫升的肝素溶液的离 心 管
内 , 每管加入腹水 1毫升 , 并和管内肝素溶液混合均匀 ,低速离心沉淀 ( 1。。。转 /分 ) 5
分钟 , 弃去上清液 , 将沉于管底的细胞用 1毫升培养浪混悬并计数 。 然后将此细胞悬液
用培养液稀释成每毫升含 6一10 万个细胞 , 分装于培养小瓶内 , 每瓶分装。 。 9毫升 。
2
、 宫颈癌细胞株 ( H e L a细胞 )
此细胞系由患宫颈癌的病人分离出来的 , 在试管内传代多年 , 成为稳定的细胞株 。
取长成单层 , 细胞形态良好的 H e L a 细胞培养瓶 , 弃去培养液 , 加入适量的。 . 02 %乙二
胺四乙酸二钠盐溶浓 , 以能复盖细胞面为度 , 放于 37 ℃箱中30 分钟 。 将消化浓连同消化
下来的细胞 , 倒入离心管内低速离心 ( 1。。。转 /分 ) 6 ~ 10 分钟 , 倒去上清液 , 用同法
以亨氏液洗两次 ,弃去上清液 , 沉于底部之细胞用 l 毫升培养浓混悬均匀后计数 , 最后用
培养液稀释至每毫升含细胞 l 。万个左右 ,吸取 1毫升细胞悬液至培养小瓶内 ,培养 3夭 ,
长成单层后备用 。
三 、 药物及其配制和添加
本实验所用药物均由兰州大学化学系供给 。 对艾氏腹水癌细胞使用的药物 , 为由甘
肃天水产的中华粗机 ( C e p h a l o t a x u : 。 i n e n s i s ) 提取的生物碱 , 共两种 :
三尖杉碱 ` ’ ` ’编号 C S T 一 1 , 2
三尖杉总碱除去三尖杉碱后的组分 ` ” ’ 编号 C S T 一 M
对 H e L a 细胞使用的药 t物为由甘肃夭水产的中华粗梅提取的三尖杉总碱和下列半合
成药物 . ` ’ “ ’
a 一酮酞基三尖杉碱 (合成中间体 )
编号 D H 一 6
脱氧三尖杉醋碱纯品 编号 D H ( 2 )
· 脱氧三尖杉醋碱柠檬酸盐 ( 7 6 一 1批 )
编号 D H 一 4 SC
为了比较以上各种药物的抗癌作用 , 我们选用已在临床上使用的抗癌药 5 一氟尿嗜吮
作对比 。
以上药物溶解后 , 用亨氏液稀释至所需浓度并调节酸碱度至中性 。 实验组每管培养
物内加入药物。 . 1毫升 (用 H e L a细胞时 , 需将原来的培养液倒去 , 重新加入新鲜培养液
。 . 9毫升 ) , 对照组每管加。 . 1毫升的中性亨氏浓 。 药浓加入后轻轻振荡培养瓶 , 使药液
与细胞悬液充分混匀 , 最后换上橡皮塞 , 将培养瓶倾斜成 5度 , 放于 37 ℃温箱内静置培
养 。
第 4 期 用细胞培养法筛选三尖杉属植物生物碱抗癌作用的初步报告 57
四 、 抑制百分率的计算
在给药后 24 及 48 小时观察药物对细胞生长的抑制作用 。 计数前 , 在艾氏腹水癌细胞
的实验中 , 直接加入 0 . 25 毫升的 0 . 4 %藻红水溶液 , 在 H o L a细胞的实验中 , 先将原培养
液倒去 , 然后加 1毫升消化液 , 放在 37 ` c 温箱中消化 10 分钟 , 使细胞层自瓶面脱落 , 再
加藻红溶液 。 用滴管将瓶内的细胞吸打均匀 , 立即滴入血球计数盘内 , 按下式计算每毫
升未被藻红染 色的活细胞数 。
每毫升内活细胞数 = 计数盘四角大方格内夫染藻红细胞数
4
X 1 0
, 0 0 0
每组培养物内取出三瓶进行计数 , 每瓶计数四次 , 求三瓶的平均数 , 再按下式计算
药物对细胞生长的抑制百分率 。
抑制百分率 = 对照 组每毫升平均活细胞数一实验组每毫升平均活细胞数对照组每毫升 内平均活细胞数 X 1 0 0
五 、 P值的计算 : 按组问比较的公式求出各组存活细胞数的平均数标准误 , 求得 t 值
后查 t值表求出机率 p值 , 即可知 各实验组和对照组相比是否有显著性差异 。
六 、 制片 : 为了观察细胞形态变化 , 在几组实验的培养瓶内放有盖片 , 于培养 24 小
时 、 48 小时后取出以甲醇固定 , 姬姆萨 ( G ie m s a) 染色 , 二甲苯透明 , 中性树胶封藏 。
实 验 结 果
我们对药物效用的估价标准是 : 第一 , 药物对培养细胞生长抑制百分率的高低 , 参
考朱天锡等 ` 7 ,对利用吉田腹水肉瘤筛选抗肿瘤药物的药效估价标准 (见表一 ) 。
表一 : 药效估价的标准
葱沁鳄 作用明显
7 1 一 1 0 02 4
有 作 用 }作用不
肯定
{
无 , ’用 一 ’
4 1一 7 0 1 2 1一 4 0
5 1一 8 0 } 3 1一 5 0
2 0以下
3 0以下
第二 , 在生物统计上实验组与对照组的存活细胞数是否有显著性差异 。
一 、 对小白鼠艾氏腹水癌细胞的实验结果 :
对小白鼠艾氏腹水癌细胞 , 我们使用了两种 药物 , 即三尖杉总碱除去三尖杉碱后的
组分 , (编号 C S T 一 M ) 和三尖杉碱 (编号 C S T 一 1 , 2) 两种 。
由表二可以看出 , 用 C S T 一 M 共进行了五次实验 , 药物浓度均为每毫升 1 0 微克 。
在药物和细胞接触 24 小时后 , 五次实验中只有两次的抑制作用是 明显的 , 其抑制率分别
为 48 % ( P咬 0 . 0 5) 和 52 % ( P < 。 . 0 1) 。 由表一的药效估价标准为属于有作用 , 而其
他三次均无显著性差异 ( P > 0 . 。的 。 在药物和细胞接触 48 小时后 , 五次实验 , .与对照
兰 州 大 学 学 报 1 9 7 7年 12月
组相比均有非常显著性差异 , 抑制率则分别介于 61 %至 90 %之 间 , 属 于有作用和作用 明
显 。
表二 : 三尖杉总碱除去三尖杉碱后的组分 ( C S T 一 M )
对小白鼠艾氏腹水窟细胞生长的抑制作用 。
实 }少 另叮… 2 4小时 4 8小时验 }次 ! 细 胞 均 数 抑制率 P 细 胞 均 数 `{ P第 } 土 标 准 误 ( % ) 土 标 准 误 {( x 1 0 ` ) ( x 1 0 弓 )
1 对 照 组 4 。 6 8士 0 . 5 7 3 . 4 士 0 。 2 7
, 实 验 组 3 。 9 2士 0 。 4 6 1 6 > 0 。 0 5 1 。 0 4 士0 。 2 9 6 9 穷 *
1 0 微克 /毫升 < 0 。 0 1
2 对 照 组 7 。 2 7 士 `0 。 8 9 6 。 5 士 0 。 0 9
实 验 组 3 。 7 3士 O。 3 6 4 8 * 2 。 5 4 士 1 。 1 8 6 1 串
1 0 微克 /毫升 ( 0 。 0 5 < 0 。 0 5
3 对 照 组 7 . 9 6 士 1 。 5 5 5 。 0 2 士 0 。 1 9
实 验 组 7 。 1 9 士 1 。 0 1 9 > 0 。 0 5 0 。 4 8 士 0 。 1 4 9 0 取 名
1。。微克 /毫升 < 0 。 0 0 1
4 对 照 组 1 1 . 0 6士 1 。 6 2 8 . 1 3 土 0 。 7 2
} 实 验 组 7
.
5 6 士 0 。 9 9 3 1 > 0 。 0 5 0 。 9 士 0 。 1 3 8 8 * 水
{
, 。”微克 /毫升 < O。 0 0 1
5
}
对 照 组 一…2 7· “ 士 ` · 2。 … } …瓜滋土 。 · 8 3
} 实 验 组 …_ 1 3一: : 7 9- …5 2 一…<。一 1’…4一士` ’ 5 7 6 水{1” ”微克 /毫升 赶 0。 0 5
注 . : 表示差异虽 著
* * 表示 差异非常显矛
用三尖杉碱 ( C S T 一 1 , 2) 的实验结果见表三 。 共实验三次。 所用药液浓度为每 毫
升含药物 l 毫克 、 50 。微克和 1 0 微克。 三次实验中有两次实验 (第 1 , 2 次 ) 无论药物
的不同剂量以 及药物作用的不同时间与对照组相 比均无显著性差异 。 而第三次实验结果
则相反 , 无论药物的不同剂量以及药物作用的不同时间都显示出有显著或非常显著的抑
制作用 。 药物浓度 1 毫克 /毫升在 24 和 48 小时的抑制率分别为 8 % 和 96 % ; 5 0 微克 /毫
升的抑制率分别为 36 %和 81 % ; 1 0 微克 /毫升的抑制率分别为3 %和 97 % 。 按 2 4小时沽
价 , 1 毫克 /毫升属于作用明显 , 50 。微克 /毫升和 1 0 微克 /毫升组属于作用不肯定 。 按
4 8小时估价 , 三个浓度组都属于作用明显 。
第 4期 用细胞培养法筛选三尖杉属植物生物碱抗癌作用的初步报告 的
表三 :三尖杉碱 ( C T S一 1, 2) 对小白鼠艾氏
腹水癌细胞生长的抑制作用
一 . . . ~ .一月 . . . . . . . . 口 . , 尸曰一一一 ~ 忿“ 口. . . . .2 4小时 4 8小时`{抑制率! ( % )对 照 组 { 7 · 9。士 1 · 5 5 … } 一5 . 1 5 士 0 . 1 9 · 1{ ` · 9 4牛生型_ _ _ _ }` · 5 > 0 。 0 5实 1 毫克 /毫升 5 。 8 5 士 0 。 7 3 2 6 > 0 。 0 5 4 。 9 4 士 0 . 3 4
验组!5。。微克 /毫弄 ’ 7 。 5 0 士 1 。 0 8 5 。 7 > 0 。 0 5 4 . 5。士 1 . 6、 }} 8 . 6 > 0 。 0 5
1 0 0微克 /毫升 7 。 13士 0 。 8 2 1 0 > o · 0 5 } 4 · 7 7士 0· 3 5 ! > 0 。 0 5
4
。
7
对 照 组 1 1 . 0 6 士 1 。 6 2 { { 、 }} 8 . 1 3 士 0 . 7 2 }
一 :
实 1 毫克 /毫升 1 0 。 6 9士 1 . 0 4 3 > 0 。 0 5 }_ _ 6 · 6” 士 0 · 竺一_ { ` 7 > 0 。 0 5
验组 5 0 微克 /毫升 9 。 1 7 士 O。 7 6 1 7 > 0 。 0 5 7 。 9 6 士 0 。 1 9 1 }> 0 . 0 5} 2
l
1 0 微克 /毫升 1 1。 8 5士 1。 2 3 一 7 > 0 。 0 5 8 . 4 0 士 0 。 7 3 一 3 > 0 。 0 5
对 照 组 · …2 7 。 4 4 土 1 。 2 0 . 1 6。 9 2 士 0 . 8 3
` 毫克 /毫升 …1 4 。 1 0士 4 . 13 8 8 帘 0 。 5 0 士 0 。 0 6 9 6 * 串( 0 . 0 5 ( 0 。 0 0 1
5 “ 。微克 /毫升
{
1 7
。
5 0士 1 。 2 3 3 6 水 * 3 。 0 6土 0。 9 1 8 1 * 令
( 0
。
0 1 ( 0
。
0 0 1
1 8
。
3 1 士 1 . 9 3 3 3 冰 0 . 4 4士 0 。 19 9 7 自
( 0
。
0 5 ( 0
。
0 5
一数误一均准少一胞标协一一细土组 别 细 胞 均 数
土 标 准 误 …抑` }J率… 。I ( % ) }
实验次第
劳表示 差异 显著
* * 表示 差异 非常显著
l
|
l
!川引|!1一
!|!|刻州
|
一该
以 C S T 一 M和 C S T 一 工, 2比较 , 在浓度为 1 0 微克 /毫升的情况下 , C S T 一 M在五次
实验中 4 8小时者差异非常显著或显著 , 抑制率在 60 % 以上 , 属于有作用 。 而 C S T 一 1 , 2
在三次实验中只有一次有显著性差异 , 抑制率较高 ( 97 % ) , 其他两次实验均无显著性
差异 。 因此 , 我们认为 C S T 一 i , 2的作用不如 C S T 一 M 。
二 、 对 H e L a细胞的实验结果 :
对 H e L a 细胞共用了五种药物 : 三尖杉总碱 ,脱氧三尖杉酷碱纯品 ( 编号 D H ( 2 ) ) ,
脱氧三尖杉醋碱柠檬酸盐 ( 7 6 一 1 批 ) (编号 D H 一 4 . 8 C ) , a 一 酮酞基三尖杉碱 (合
成中间体 ) (编号 D H 一 6 ) 和用作对比的 5 一氟尿嗜吮 。
用三尖杉总碱共进 行了八次实验 (见表四 ) , 所用浓度为每毫升 1 0 0 、 50 、 10 微
克 。 在浓度 1 0 微克 /毫升的两次实验 (第 6 , 7 次 ) 中 , 差异均非常显著 。 24 小时的抑
制率分别为 76 %和 79 % ; 4 8 小时为 94 %和 8 % ; 都属于作用 明显 。 浓度为 50 微克 /毫升
的一次实验无显著性差异 。 在浓度为 10 微克 /毫升的五次实验中 , 药物处理 24 小时者 ,
兰 州 大 学 学 报 17 7 9年 1 2月
仅有一次实验差异显著 , 抑制率为 75 % , 属于作用 明显。 其他四次实验 , 均无显著性差
异 。 药物处理 48 小时者 , 有三次实验 (第 3 , 4 , 5 次 ) 差异非常显著或显著 , 抑制率
在 76 %和 86 %之间 , 属于有作用 。 我们认为三尖杉总碱对于 H e L a 细胞的生长 , 有一定
的抑制作用 , 但在我们的实验中不够稳定 。
表四 : 三尖杉总碱对 H e L a 细胞生长的抑制作用
一 , 一一 .一 -— —— _2 4小时 4 8小时细胞均数土标准误( X 1 0` ) 抑制率(% ) 细胞均数土标准误( X 1 0今 ) }抑制率 { P` (% ) `别日一次验实第 3。 3 4土 0。 0 6 ! ` 6。 0 0士 3。 1 31。 0 0土 0。 0 6 7 0 > 0。 0 5 1。 1 2土 0。 5 6 } 一闷丽 -; 8 1夕 又 1十 1 1只 一…{ ~ . ~ ~ — 一 . 击 ~l实验组 10 微克 /毫升 4。 5 8士 2。 0 9 一 9 8 > 0。 0 5 0。 1 3土 0 . 1 1 9 0 …沙些 -3 对` 照 组 1。 5 8士 1 . 9 3
实验组 10 微克 /毫升 1。 5 0士 0。 1 1 5。 2 > 0。 0 5 水8 6 ( 0。 0 5
4 . 对 照 组 4。 14士 0 . 7 2 3。 0 2士 0。 3 5
实验组 10 微克 /毫升 1 . 0 2士 0 . 3 3 7 5 * 0。 7 1土 0。 2 1 7 6 冰 *
( 0
。
0 5 ( 0
。
0 1
5 对 照 组 4 . 1 0士 1。 8 0 6。 7 5士 0。 1 1
实验组 10 微克 /毫升 2 . 4 9士 0。 1 5 3 9 > 0。 0 5 1。 2 9士 0。 2 8 8 4 *
< 0
。
0 5
6 对 照 组 1 1。 6 0士 1。 4 5 8· 7 5土 1 . 2 3 }
实验组 1 0 微克 /毫升 2 . 7 1士 0。 2 6 7 6 * * o ·石2士 “ · “
1
9 4 * *
7 对 照 组 < 0。 0 1 ( 0。 0 1
4
。
2 7土 0。 0 6 2· 2 5土。 · 7 2… }
实验组 1 0 微克 /毫升 0 只只+ O
_
1 1 7 9
余 * 。 . 2。士。 . 。。
{
’
}
- 容 出
( 0
。
0 0 1 8“
}(
0
。
0 0 1~ . 、 口 ~ -
~ . 侧` 日`
8 对 照 组 1 7 。 1 9士 3。 1 3 , 2 . 3。士 。 . 6 3… …_实验组 5 0微克 /毫升 8 。 9 1士 0 。 0 3 4 8 > 0。 0 5 , . 。 7土 。 . 4: …8 4 】-> 0 。 0 5
注 : . 表示 差异显芳
* *表示差异非常显著
脱氧三尖杉醋碱纯品 ( D H ( 2 ) 的实验共进行了四次 。 药物浓度有五种 : 即每 毫
升含药物 1。。 、 50 、 1。、 6 、 . 1微克等。 从表五可以看出 , 虽然在处理 24 小时的各组实
第 4期 用细胞培养法筛选兰尖杉属植物生物碱抗癌作用的初步报告 6 1
验巾 , 多数无显著性差异 , 但在 48 小时的处理中 , 差异均非幂 :
次 ) , 而抑制率也都在 90 %以上 , 只有一次 1 微克 /毫升组为 8 1
杯理 由 , 慈豆云j让膏尸誉 (三次 ) 或显著
。 按 4 5小时进行估价 ,
作用 明显 。
表五 : 脱氛三尖杉酷碱纯品 ( D H (2 ) 对 H e L a 细胞生长的抑制作用
2 4小时 4 8小时
别 细胞均数土标准误
( x 1 0
bl] 率
% ) 二瞿霎…画二P组实验次第
组 5 。 8 8士 1 。 3 8 8 。 2 7 士 1 。 2 8扩两 一协瓜万诬五J竺1型竺竺 6 士 0 9 0 1< 0 . 0 1”
。
0 9土 0 。 0 4 9 8 < 0 。 0 1
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一 对 照 组 .
}
1 3
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实验组 1 0 0 l 。 4 8士 0 。 2 9
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{
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(微克 /毫升 ) }< 。 . 001 .
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1 3士 0 。 1 9 8 4
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l 上_ _ 二 _ _3 1 4 。 4 8士 1 。 1 7 { ` {
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3 5土 0 。 1 4 9 7 帘 分
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}
。 7 粉
< 0
。
0 5
4 对 照 组 1 3 。 3 1士 6 。 9 0 : 4 . 。。士 1 . 3 2
}
!
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}
{
实验组 ` “ “
{
“ · 。 8士。 · 2 1
}
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(微克 /毫升 ) < 0 。 0 0 1
{
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. 串 扮 。 . 、 。士。 . 0 7
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·
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}
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6 3 * 。 . 1 3
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< 。 . 。成’
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}
1 0 0 }0
·
3 1土 0 · 1 9
5 0 0
。
2 5士 0 。 0 6
。
2 8土 0 。 1 3 { 9 5 0 5nU>nUlrnU1人
月.飞
1
匕
es
es
注 : . 表示 差异 显著
* 主衣示 差异非常显著
兰 州 大 学 学 报 1 9 7 7年1 2月
用脱氧三尖杉醋碱柠檬酸盐 ( 6 7一 1 批 ) ( D H 一 4 . 8 C) 共做了七次实验 。 药物浓
度也有五种 , 即每毫升含药物 1 0。 、 50 、 10 、 5 、 1 微克等。 结果见表六 。 在七次实验
中 , 有两次实验 (第 6 , 7 次 ) 在 24 小时和 4 8小时的处理 中 , 均表现显著性或非常显著
性差异 , 抑制率除低浓度的两组外 , 均在 80 %以上 , 作用明显 。 在另外四次实验 (第 1 ,
3
,
4
,
6
, 次 ) 的 48 小时处理中 , 除少数几个低浓度组无显著性差异外 , 也均有非常
显著性或显著性差异 , 多数抑制率在 80 % 以上 , 作用明显 。 但这四次实验在 24 小时处理
中 , 大部分无显著性差异 , 抑制率也不规律 。 只有一次实验 (第 2 次 ) 4 8小时的 P 值均
无显著性差异 , 这是一个例外 。
表六 : 脱氧三尖杉醋碱柠檬酸盐 ( D H 4 。 s c) 对 H e L a 纽胞生长的抑制作用
2 4小时 4 8小时
细胞均数
土标准误
( x 1 0
`
)
口力组实验次第
{
对 照 组 8 7 士 1
1 0 0 1 0
。
4 4 士 0 。 1 3
{
9 3 {> 0
。
0 5
1 1 实 验 组
_
j竺烤尹i 四
J坚二些竺 {兰洋燮生】1 0 11 · 2 5士 0 · 4 1 } 7 8 }> o · 0 5
0
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1 6 士 0 。 1 1 } 9 8 } / 。 八了,— }— }~ -” · 8 1士 ” , 3 1 1 ” 0 1> 0 · 0 5对 照 组 0 。 6 3 土 0 。 0 3 1 。 6士 0 。 6 6
实 验 组
(微克 /毫升 )
…竺{些竺兰里竺-
}竺…上竺巴竺
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1
1 1”
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1 5 士 ” · 1 2
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1…elll一,工八O一跳U.O匕厅`一3八U乃乙月了一月注ōù
2
对 照 组 1 4 。 4 8 士 1 。 1 6 2 2 。 13士 4 。 9 6
实 验 组
(微克 /毫升 )
1 0 0 0
。
7 7 士 0 。 2 7 9 4 本 * 0 。 1 0士 0 。 0 4 r < 0 。 0 5( 0 。 0 0 1 { 9 9
5 0 2
。
0 2土 0 。 5 8 8 7 劣 * 0 。 2 7士, 0 。 0 9 9 8 *
( 0
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0 0 1 < 0
。
0 5
1 0 9
。
2 1 土 1 。 1 7 3 6 * { 9 1 *
( 0
。
0 5 1
。
9 8 土 0 。 4 3 ( 0 。 0 5
5 1 2
。
3 4 士 1 。 2 8 1 4 > 0 。 0 5 3 。 7 8士O 。 6 6 8 2 > 0 。 0 5
1 1 7
。
8 4 士 0 。 4 7 一 2 3
3
第 4期 用细胞培养法筛选三尖杉属植物生物碱抗癌作用的初步报告 3 6
对 照 组 3 1。 19 士 5 。 25
4
。
3 1士 0。 87 8 6 > 0。 05 0 .3 1士 0。 0 69 7 。 9 * *
( 0
。
01
9 6 > 0
。
05 0
。
7 5 士 0。 13 9 5 串 米
< 0
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1 0
15 0 6 > 0
。
05 0
。
7 7 士 0。 3 19 4
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1之疏一5 6。 9 2士 0。 5 9 4 8 > 0。 05 1。 9 2士 0。 3 89 1
5 1
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3 8士 1。 8 65 9 4 . 4 4士。 · 3 6
}
7 0
。
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5…对 照 组 }… 1 . 0 6士。 · 5 5 }水 比 ( 0。 01实 验 组 1 1 0 0。 5 0士 0。 3 8 23 1 > 0。 5 0 0。 17 士 0。 9 0 25 。 9 } (微克/ 毫升 ) 5 01。 15 士 0。 1 1 .1 4{ > 0。 5 0 0。 27 士 0。 9 0 83 场 *… } < 0。 011 0 0。 9 4士 0。 9 5 1 2{ > 0。 05 0。 4 0士 0。 19 2 0。 3 诊扮 < 0。 015 { 2 .9 6士 o · 3 9 - 。 } > 0。 5 0。 .3。士 。 .1 1{ 9 2 *价 < 0。 011{ 1。 9 0士 0。 7 3 8…「 > 0。 05 。 . 4 8士。 .1。 】 8 8粉杀 < 0。 01
6对 照 组 7 1。 6士 2。 1 0
}
8
.
7 。士。 . 6 0
1{ l
实 验 组 1 0 0 2。 3 8士 0。 0 6 8 6余 * 0。 7 1士 0。 09 8 8【
(微克/ 毫升 ) ( 0。 1 0{ < 0。 01 0
5 0 2
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3 1士 0。 0 6 8 6抉 米 0。 7 1土 0。 1 09 8兮 幼
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。
1 0 < 0
。
1 0 0
1 0 2
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5 4
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5 6土 0。 2 8 8 0肠粉
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.
0 01
1
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4
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9 0士 0。 27 6 6农 台 2。 3 1士 0。 4 67 4
1抚万户 < 0。 1 0
对 照 组 1 2。 81土 2。 49 5 。 5 2土 0。 81
1 0 0 0
。
4 6士 0。 09 4 6爷 扮 0。 17 士 0。 9 0 8 6
}
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。
1 0
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3 5 士 Q。 9 9 07 价 粉 0。 3 1土 0。 0 49 4 * *
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。
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1 1 0
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。
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3 8士 0。 0 6 8 8决 0。 3 8士 0。 0 0 4{ 米 *
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。
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1 0
13
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83 士 0。 5 87 O 场 1。 0 2士 0。 1 2 8 0 *准
< 0
。
5 0 ( 0
。
1 0
注 : .农示差异显著
* .表示 差异非常显等
兰 州 大 学 学 报 19 7 7年1 2月
表七是用 a一 酮酞基三尖杉碱 (合成中间体 ) ( D H一 ) 6的实验结果 。 可见 在三次
实验中 , 仅有两次实验的两个浓度组 (第 1 次的 50 微克 /毫升 48 小时和第 2 次 的 10 。微
克 /毫升 24 小时 ) 有非常显著性差异 , 其他各组实验差异均不显著 , 说 明此药对于 H e L a
细胞无作用 , 但在第一次实验中 , 50 微克 /毫升浓度组处理 48 小时后出现促进细胞增殖
的作用 。
表七 : a 一 酮酸基三尖杉碱 ( D H 一 6) 对 H e L a 细胞生长的抑制作用
实 2 4小时 4 8小时
验次 细胞均数 抑制率 P 细胞均数 抑制率 P
第 土标准误 ( % ) 土标准误 ( % )
( x 10
`
) ( x 10
`
)
r , 代
.
}f
”几3士” · ` 7 I1 3 。 8 5 士 5 。 2 5 }
实 验 组 1 0 0 9 。 6 7 士 0 。 3 5 > 0 。 0 5 10 。 5 4士 1。 3 0 O 。 7 5 > 0 。 0 5
(微克 /毫升 )
5 0 6
。
8 5 士 3 。 6 4 5 0 。 5 1 5 。 19士 0 。 2 4 一 4 2 出 串
( 0
.
0 1
1 0
一
9
。
2 3 士 0 。 8 0 3 3 > 0 。 0 5 1 2 。 5 0士 2 。 0 1 一 17 > 0 。 0 5
2 七 对 照 组 0 。 6 2士 0 。 0 3
实 · 验 组 1 0 0 0 。 2 8 士 O 。 0 6 5 5 * + 1 。 4 8士 0 。 5 6 7 。 7 > O 。 0 5
(微克 /毫升 ) ( 0 。 0 1
5 0 0
。
4 6 士 0 。 18 2 6 > 0 。 0 5 1 。 5 6士 0 。 5 6 2 。 5 > 0 。 0 5
10 0
。
4 7 士 0 。 17 2 5 > 0 。 0 5 2 。 1 5士 0 。 2 0 一 3 5 > 0 。 0 5
3 对 照 组 17 。 6 0土 2 。 0 1! 8 。 7 3士 0 。 6 9
实 ’验 组 1 0 0 15 . 5 0 士 2 . 0 6 } 一 5 > O 。 0 5 14 。 7 3士 9 。 5 2 一 6 8 > 0 。 0 5
(微克 /毫升 )
5 0 1 3
。
7 1士 2 。 8 9 2 2 > 0 。 0 5 10 。 6 0士 1 。 3 7 一 2 1 > 0 。 0 5
1 0 15
。
2 1士 1。 8 7 1 3 > 0 。 0 5 1 1 。 9 0士 1 。 2 6 一 3 6 > 0 。 0 5
5 2 0
。
6 3士 1。 3 8 一 17 > 0 。 0 5 1 6 。 5 8 士3 。 0 0 一 8 9 > 0 。 0 5
1 1 6 ` 2 3士 1 。 8 3 7 > 0 。 0 5 6 。 2 7 士 1 。 0 9 2 8 > 0 。 0 5
为了对比本研究中所用的药物和 巳用于临床的抗癌药物对 H e L a 细胞的生长抑制 作
用 , 我们用 5 一 氟尿嗜吮作 了四次实验 。 结果见表八 。 第一次实验 , 10 微克 /毫升浓度
组处理 24 及 4 8小时的差异显著和非常显著 , 抑制率分别为5 %和 68 % , 属于有作用 。 第
二次实验的 10 。微克 /毫升浓度组处理 24 小时者 , P 值非常显著 , 其余各次实验均无显著
性差异 。 所以在我们的实验中 , 在 4 8小时内 5 一 氟尿吻吮对 H e L a 细胞的抑制作用不及
脱氧三尖醋碱纯品和脱氧三尖杉醋碱柠檬酸盐 。
第 4 期 用细胞培养法筛选三尖杉属植物生物碱抗癌作用的初步报告 “
表八 : 5一氟尿.峨吮对 H eL a细胞生长的抑制作用
2 4小时 4 8小时
组 别 细胞均数土标准误
(X 10
4
)
抑制率
( % )
塑镖灌馨…: : ,
( X 10咭 ) }
、 / o’
实验次第
对 照 组
实验组 10微克 /毫升
1 1
。
6 0士 1。 4 5 8。 7 5士 1。 2 3
5
·
2 1士 ” 、 3 6… 5 5 . <。 . 。套 1“ · 7 5士 。 · 7 1 < 0。 0 1
口氏l0一
>0一l
一
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一雨 照 组 …3 . 4 8士 。 . 4 2 …一厂一一一 !一成6画 .杯 {一 `禁耍鲁愈:;{豁厂几阵巨竺 ~区〕亘卫三_ _万1 1 2 . 3 5士 0 . 6 2吃
实验组 50 微克 /毫升 { 1 8 . 2 5士 0 . 69 } 一 6 }> 0 . 05 】2 . 57 士 1 .
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不 同药物对 H e L a 细胞生长繁殖的抑制情况也可从制片中看出 。 图版 I , 1 ·及 2 表
示培养 24 及 48 小时的刘照 H e L a 细胞 。 细胞形态正常 , 细脆数目根多 , 培养 48 小时
比 2 4 小 时后 的细胞数更多些 。 而在脱氧三尖杠配碱纯品: D H 一 ( 2 ) 及柠棕酸盐 D H -
4
.
c8 处理后 ( 图版 工 , 3 ~ 6 ) , 在相同面积的视野内 , 细胞数目明显减少 。 加相同浓
度的 5 一 氟尿嚓嚏处理后 (图版 工 , 7 , 8 ) 细视数目虽较对照组少 , 但 与脱氧三尖杉
醋碱的四个视野相比 (图版 工 , 3 ` 6 ) 却多些 , 对细胞形态的影响也较少 。 这也说明
在 48 小时内 5 一 氟尿吃盼对 H e L a 细胞的损伤作用不 及脱氧三尖杠配耐显著 。
正常的 H e L a 细胞属上皮型细胞 。 细胞一般呈不规则的多角形 , 胞核卵园形 , 直径
界于 10 ~ 15 微米之间 , . 有 3 、 5个大小不等的核仁 , 偶见有双核和多核细胞 (图版 工 , ’
1
,
2
, 图版 亚 , 1 ) 。 在加入脱氧三尖杉醋碱后 24 小时 , 细胞在形态上显示有程度
不同的损害现象 , 细胞膜部分被破坏 , 部分胞浆消失 , 胞核 内核仁肿大 , 核质获集 (图
版五 , 2 , 4 ) 。 48 小时后 , 绝大部分细胞死亡 , 从玻片上脱落 , 细胞退变严蚕 。 细胞
膜完全消失 (图版 五 , 3 ) , 胞浆大部消失并出现大量空泡 (图版 L , 3 , 5 ) 核质凝
集 (图版 亚 , 5 ) , 核固缩 (图版 卫 , 3 ) , 核内结构及核仁均模糊不清 ( 图版 1[ , 5 )
说明该药物对 H e L a 细胞的破坏作用十分明显 。
讨 论
为 了对应用细胞培养法筛选数种三尖杉属植物生物碱的可靠性作出估价 , 需要将我
们 的实验所得结 果和国内兄弟单位用实验动物瘤谱筛选药物的结果 以及临床观察作出分
析比较 。
兰 州 」 大 学 学 报 1 9 7 7年 2 2月
三尖杉碱在本实验中 (编号 C S T一 1 , 2 ) 对艾氏腹水癌细胞属作用较低的药物 (见
表三 ) 。 其他单位对其各自提取的三尖杉碱 以相当大的剂量作多种动物瘤谱实验 , 结果
没有抑瘤作用 L ` ’ , 表 明为较低活性药物 。 临床观察 , 三尖 杉碱除对滋叶恶性瘤有一定
疗效外 , 对其他肿瘤疗效不 明显 , 远不及早尖杉总碱的疗效 , 国内外实验治疗资料也认
为三尖杉碱系无效成分 “ “ ) ` , ; ) 。
在本实验 中 , 三尖杉总碱对于 H e L a 细胞和 C S T 一 M (为三尖杉总碱除去三尖彩碱
后的组分 ) 对艾氏腹水癌细胞的增殖均有一定抑制作用 (见表四 , 二 ) , 但不够稳定 。
一般认为在三尖杉总碱中包含着抗癌有效成分 , 动 物 实 验 证 明三 尖杉总碱对大白鼠
W 25 6
( ” )和小白鼠 S 一 18 0 “ “ ’等有一定疗效 。 在临床方面 , 有不少医院已用三尖杉总
碱治疗某些肿瘤和癌症 。
据统计 ( 2 ` ’ 福州地 区肿瘤协作组用三尖杉总碱治疗 28 种共 157 例 中晚期肿瘤 , 总有 -
效率 35 % , 其中对各种淋 巴肉瘤效果较好 , 有效率达 6 0 . 8 % 。 浙江省三尖杉协作小组等
用三尖杉总碱治疗白血病 19 例 , 总有效率 52 . 6 % 。 但由于三尖杉总生物碱的组分 , 含量
较复杂 , 并受品种 、 产地和季节的影响 , 变化较大 , 对提高疗效受到一定限制 “ 7 ’ 。 因
此 , 也可说明三尖杉总碱是不够稳定的 。
脱氧三头杉配硕 纹品 ( L H 一 ( 2) ) 禾脱氧三头彩配砒柠攫酸盐 ( E H 一 4、 s c) 在本
实验 中对于 H e L a 组胞 , 特别是右叉理习8 ,J’ 时跳名沙乡里菠哨万雀把言易上扣制 率 均
高 (见表五 、 六 ) , 作用明显 。 其他研究也证明脱氧三头杉酷碱在安全剂量光围内对动
物移植性肿瘤有较好的疗效 , 且显效剂量范围较宽 ` ’ 吕 ) , 特别是对于小 白鼠淋巴白血病
P 38 8 有显著 疗效 , 对 L 1 2 1 o 也有一定疗效 “ 。 ’ 。 兰州军区总医院对脱氧三尖杉配碱进
行动物实验及临床研究 , 结果对小 白鼠肉瘤 5 1 8 0 和小鼠白血病 L 7 2 1 2均有显著 抑 瘤
作用 。 在临床上应用脱氧三尖杉瞥碱柠檬酸盐 ( D H 一 4 . 8。 ) 抬疗白血病 , 认为有肯定
疗效 ` 2 . ) 。
从以上资料的对比 , 可以着出我们的实验结果和兄弟单位的研究结果基本上是一致
的 , 所以我们认为用细胞培养法筛选三尖杉属植物生物碱是比较可靠的 。 但是根据我们
的初步经验 , 有以下几点值得研究 :
一 、 在正常条件下癌细胞的增殖情况
肿瘤细胞依其生长繁殖的特点不同 ,可分为三类 : 第一类为进行分裂的细胞 , 第二类
为暂时不分裂的细胞 , 但在某种情况下可随时进入分裂状态 , 第三类为永久不分裂的细
胞 , 即趋于溶解 、 死亡 、 吸收的细胞 。 实验证明 , 在分裂期的癌细胞 ( 即第一类细胞 )
对药物敏感性最高 。 即抗癌药物大多作用于增殖期细脸 , 而不作用或较少作用于静止细
胞 (即第二 , 三 类 细胞 ) ` 2 。 , 么 ” 。 因此 ,在体外进行细胞培养的实验中 ,一定要让细胞
生长在适宜的条件下 ,使细胞能够进行旺盛的增殖分裂 , 否则就会影响对药物的敏感性 。
在我们的实验中 , 对照组细胞的多少对研究结果的影响较大 。 可以从表六中看出 ,
脱氧三尖杉醋碱柠檬酸盐 ( D H 4 . s c ) 对 H e L a 细胞本是一种抑制率较高的药物 , 在各
次实验的 4 8小时处理中 , 基本上有显著性或非常显著性差异 , 但在第二次实验里 , 对照
组细胞数目减少到一万左右 , 结果在 4 s,J 、 时备浓度组均无显着性差异 , 这可能是由于对
第 4期 用细胞培养法筛选三尖杉属植物生物碱抗癌作用的初步报告 . 时
照组细胞数目太少的缘故 。 在我们的实验中 , 尽 管细胞的接种数目都控制在 10 万个左
右 , 但发现在培养三天 , 添加药物前 , 细胞咕壁数目相差悬殊 , 凡对照组细胞较少的几
次实验 (见表四 、 六 ) , 细胞贴壁数目也都少 。 这可能是由于培养器皿不够洁净 , 或者
是其他培养条件不适宜 (如 p H 及培养液等 ) , 致使细胞不太健康而影响细 胞贴 壁 所
致 。 因此 , 今后应使对照组细胞数维持一定水平 , 并保持实验期内对照组能正常生长 ,
至少不致使 48 小时的反而少于 24,J 、 时的细胞数 。
二 、 评价药物是否有作用的时间
在我们的实验中 , 评价药物是否有作用的时间 , 应 以药物和细胞接触后刁8小时为标
准 。 三尖杉喊是属于杀伤性药物中的化学活性类 ` 2 ` ’ , 在处理 24 小时后 , 药物作用还不
明显 , 到 4 8小候始可达到杀伤细胞的最大程度 。 我们用 C S T 一 M 处理艾氏腹水癌细胞 ,
用三尖杉总碱 、 脱氧三尖杉醋碱纯品及其柠檬酸盐处理 H e L a 细胞的实验充分说明这一
点 (见表二 、 四 、 五 、 六 ) 。 在这些实验中 , · 24 小时的 P值基本上无显著 性差异 , 而 48
小时的 P 值绝大多数 (表四 、 六 ) 甚至全部 (表二 、 五 ) 均有非常显著性差异和显著性
差异 , 抑制率也较高 。
三 、 对照药物的选择
抗窟药物 依其作用来看 , 可以 分为两大类 : (一 ) 以消灭肿瘤为主的杀伤性药物 ,
(二 ) 通过扶正来消灭或转化肿蜜知咆的庆正药物 。 在杀伤性药物中按其作用性能可分
为化学活性类 , 抗代谢类等 。 现知三尖杉碱系杀伤性药物中的化学活性类 ( 2 ” , 对照药
物 也应选择这类药物 (如氮齐 ) 。 但在我 fr1 开始进行这个实验时 , 对三尖杉属植物生物
碱类药物的性能和作用机制都还不十分清楚 , 而对 5 一氟尿嚓吮的作用机制已很明确 ,
知道它抑制 D N A 的合成是属于抗代谢类的杀伤性药物 , 同时在多种癌庄的治疗止也已
有较好 的疗效 , 因此 , 我们就选用 了 5 一氟尿嚓咤 。 .
四 、 药物剂量
根据朱天锡等人的意见 , 初筛药物所用浓度以 1 0 微克 /毫升为界限 。 如不拟对该药
作进一步研究时 , 不必探求其最低有效浓度 ` 7 , “ 日 ’ 。 因此 , 在我们的实验中 , 也都选择
了这个浓度 。 经过实验发现脱氧三尖杉醋碱对 H e L a 细胞的生长抑制作用明显 , 虽将浓
度稀释至 l 微克 /毫升 , 仍表现佼高的抑制作用 。 今后的工作应将剂量再降低 ,尽可能使
细胞活力维持在贴璧的水平 , 不致脱落太多 , 以便从存活细胞较多的染片中分析这种药
物对细胞分裂的影响 。
根据以上分析 , 我们认为可以用细咆培养法筛选三尖杉属生物碱 , 但必须对实验条
件严加控 制 , 使细胞生长汪盛 , 并采取措施作到同步分裂墙养 , 这样有助于研究药物作
用 的机理 。
抗冲窟药物作用的机理可能包括 以下几个方面 : 抑制蛋白质合成 、 抑制核酸合成 、
抑$l 翘咆漠合成 ; 损害细咆嗅功能 、 阻上细泡 方睡沐 形 成等 ` “ 。 。 而三尖衫属生物碱对
痛绷泡为车用沉里 , 虽已扣寓杀防比药吻 , . 但究竟乍用于什么环节尚末作出确切结论 。
据开充 , 在治宁恶比林巴肃 .付 , 发现 主合 宁后脉巴浩书冲留翘泡昆成少 , 在 富细咆咸少
。 区域 , 剩余者多为分化佼好的成熟淋巴细泡 , 核分裂几乎找不到 , 提示三尖衫总碱以有
6 8全 州 大 学 学 报 1 9 7 7年1 2月
抑制瘤细胞增生的作用 “ “ 、 , 又据三尖杉总碱对小 白鼠艾氏腹水癌的实验证明 , 三尖杉
总碱对癌细胞的有丝分型有明显的抑制作用 “ ” ) 。 从我们的研究中看出 , 三尖杉总碱及
脱氧三尖杉醋碱对 H e L a 细胞的生长均有较高的抑制作用 , 但它是通过什么途径和作用
于细胞周期中的哪一时期 , 还需要从细胞动力学等方面作进一步的研究 。
摘 要
1
、 用细胞培养法筛选三尖杉属植物生物碱是 比较可靠的 。 但对各项有关条件需要
严加控制 , 否则影响结果的准确性 。
2
、 脱氧三尖杉醋碱对 H e L a 细胞的生长有明显抑制作用 , 和动物实验的结果及临
床治疗效果基本一致 , 值得作深入的研究 。
致谢 本研究承蒙兰州军区总医院供给小 一白鼠艾氏腹水癌瘤谱 , 本校化学系供实验
用药 , 特此致谢 !
参 考 资 料
1
、 三尖杉研究协作组 ( 1 9 7 3) 三尖杉研究协作组第二次会议简报 中草药通讯
1 9 7 3 ( 5 )
: 7 4 、 7 6
2
、 用噬菌体法筛选抗癌 药物 医药资料 (赣州 ) 2 : 5 ~ 17 , 1 9 7 4
3
、 青彬等 ( 1 9 7 5 ) , 抗癌药物筛选 中 几 种 肿瘤模型的敏感性的研究 。 科学通
报 2 0 ( 5 ) : 2 4 2一 2 4 6
4
、 谢麟阁 ( 1 9 7 4 ) , 抗癌中草药的快速筛选法 。 中草药通讯 1 9 7 4 ( 4 ) , 42 一 4
5
、 中国医学科学院 , 药物研究所 ( 1 9 7 4) 一种初筛抗肿瘤药物的方法一精原细胞
法 。
肿瘤防治研究 ( 4 ) , 7 2一 80
6
、 韩锐等 ( 1 9 6 2 ) N 一 甲酞溶肉瘤毒素的抗肿瘤作用 肿瘤研究论文集 57 页
7
、 朱天锡 、 吴云翼 ( 1 9 6 3) 关于抗肿瘤药物的研究 皿 、 利用体外培养吉田腹水肉
瘤筛选抗肿瘤药物 。 药学通报 10 ( 6 ) : 3 34 ~ 34 4
8
、 中国医学科学院肿瘤防治研究所细胞生物组 ( 1 9 7 6 ) 人体食道癌上皮细胞株的
建立 。
中华医学杂志 7 期 , 41 2页
9
、 河南省抗肿瘤药物研究协作组 ( 1 9 7 2 ) 中草药抗肿瘤作用筛 选 小 结 (内部资
料 ) 。
1 。 、 吉林医科大学组织胚胎教研室肿瘤研究小组 ( 1 9 7 4 ) 中药紫草 一 五抗癌作用的
研究 : 紫草 一 兀对组织培养 H e L a 细胞 动力学作用初步观察
吉林医科大学恶性肿瘤科研资料 1 9 7 4年 5 月 : 45 、 5 4
1 1
、 兰州大学化学系粗梗科研小组
第 4期 用细胞培养法筛选三尖杉属植物生物碱抗癌作用的初步报告 幻
天水粗概生物碱的初步分离 全 国三尖杉研究协作组第二次会议资料 (福州 )
2 2
、 黄文魁 、 李裕林 、 潘鑫复 (9 27 5 )
脱氧三尖杉醋碱的合成 兰州大学学报 1 9 7 5年 1 期 4 ~5 2
1 3
、 广州地区粗极碱临床协作组 (1 9 7 5)
三尖杉碱治疗恶性肿瘤临床疗效的重新评价
新医学肿瘤研究专辑1 9 7 5 (1 1 ) ` 4 0 ~ 4 2
1 4
、 全 国三尖杉研究协作组 (1 9 7 ) 6
三尖杉属植物生物碱的临床研究
肿瘤防治研究 19 7 6 (1 ) :1 2 ~1 8
1 5
、 浙江省三尖杉研究协作组 (1 9 7 3 )
三尖杉生物碱的实验治疗疗效
全国三尖杉研究协作组第二次会议资料 1 9 7 3 (福州 )
1 6
、 福州地区肿庙防治研究协作组 (1 9 7 2)
三尖杉总生物碱的提取和抗癌疗效观察 中草药通讯 1 9 7 2 (5 ) , : 8 ~ 15
1了、 福州地区肿瘤防治研究协作组 ( 1 9 7 5 )
三尖杉醋碱 H 治疗恶性肿瘤及 自血病的临床观察夕 医学资料 (福州 ) 1 9 7 5 ( 4 ) : “
1 8
、 中国医学科学院药物研究所 ( 1 9 7 5 )
三尖杉醋类生物碱对动物移植性肿瘤的疗效及毒性比较
全 国三尖杉研究协作组第四次会议资料 (海南 )
1 9
、 马广恩等 ( 1 9 7 5 )
三尖杉属生物碱的研究 工三尖杉中抗癌有效成分的分离和签定 。
中草药通讯 1 9 7 5 ( 3 ) ’ 1 4
20
、 中国医学科学院日坛医院内科 、 药物研究所肿瘤组 ( 19 7 5)
抗肿瘤药物手册
2 1
、 王序 ( 1 9 7 4 )
抗肿瘤药物研究近况 化学通报 r 9 74 ( 5 ) , 3。~ 且
2 2
、 上海药物研究所 ( 1 9 7 3 )
抗癌新药推荐临床前实验研究要点 (内部资料 ) 、
2 3
、 福州地区肿瘤防治研究协作组 ( 1 9 7 4 )
三尖杉总生物碱治疗恶性肿瘤 1 57 例的临床观察 肿瘤防治研究 19 7 4 ( . 1 ) 19 , 2 2
2 4
、 中医 中药治疗肿瘤近况 科技消息 1 9 7 6年 5 期 , 54 ~ 56
2 5
、 兰州军区总医院内科 ( 1 9 7 7 )
半合成脱 氧三尖杉醋碱治疗白血病的实验研究及临床应用小结 白血病资料汇编
(内部资料 )
2 6
、
L e i t e r
,
J
. e t a l ( 1 9 6 2 ) S e
r e e n i n g d a t a f r o m t h e C a n e e r
C h e m o t h e r a p y N a t i o n a l S e r v i e e C e n t e r S e r e e n i n g
L a b o r a t o r i e s
.
X
.
C e l l e u l t住 r e e y t o t o x 元e i t y t e s t s . C a n e e r R e s , 2 2 ( 8 ) : 9 3 ,
兰 州 大 学 学 报 1 9 7 7年 2 2月
- ~ ~ ~山 - ~ ~ ~ ~ -~ ~一四 ~一 ,一- ~ ~ ~ - ~ - ~ ~ ~ ~ - ~ ~ , ~ ~ ~ ~一一~ `一2 7 、 M i y a m u r a , s a d a o e t a l ( 19 5 9 ) A n a g a r p l a t e d i f f o s i o n m e th o du s i n g H e L a e e lxs f o r a n t i t u m o u r s e r e e n i n g . A n t i b i o t . a o d C h e爪 o t h e r ·9 ( 8 ) : 4 9 7 一 5 0 02 5、 E a g z e , H . a n d F o l e y , G , E . ( 1 9 5 5 ) s u s e e p t i b i l i t y o f C o l t u r e d
h
u m a n e e l l s t o a n t i t u m o r a g e n t s
。
一
A n n
。
N
.
_
Y
。
A e a d
。
S e i
.
7 6 : 5 3 4 一 5 4 1
图 版 说 明
图版 工 、 不同药物对人体宫颈癌细胞株 ( H e L “ 细胞 ) 细胞数量的影 响 (姬姆萨染
色 ) ( x 1 3 6 )
1
、 培养 24 小时 H e L a 细胞对照 。
2
、 培养 48 小时 H e L a 细胞对照 。
3
、 加脱氧三尖杉醋碱纯品 D H 一 ( 2 ) 1 0 微克 /毫升后 24 小时 。
4
、 加脱氧三尖杉醋碱纯品 D H 一 ( 2 ) 1 0 微克 /毫升后 48 小时 。
5
、 加脱氧三尖杉醋碱柠 朦酸盐 D H 一 4 . sc 1 0 微克 /毫升后 24 小时 。
6
、 加脱氧三尖杉醋碱柠檬酸盐 D H 一 4 . 8c 1 0 微克 /毫升后凌8小时 。
7
、 加 斤 一 氟尿嚓咤 1 0 微克 /毫升后 24 小时 。
8
、 加 5 一 氟尿嗜咤 1 0 微克 /毫升后理8小时 。
图版 江 , 脱氧三尖杉醋碱对人体宫颈癌细胞株细胞形态的影响 ( 姬姆萨染色 )
1
、 培养 2 4小时 H e L a 袖胞对照 ( x 6 5 0 )
2
、 加脱氧三尖杉醋碱纯品 D H 一 ( 2 ) 1 0 微克 /毫升后 2列 、 时 。
3
、 加脱氧三尖杉醋碱纯品 D H 一 ( 2 ) 1 0 微克 /毫升后 4 8’J 、 时 。
4
、 加脱氧三尖杉醋碱柠檬酸盐 D H 一 4 . c8 1 0 微克 /毫升后 2 4小时
5
、 加脱氧三尖杉醋碱柠檬酸盐 D H 一 4 . c8 1 0 微克 /毫升后 48’J 、 时
( x 6 8 0 )
(
X 3 4 0 )
( x 6 8 0 )
( 又 6 8 0 )
、 第 4 期 用细胞培氛释 去筛选三尖杉属植物生物碱抗瘩作用的初步报告 71
了
日版 I
2 7兰 州 大 学 学 报 1 9 7 7年 12月
耳
_声
图版 亚
, , 叹 , 甲嘴足且叭 ,